英夫力西治療炎癥性腸病與腸道菌群改變的相關(guān)性研究

梅晨雪，王恩銘揚(yáng)，孫 妍，林連捷，譚 悅，王東旭，鄭長青*

英夫力西治療炎癥性腸病與腸道菌群改變的相關(guān)性研究

梅晨雪1，王恩銘揚(yáng)2，孫 妍1，林連捷1，譚 悅1，王東旭1，鄭長青1*

目的 探討使用英夫力西(IFX)治療炎癥性腸病與腸道菌群改變的關(guān)系。方法 收集104例炎癥性腸病患者，其中潰瘍性結(jié)腸炎(UC)52例，克羅恩病(CD)52例，使用英夫力西治療前后測(cè)定腸道菌群數(shù)量。另取30例健康志愿者新鮮糞便，定量培養(yǎng)進(jìn)行菌群分析，同時(shí)測(cè)定三組C反應(yīng)蛋白、血沉兩項(xiàng)數(shù)據(jù)結(jié)果,分析其與腸道細(xì)菌組成變化的相關(guān)性。結(jié)果 治療后，UC組酵母菌(1.09±0.17)、腸球菌(5.01±0.36)和消化球菌(3.99±0.23)的數(shù)量顯著下降，乳酸桿菌(7.95±0.69)的數(shù)量顯著上升(P<0.01)；CD組酵母菌(1.06±0.19)、腸球菌(4.91±0.37)和消化球菌(3.90±0.19)的數(shù)量顯著下降，乳酸桿菌(8.07±0.76)的數(shù)量顯著上升(P<0.01)。治療后，UC組CRP(10.33±4.64)、ESR(9.10±4.11)水平降低(P<0.01);CD組CRP(7.31±4.68)、ESR(9.27±3.13)水平降低(P<0.01)。結(jié)論 使用英夫力西治療炎癥性腸病患者后，酵母菌、腸球菌和消化球菌數(shù)量顯著降低，乳酸桿菌數(shù)量顯著增加，恢復(fù)到正常水平，炎癥指標(biāo)CRP和ESR下降，臨床癥狀得到有效緩解。

英夫力西；炎癥性腸病；腸道菌群；炎性指標(biāo)

0 引言

炎癥性腸病(Inflammatory bowel disease，IBD)是生活環(huán)境、遺傳易感性、感染及免疫等因素共同作用下引發(fā)的一組慢性非特異性腸道炎癥性疾病，主要包括潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative colitis,UC)和克羅恩病(Crohn′s disease,CD)[1]。其中，潰瘍性結(jié)腸炎的主要病變區(qū)在黏膜下層和腸黏膜；克羅恩病的病變部位以回腸末端和結(jié)腸為主，多呈節(jié)段性、非對(duì)稱性分布[2-3]。目前，IBD的治療仍然以藥物為主，但一些激素類的藥物對(duì)于難治性結(jié)腸病沒有很好的療效，甚至出現(xiàn)激素依賴[4-5]。近年來，生物分子靶向藥物的成功研制，特別是英夫力西的應(yīng)用已經(jīng)成為IBD患者避免切除腸管的挽救性治療方法之一[6]。腸道菌群與IBD的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，成為研究熱點(diǎn)之一[7-9]。研究IBD患者腸道菌群的改變情況，可以為英夫力西的療效提供佐證，并為后續(xù)的治療策略和進(jìn)行預(yù)后評(píng)估提供參考。本研究選取104例IBD患者作為研究對(duì)象，分析英夫力西的治療效果和腸道菌群改變的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 選取2013年5月-2015年5月我院收治的IBD患者104例，均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化病學(xué)分會(huì)炎癥性腸病協(xié)作組在2012年制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)[10]。排除標(biāo)準(zhǔn)：①嚴(yán)重心腦血管疾病；②入組前4周服用益生菌制劑、抗生素以及3個(gè)月內(nèi)服用過與本次治療相同藥物的患者；③自身免疫性疾?。虎芑加心c道腫瘤疾病。其中UC患者52例，男35例，女17例，平均年齡(38.92±9.71)歲，平均患病時(shí)間(3.52±0.98)年；CD患者52例，男37例，女15例，平均年齡(40.33±6.49)歲，平均患病時(shí)間(3.42±0.96)年。另選擇30例健康志愿者，男19例，女11例，內(nèi)鏡及其他檢查均正常，并滿足4周內(nèi)未服用過益生菌或其他相似的藥物。

1.2 腸道菌群檢測(cè) 于治療前1天及治療后40周檢測(cè)患者的腸道菌群指標(biāo)。①采樣：將無菌條件下獲得的新鮮糞便(約5 g)迅速置入?yún)捬豕迌?nèi)送檢；②培養(yǎng)基：酵母菌和腸球菌屬于需氧型細(xì)菌，使用SB和EC培養(yǎng)基；乳酸桿菌和消化球菌屬于厭氧性細(xì)菌，使用LC和PS培養(yǎng)基；③檢測(cè)方法：采用日本光岡法檢測(cè)[11]，并應(yīng)用細(xì)菌三級(jí)鑒定法將細(xì)菌鑒定到屬的水平，在37 ℃培養(yǎng)72 h后，計(jì)算菌群數(shù)量(CFU/g)，菌落數(shù)據(jù)結(jié)果以對(duì)數(shù)方式表示。

