飼料中鹽酸克倫特羅的測(cè)定

宋紅霞

[摘 要] 目的：建立飼料中鹽酸克倫特羅的檢測(cè)方法。本文對(duì)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《飼料中鹽酸克倫特羅的測(cè)定-高效液相色譜法》中色譜條件和對(duì)照品處理進(jìn)行改進(jìn)，然后按標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行樣品處理。結(jié)果證明，該法無論是峰形、信號(hào)、還是分離效果均達(dá)到滿意程度。

[關(guān)鍵詞] 高效液相色譜法 鹽酸克倫特羅 飼料

[中圖分類號(hào)] S816 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1003-1650 （2016）12-0087-01

鹽酸克倫特羅是腎上腺類神經(jīng)興奮劑，被添加到動(dòng)物飼料中用于增加動(dòng)物的瘦肉率，故又稱瘦肉精。人類長(zhǎng)期食用含有鹽酸克倫特羅的肉類會(huì)出現(xiàn)中毒，危害極其嚴(yán)重。因此，國(guó)家為從源頭上扼制，便于2002年9月10日起出臺(tái)了相關(guān)的法律法規(guī)，禁止在飼料和飲用水中使用鹽酸克倫特羅，并在相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定為不得檢出成分。嚴(yán)格控制飼料中鹽酸克倫特羅的含量，直接關(guān)系到人們的生命健康安全。但是，目前的一些檢測(cè)方法鹽酸克倫特羅主成分峰信號(hào)小，甚至檢測(cè)不到，并且峰形差，采取本文改進(jìn)的方法測(cè)定，信號(hào)大，峰形尖銳，測(cè)定效果好。

1 材料

1.1 儀器設(shè)備

高效液相色譜儀：UltiMate 3000；紫外檢測(cè)器。電子天平：型號(hào)FA2004B，d=0.1mg。超聲波清洗器：HS3120型。高速離心機(jī)：TG16-WS型。電熱恒溫水浴鍋：DZKW-3-4型。其它：實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備。樣品：市售配合飼料

1.2 試劑

鹽酸克倫對(duì)照品：由國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心提供。編號(hào)：BW8001 CWI020；純度：99.0%±0.8%；規(guī)格：0.1g；批號(hào)：T150026，有效期至2018年11月。

甲醇、乙腈均為色譜純，其它試劑均為分析純。

所用水為符合GB/T6682的一級(jí)水。

1.3 固相萃取小柱（SPE）

規(guī)格為3mL的Supelclean LC-WCX SPE固相萃取小柱

2 方法

2.1 色譜條件

色譜柱：Acclaim C18 柱，粒度 5um ，規(guī)格 4.6×150mm。

流動(dòng)相：甲醇：乙腈：水（含1+1磷酸溶液0.5mL，PH值在3～4之間）=100：50：350，出峰時(shí)間在5分鐘左右；檢測(cè)波長(zhǎng)：243nm；進(jìn)樣量20uL；溫度：30℃；流速：1.00mL/min。

2.2 鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

2.2.1鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液200ug/mL：稱取在P205干燥器中干燥53小時(shí)的鹽酸克倫特羅對(duì)照品0.0100g，置50mL量瓶中，加0.02mol/L的鹽酸溶液至刻度，搖勻。

2.2.2鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)工作液2.00ug/mL：吸取1.00mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液至100mL量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻。

