一種處理脂血標(biāo)本的脂蛋白脂肪酶方法

崔曉蕾 位冒冒

一種處理脂血標(biāo)本的脂蛋白脂肪酶方法

崔曉蕾 位冒冒

目的 探討脂蛋白脂肪酶處理脂血標(biāo)本的效果，及其對關(guān)鍵生化指標(biāo)的影響。方法 分別向健康人混合血清（A組）中加入一定比例脂肪乳，制備成輕（B組）、中（C組）、重（D組）度脂血標(biāo)本，使用脂蛋白脂肪酶（LPL）處理4組標(biāo)本，測定各組標(biāo)本7項(xiàng)生化指標(biāo)（TG、AST、ALT、TP、TBil、LDH、CK-MB），比較組間和脂肪酶處理前后差異；并用臨床高脂血癥患者（E組）混合血清驗(yàn)證該方法。結(jié)果 脂肪乳會干擾C組和D組的生化指標(biāo)檢測，與A組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0. 05）；C組與D組經(jīng)LPL處理后，除TG外生化指標(biāo)均較直接測定組降低（P＜0.05）；LPL對D組的處理效果明顯優(yōu)于生理鹽水稀釋法（P＜0.05）；LPL使E組脂血標(biāo)本處理前后檢測結(jié)果的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 脂蛋白脂肪酶處理脂血標(biāo)本，能有效消除脂血對標(biāo)本生化指標(biāo)的干擾，且不影響甘油三酯的測定，是一種簡單有效的脂血標(biāo)本處理方法。

脂蛋白脂肪酶 脂血 甘油三酯

脂血主要是由血清中乳糜微粒增多和甘油三酯升高引起，可影響光的透射和散射，從而對利用比色法和比濁法原理進(jìn)行檢測的項(xiàng)目產(chǎn)生嚴(yán)重干擾，導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性降低，是日常生化檢驗(yàn)工作中最常見的標(biāo)本影響因素之一[1]。目前，針對消除脂血干擾的方法主要有沉淀法、有機(jī)溶劑提取法、高速離心法和鹽水稀釋法等，但這些處理方法均不能完全解決脂血對檢驗(yàn)結(jié)果的干擾問題。脂蛋白脂肪酶（lipoprotein lipase，LPL）是參與體內(nèi)脂質(zhì)和脂蛋白代謝的主要成分之一，能催化血清乳糜微粒（CM）和極低密度脂蛋白（VLDL）中的甘油三酯（TG）分解，有報(bào)道該酶活性的降低可引起高脂血癥[2]。故此本實(shí)驗(yàn)在前期研究基礎(chǔ)上，應(yīng)用脂蛋白脂肪酶前處理脂血標(biāo)本，觀察對脂血標(biāo)本的處理效果及其對標(biāo)本其他關(guān)鍵生化指標(biāo)的影響，嘗試建立一種簡單可行的處理脂血方法。

材料與方法

1 標(biāo)本來源 隨機(jī)選取本院健康體檢者60例，其中男性34例，女性26例；年齡26～65歲，平均年齡46歲。另隨機(jī)選取本院高脂血癥（Ⅰ型）患者60例，其中男性27例，女性33例；年齡38～69歲，平均年齡53歲；患者于采血前3 d內(nèi)未服任何降脂藥物。研究對象均禁食12 h取清晨靜脈血3 ml，4 000 r/min離心15 min留取血清，標(biāo)本要求無溶血、黃疸，將上述血清標(biāo)本充分混合，備用。

2 儀器與試劑 Olymus AU2700型全自動生化分析儀及相關(guān)配套試劑，脂蛋白脂肪酶（≥2 000 U/ L）購自北京博艾爾科技有限公司，甘油三酯（脂肪乳注射液，主要成分：精制大豆油100 g、甘油25 g、卵磷脂12 g，加水至1 000 ml）購自華瑞制藥有限公司。

3 脂血模型制備和標(biāo)本分組 全部健康體檢者混合血清外觀清亮，為正常對照組（A組）。取A組血清，等分為4份，其中3份分別加入與血清體積比為1∶100、1∶30、1∶20的脂肪乳，充分混勻后制成血清外觀為輕度混濁（B組）、中度混濁（C組）和重度混濁（D組）。高脂血癥患者混合血清外觀混濁（E組）。留取以上各組血清備用。

4 脂肪乳對正常血清標(biāo)本的影響 對Olymus AU2700型全自動生化分析儀進(jìn)行定標(biāo)和校準(zhǔn)，分別測定4組血清的TG值和生化指標(biāo)AST、ALT、 TP、TBil、LDH、CK-MB，根據(jù)加入脂肪乳體積換算最終結(jié)果，每項(xiàng)結(jié)果重復(fù)測量3次。