1.3 治療方案 UC組和CD組給予英夫力西5 mg/kg，0、2、6時(shí)每8 h靜點(diǎn)1次，于2～4周檢測(cè)血象和肝、腎功能。于用藥前1周和用藥治療40周后進(jìn)行CRP和ESR檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)分析軟件處理，治療前腸道菌群數(shù)據(jù)資料的比較采用單因素方差分析；治療前后，同組腸道菌群和炎癥指標(biāo)數(shù)據(jù)變化應(yīng)用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)；炎癥指標(biāo)數(shù)據(jù)資料的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。相關(guān)系數(shù)r<0.4為弱相關(guān)關(guān)系，0.4≤r<0.7為中等相關(guān)關(guān)系，r≥0.7為強(qiáng)相關(guān)關(guān)系。

2 結(jié)果

2.1 治療前菌群數(shù)量差異 如表1所示，與對(duì)照組相比，UC組酵母菌(2.30±0.13)、腸球菌(6.75±0.10)和消化球菌(6.33±0.11)數(shù)量顯著增加(P<0.05)，乳酸桿菌(5.56±0.72)數(shù)量顯著減少(P<0.05)；與對(duì)照組相比，CD組酵母菌(2.71±0.19)、腸球菌(6.94±0.11)和消化球菌(6.32±0.10)數(shù)量顯著增加(P<0.05)，乳酸桿菌(4.56±0.75)數(shù)量顯著減少(P<0.05)。

表1 英夫力西治療前各組腸道菌群數(shù)量比較

2.2 治療前炎癥指標(biāo)組間差異 如表2所示，與對(duì)照組相比，UC組CRP(13.44±4.63)和ESR(22.75±6.99)顯著升高(P<0.05)；CD組CRP(12.88±4.71)和ESR(23.6±5.94)顯著升高(P<0.05)。

表2 英夫力西治療前各組炎癥指標(biāo)比較

2.3 治療后菌群數(shù)量變化 如表3所示，治療后，UC組酵母菌(1.09±0.17)、腸球菌(5.01±0.36)和消化球菌(3.99±0.23)的數(shù)量顯著下降，乳酸桿菌(7.95±0.7)的數(shù)量顯著上升(P<0.01)；在CD組中，酵母菌(1.06±0.19)、腸球菌(4.91±0.37)和消化球菌(3.9±0.19)的數(shù)量顯著下降，乳酸桿菌(8.07±0.76)的數(shù)量顯著上升(P<0.01)。此外，應(yīng)用英夫力前后，腸道菌群數(shù)量的變化存在顯著相關(guān)關(guān)系。且UC組和CD組患者在應(yīng)用英夫力西治療后，腸道菌群數(shù)量與對(duì)照組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.4 治療后炎癥指標(biāo)的變化 如表4所示，治療后，UC組中CRP(10.33±4.64)、ESR(9.1±4.11)水平顯著降低(P<0.01);CD組CRP(7.31±4.68)、ESR(9.27±3.13)水平后顯著降低(P<0.01)。且治療后的數(shù)值均與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此外，應(yīng)用英夫力西和CRP以及ESR數(shù)值下降之間，存在顯著相關(guān)關(guān)系(r>0.7)。

3 討論

IBD是一種慢性非特異性炎癥性疾病,雖然其患病機(jī)制尚不明確,但多項(xiàng)研究表明，遺傳、環(huán)境、腸道菌群穩(wěn)定性的改變和免疫應(yīng)答異常等多種因素相互作用可導(dǎo)致IBD的發(fā)生[12-13]。

表3 英夫力西治療后腸道菌群數(shù)量變化

表4 應(yīng)用英夫力西治療后各組炎癥指標(biāo)比較

英夫力西作為IBD治療的有效手段越來越得到臨床工作者的重視，Rutgeerts等[14]研究表明，英夫力西治療UC和CD的療效無顯著差異，與本研究一致。近年來，國外學(xué)者相繼發(fā)表了多篇英夫力西有效治療IBD的報(bào)道[15-17]。目前，關(guān)于英夫力西的臨床治療數(shù)據(jù)顯示，英夫力西具有較好的安全性以及較為平穩(wěn)的不良反應(yīng)率，且無嚴(yán)重的不良反應(yīng)發(fā)生[18-20]。為了減少不良反應(yīng)，在英夫力西治療之前，應(yīng)避免對(duì)過敏體質(zhì)或腎功能障礙的患者用藥；同時(shí)要注意對(duì)活動(dòng)性肝炎和結(jié)核病患者的篩查，根據(jù)血藥濃度調(diào)整用藥劑量。