2.3 樣品溶液的制備：稱取已磨細(xì)的試樣5.0000g置150mL的三角瓶中，加入0.5%的偏磷酸溶液50.00mL并搖勻，超聲提取15min，搖勻，靜置，取上層液離心10min，轉(zhuǎn)速4000r/min。吸取上清液10.00mL，置150mL分液漏斗中，用2mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)PH值至11～12，放置5分鐘，檢查PH值，如降低，需再加堿調(diào)節(jié)。溶液分別用30mL和25mL乙醚萃取兩次，令萃取液通過裝有無水硫酸鈉的定量濾紙，過濾至50mL量瓶中，用少許乙醚淋洗分液漏斗和無水硫酸鈉，并用乙醚定容至刻度。吸取25.00mL于50mL燒杯中，置通風(fēng)櫥內(nèi)、低于70℃水浴上蒸干，殘?jiān)苡?.00mL鹽酸溶液（0.02mol/L），取1.00mL置于預(yù)先已分別用1mL甲醇和1mL去離子處理過的SPE小柱上，用注射器稍稍加壓，使其過柱速度不超過1mL/min，再先后分別用1mLSPE淋洗液-1（含2%氨水的5%甲醇水溶液）和淋洗液-2（含2%氨水的30%甲醇水溶液）淋洗，最后用甲醇洗脫，洗脫液置（70±5）℃加熱塊或沙浴上，用氮?dú)獯蹈?。于凈化、吹干的樣品殘?jiān)屑尤?.00mL鹽酸溶液（0.02mol/L），充分振搖超聲，使殘?jiān)芙?，過0.45um濾膜，上機(jī)測(cè)定。

3 結(jié)論

3.1 流動(dòng)相比例的選擇：當(dāng)以甲醇+水=45+55為流動(dòng)相（一）時(shí)，鹽酸克倫特羅主色譜峰峰形不好，且信號(hào)差，易與雜峰相混甚至被掩蓋；當(dāng)以乙腈+甲醇+水=120+60+320為流動(dòng)相（二）時(shí)，出峰時(shí)間在3分鐘左右，峰形、信號(hào)、分離度雖好，但在做樣品時(shí)，樣品峰與雜峰呈未分離或分離差的狀態(tài)，故選擇乙腈+甲醇+水=100：50：350（三）的比例，出峰時(shí)間在5分鐘左右，能獲得較好的峰形、信號(hào)及分離度。

3.2 精密度的測(cè)定：

取標(biāo)準(zhǔn)工作液以20uL自動(dòng)重復(fù)進(jìn)樣5次，峰面積分別為：1.2948、1.2941、1.2921、1.2917、1.2914，計(jì)算RSD為0.16%，說明該方法重現(xiàn)性好。

3.3 線性關(guān)系的考察：精密移取標(biāo)準(zhǔn)工作液1.25、2.5、5.0、10.0、25.0、50.0mL，以流動(dòng)相稀釋至100mL，得到濃度為0.025、0.05、0.100、0.200、0.500、1.00ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，并作空白。 以20uL分別自動(dòng)進(jìn)樣2次，以峰面積Y為縱座標(biāo)，濃度X為橫座標(biāo)，得到曲線方程：Y=0.6464X，r2=1.0000，證明該方法在此范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

3.4 回收率的測(cè)定：稱取已知含量為0.3157ug/mL、0.3180ug/mL、0.3166 ug/mL的試樣4.7491g、4.7497g、4.7493g共3份，分別按50%、100%、150%加入標(biāo)準(zhǔn)工作液1.5mL、3.0 mL、4.5 mL，測(cè)得回收率分別為93.59%、94.07%、94.15%，平均回收率為93.94%，RSD值為 0.33%。

3.5 對(duì)照品處理上，分別采用以甲醇和0.02mol/L的鹽酸溶液為溶劑作儲(chǔ)備液，再以流動(dòng)相（一）、（二）、（三）為溶劑制得六種標(biāo)準(zhǔn)工作液，在三種流動(dòng)相中進(jìn)行檢測(cè)并對(duì)比，結(jié)果顯示以0.02mol/L的鹽酸溶液為溶劑的儲(chǔ)備液，用乙腈+甲醇+水=100+50+350作稀釋溶劑及流動(dòng)相，峰形尖銳，信號(hào)強(qiáng)，效果最好。

與其他方法相比，本方法的建立，能夠滿足質(zhì)量控制的要求，可用于飼料中鹽酸克倫特羅的檢測(cè)。

參考文獻(xiàn)

[1]化驗(yàn)員讀本. 下冊(cè)：儀器分析/劉珍主編 ；黃沛成，于世林，周心如編著.-4版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2003.12

[2]中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志2005年8月第15卷第8期，畜肉中克倫特羅殘留的HPLC法測(cè)定，作者仲娜，盧京光，王小如