5 LPL對各組血清標(biāo)本的影響 脂蛋白脂肪酶試劑（0.5 mg/ml）分別與各組血清以1∶50混合，充分混勻，置37℃水浴30 min；再分別測定各組血清的TG、AST、ALT、TP、TBil、LDH、CKMB，根據(jù)加入脂肪乳體積換算最終結(jié)果，每項(xiàng)結(jié)果重復(fù)測量3次。通過比較LPL處理組與直接測定組，觀察脂蛋白脂肪酶對各組血清標(biāo)本生化指標(biāo)測定的影響。

6 LPL酶解法與生理鹽水稀釋法處理血清標(biāo)本的效果比較 觀察D組內(nèi)LPL法與生理鹽水（NS）稀釋法處理血清的效果，比較兩法消除脂血干擾的情況。生理鹽水稀釋法是血清標(biāo)本與生理鹽水以1∶9混合[3]。每項(xiàng)結(jié)果重復(fù)測量3次，所測定的結(jié)果需根據(jù)稀釋倍數(shù)進(jìn)行換算。

7 LPL酶解法對患者脂血標(biāo)本的影響 通過測定LPL酶解法對脂血標(biāo)本（E組）各項(xiàng)指標(biāo)的影響，觀察LPL酶解法在實(shí)際檢驗(yàn)工作中的應(yīng)用，每項(xiàng)結(jié)果重復(fù)測量3次。

8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPPS 22.0軟件，定量數(shù)據(jù)用±s表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 脂肪乳對正常血清標(biāo)本的影響 在健康人混合血清標(biāo)本中，B組的各項(xiàng)指標(biāo)幾乎不受脂血的影響，與A組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）； C組的各項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果與A組相比均有一定程度的升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；D組的各項(xiàng)指標(biāo)表明，血清中較高濃度的TG會嚴(yán)重干擾其他生化指標(biāo)，與A組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（見表1）。

2 LPL對各組血清標(biāo)本的影響 各組血清經(jīng)過LPL的處理，B組、C組和D組血清肉眼外觀由渾濁變得清亮，處理前后各組TG水平的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。除TG外，A組與B組血清的其他生化指標(biāo)均無明顯變化（P＞0.05），表明LPL并不會影響正常血清標(biāo)本生化指標(biāo)，能夠保持整個(gè)反應(yīng)體系的穩(wěn)定。C組與D組血清經(jīng)LPL處理后，其他各項(xiàng)指標(biāo)均較各自組內(nèi)直接測定值降低（P＜0.05），與A組處理或未處理血清相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），提示LPL可較好地消除脂血對標(biāo)本生化指標(biāo)的干擾（見表1）。

3 LPL酶解法與生理鹽水稀釋法的效果比較 LPL酶解法與生理鹽水稀釋法處理D組血清，生理鹽水稀釋法與直接測定法測定指標(biāo)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；生理鹽水稀釋法與LPL酶解法的差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0. 05）（見表1）。

4 LPL酶解法對脂血標(biāo)本的影響 LPL處理與直接測定法相比，TG的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而其他各項(xiàng)指標(biāo)均出現(xiàn)一定變化（P＜0.05）。表明LPL酶解法處理實(shí)際檢驗(yàn)工作中的脂血標(biāo)本，能一定程度上降低脂血對檢測指標(biāo)的干擾（見表2）。

表2 LPL酶解法對高脂血標(biāo)本（E組）的影響

討 論

隨著我國步入老齡化社會以及人們生活水平的不斷提高，高脂血癥人群日益增多；另外，以靜脈注射脂肪乳維持營養(yǎng)的患者也逐年增加。因此脂血標(biāo)本在生化檢驗(yàn)工作中越來越常見。脂血標(biāo)本中存在大量的CM和VLDL懸浮顆粒，主要成分是甘油三酯，這些懸浮顆粒通過影響光的透射和散射，對生化檢驗(yàn)的許多指標(biāo)造成一定干擾，導(dǎo)致結(jié)果的準(zhǔn)確性下降。

隨著生化儀器性能的提高和檢驗(yàn)方法學(xué)的進(jìn)步，已經(jīng)可以使用雙波長的方法排除輕、中度脂血對檢測指標(biāo)的影響，但重度脂血仍會對檢驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生嚴(yán)重干擾[4]。因此，簡單有效的去干擾方法對生化檢驗(yàn)工作具有重要意義。消除脂血干擾的方法主要有沉淀法[5，6]、有機(jī)溶劑提取法[7]、高速離心法[8]和鹽水稀釋法[3]等，這些方法都是根據(jù)脂血標(biāo)本的不同特性設(shè)計(jì)的，存在各自的優(yōu)缺點(diǎn)。沉淀法是利用磷鎢酸鎂試劑和聚乙二醇-硫酸葡聚糖試劑，結(jié)合血清中乳糜微粒形成沉淀，使ALT、AST、ALP等指標(biāo)得到明顯糾正，但是標(biāo)本的體積被放大了4倍，且未對實(shí)驗(yàn)誤差進(jìn)行評估。有機(jī)溶劑提取法是利用乙醚、氯仿等，直接與血清混合，提取脂血標(biāo)本中的TG成分，對ALT、AST、TP、Cr等指標(biāo)效果較好，但乙醚會干擾血清中的成分，特別是對血清中酶的活性產(chǎn)生嚴(yán)重干擾。高速離心法是利用脂血標(biāo)本成分的沉降系數(shù)不同而進(jìn)行物理分離的方法，方便快速，然而設(shè)備價(jià)格昂貴，無法普及。鹽水稀釋法將生理鹽水與標(biāo)本按一定比例稀釋后測定，整個(gè)反應(yīng)體系能保持穩(wěn)定，脂血的濁度會明顯改善，即TG濃度降低，對其他指標(biāo)的干擾相對減弱。但該方法仍不能完全消除脂血的干擾，一方面會放大實(shí)驗(yàn)誤差，另一方面可能會使其他指標(biāo)被稀釋后的濃度超出各自的線性范圍。