本研究所檢測(cè)的4種細(xì)菌中，酵母菌、腸球菌和消化球菌屬于條件致病菌，乳酸桿菌屬于益生菌。從菌群數(shù)量的角度可以發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，UC組患者酵母菌、腸球菌和消化球菌數(shù)量顯著增加，乳酸桿菌數(shù)量顯著減少；CD組呈現(xiàn)相同趨勢(shì)。腸道的菌群組成與健康的對(duì)照組相比發(fā)生了很大的變化，其中酵母菌、腸球菌和消化球菌條件致病菌的增多，使得機(jī)體的免疫功能下降，腸黏膜的屏障功能減弱，并破壞了腸道原有的平衡。而乳酸桿菌的減少，更使得腸黏膜的屏蔽和恢復(fù)功能減弱，此結(jié)果同國外的一些研究結(jié)果一致[21-22]。因此，腸道細(xì)菌組成的改變對(duì)機(jī)體免疫功能和能量代謝有著重要的作用，有研究者用正常志愿者的腸道菌群移植到重癥腸病患者的腸道內(nèi)來解決腸道菌群紊亂的問題，取得了良好的效果[23]。

本研究采用CRP和ESR作為評(píng)估IBD病情的指標(biāo)[24]，用藥前的炎癥指標(biāo)結(jié)果顯示，IBD患者酵母菌、腸球菌等致病菌數(shù)量較健康組有顯著增加，過多的致病菌會(huì)產(chǎn)生大量的代謝產(chǎn)物和累積過多的毒素，導(dǎo)致上皮細(xì)胞受損，腸黏膜屏蔽功能減弱，引起機(jī)體的炎癥反應(yīng)。

從應(yīng)用英夫力西、炎癥指標(biāo)和菌群數(shù)量的相關(guān)性來看，三者普遍相關(guān)性較強(qiáng)，相關(guān)系數(shù)r均>0.7。使用英夫力西治療IBD后，酵母菌、腸球菌和消化球菌數(shù)量顯著降低，乳酸桿菌數(shù)量顯著增加，與健康的對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，炎癥指標(biāo)CRP和ESR顯著下降，臨床癥狀得到有效的緩解。

Danese[25]等的研究結(jié)果表明，IBD治療的理想目標(biāo)是使臨床癥狀得到有效和快速的緩解，完全治愈不復(fù)發(fā)，恢復(fù)正常的生理功能。近年來，英夫力西等分子靶向藥物在難治性IBD的治療中取得了理想的治療效果，但由于價(jià)格和不良反應(yīng)等因素，部分患者無法使用。本研究顯示，英夫力西對(duì)于腸道菌群紊亂有良好的治療效果，同時(shí)可以降低炎癥反應(yīng)，未來可以進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行研究，并探索其不良反應(yīng)的發(fā)生規(guī)律。

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Correlation between changes of intestinal flora and infliximab as therapy in patients with inflammatory bowel disease

MEI Chen-xue1，WANG En-ming-yang2，SUN Yan1，LIN Lian-jie1，TAN Yue1，WANG Dong-xu1，ZHENG Chang-qing1*

(1. Shengjing Hospital of China Medical University,Shenyang 110022,China;2.Basic Medical College of China Medical University,Shenyang 110112,China)

Objective To investigate the correlation between infliximab treatment for inflammatory bowel disease (IBD) with the changes in intestinal flora.Methods We collected 104 IBD patients (including 52 cases with ulcerative colitis and 52 cases with Crohn′s disease) and 30 healthy volunteers.The intestinal flora was analyzed.The levels of CRP and ESR were detected to assess the correlation between intestinal flora and inflammatory markers.Results After treatment, the number ofSaccharomyces(1.09±0.17),Enterrococcus(5.01±0.36) andPeptococcus(3.99±0.23) decreased significantly, while that ofLactobacillus(7.95±0.69) increased markedly in patients with UC (P<0.01); the number ofSaccharomyces(1.06±0.19),Enterrococcus(4.91±0.37) andPeptococcus(3.90±0.19) decreased significantly,while that ofLactobacillus(8.07±0.76) increased markedly in patients with CD (P<0.01).The levels of CRP and ESR decreased significantly in UC patients(10.33±4.64,9.10±4.11,P<0.01) and CD patients (7.31±4.68, 9.27±3.13,P<0.01).Conclusion Infliximab therapy can decrease the number ofSaccharomyces,EnterrococcusandPeptococcus,while increase the number ofLactobacillusin patients with IBD,and decreased the levels of CRP and ESR,thus relieving the clinical symptoms effectively.

Infliximab;Inflammatory bowel disease;Intestinal flora;Inflammatory markers

2016-09-21

1.中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院，沈陽 110022；2.中國醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，沈陽 110122

遼寧省自然科學(xué)基金(2014021083)

10.14053/j.cnki.ppcr.201704008

*通信作者