脂蛋白脂肪酶（lipoprotein lipase，LPL）是由脂肪細(xì)胞、心肌細(xì)胞和骨骼肌細(xì)胞等實(shí)質(zhì)細(xì)胞的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)合成的一種糖蛋白，含3%～ 8%碳水化合物，是參與體內(nèi)脂質(zhì)和脂蛋白代謝的關(guān)鍵酶。LPL主要催化血清CM和VLDL中的TG分解，生成脂肪酸和甘油兩種代謝產(chǎn)物。本實(shí)驗(yàn)在前期研究基礎(chǔ)上，根據(jù)LPL分解TG特性，選取TG、AST、ALT、TP、TBil、LDH、CK-MB這7個(gè)指標(biāo)，從新的角度觀察LPL處理脂血標(biāo)本的效果。結(jié)果顯示，在健康人血清標(biāo)本中加入甘油三酯替代品脂肪乳后，中、重度渾濁的脂血均出現(xiàn)生化檢測結(jié)果升高，提示中、重度脂血均可影響生化指標(biāo)的測定。C組和D組經(jīng)LPL處理后，生化指標(biāo)與A組對照，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），提示LPL不僅有良好的除脂效果，還能夠基本保持整個(gè)反應(yīng)體系的穩(wěn)定性。與生理鹽水稀釋法相比，LPL對重度脂血標(biāo)本的處理效果優(yōu)于生理鹽水稀釋法，這可能與生理鹽水稀釋標(biāo)本放大誤差，及其本身無法徹底消除重度脂血的影響有關(guān)。LPL酶解法對患者脂血標(biāo)本的影響結(jié)果顯示，LPL分解TG的方法可能在生化檢驗(yàn)的實(shí)際工作中有一定的應(yīng)用價(jià)值，在不影響TG檢測的前提下，能排除高脂血對其他生化指標(biāo)檢測的干擾。從使用酶法測定TG的檢測原理分析，因?yàn)長PL分解TG后生成甘油，并不影響TG指標(biāo)的后續(xù)反應(yīng)及測定TG的分解產(chǎn)物[9]。因此應(yīng)用LPL方法處理標(biāo)本，并不會影響標(biāo)本中TG指標(biāo)的測定結(jié)果，此點(diǎn)優(yōu)于其他脂血處理方法。

綜上所述，LPL通過分解脂血標(biāo)本中的TG成分，同時(shí)消除脂血對部分生化指標(biāo)檢測造成的影響，保證了整個(gè)反應(yīng)體系基本穩(wěn)定[10]。但是血清標(biāo)本成分十分復(fù)雜，LPL對更多生化指標(biāo)的影響需要進(jìn)一步驗(yàn)證。

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Lipoprotein Lipase Treatment Effect on Biochemical Indicators of Lipemia Samples

CUI Xiao-lei，WEI Mao-mao.
Department of Quality Control，Anyang Blood Center 455000

Objective To explore the effects of lipoprotein lipase on biochemical indicators in lipemia samples. Methods Simulated low，moderate and high lipemia were made by adding the triglyceride into normal sera, TG，AST，ALT，TP，TBil，LDH and CK-MB were detected following lipoprotein lipase treatments. Results No significant difference was seen between the samples of lipoprotein lipase treatments and the sera control（P＞0.05）. The method of lipoprotein lipase treatment was better than that of normal saline dilution in detection of severe lipemia（P＜0.05）. lipoprotein lipase treatment showed a potential in practical detection of severe lipemia （P＜0.05）. Conclusion Lipoprotein lipase treatment benefits to reducing the interference of lipemia but has not obvious impact on triglyceride in serum detection.

Lipoprotein lipase Lipemia Triglyceride

R446.1

A

1671-2587（2017）02-0154-04

2016-09-20）

（本文編輯：王虹）

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.02.018

455000 河南省安陽市中心血站質(zhì)控科（崔曉蕾）；河南省安陽市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科（位冒冒）

崔曉蕾（1983–），女，河南安陽人，主管技師，學(xué)士，主要從事臨床生化檢驗(yàn)工作，（Tel）13569076866。

位冒冒，男，主管技師，學(xué)士 ，主要從事臨床生化研究工作，（E-mail)707443664@qq.com。