鼻咽癌組織中miR-200a的表達(dá)及意義

李曉雪，石書(shū)婧，易翔(廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，南寧5300;河北省眼科醫(yī)院)

鼻咽癌組織中miR-200a的表達(dá)及意義

李曉雪1，石書(shū)婧2，易翔1
(1廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，南寧530021;2河北省眼科醫(yī)院)

摘要:目的觀察鼻咽癌和鼻咽黏膜炎性組織中microRNA-200a(miR-200a)的表達(dá)變化，分析其與鼻咽癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。方法取鼻咽癌組織39例(觀察組)、鼻咽黏膜炎性組織12例(對(duì)照組)。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)兩組miR-200a表達(dá)，比較不同臨床病理參數(shù)(包括年齡、性別、T分期、N分期、臨床分期)的鼻咽癌患者miR-200a表達(dá)差異。結(jié)果觀察組和對(duì)照組miR-200a的相對(duì)表達(dá)量分別為0.539±0.281、0.744±0.358，觀察組較對(duì)照組明顯下降(P＜0.05)。鼻咽癌組織中miR-200a表達(dá): T3、T4期低于T1、T2期，N2、N3期低于N0、N1期，臨床分期Ⅲ、Ⅳ期低于Ⅰ、Ⅱ期(P＜0.05或＜0.01)。結(jié)論miR-200a在鼻咽癌組織中的表達(dá)明顯下調(diào)，其參與了鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。

關(guān)鍵詞:鼻咽腫瘤;miR-200a;實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)

Expression and clinical significance ofmiR-200a in nasopharyngeal carcinoma

LI Xiao-xue1，SHI Shu-jing，YI Xiang
(1 The First Affiliated Hospital of Guangximedical University，Nanning 530021，China)

Abstract:Objective To observe the expression changes in levels ofmiR-200a in the tissues of nasopharyngeal carcinoma(NPC)and nasopharyngitis and to analyze its relationship with the occurrence anddevelopment of NPC.Methods We took 39 cases of nasopharyngeal carcinoma tissues as the observation group and 12 cases of nasopharyngitis tissues as the control group.The real-time fluorescent quantification PCR was used todetect the expression levels ofmiR-200a in the two groups.Thedifferential expression levels ofmiR-200a in NPC patients with clinicopathological parameter(including age，gender，T stage，N stage and clinical grade)were compared.Results The relative expression ofmiR-200a in the observation group and the control group was 0.539±0.281 and 0.744±0.358，respectively.The expression ofmiR-200a in the observation group was significantlydecreased as compared with that of the control group(P＜0.05).The expression ofmiR-200a in the observation groupdecreased with T stage，N stage and the increasing clinical stages(P＜0.05 or P＜0.01).Conclusion The expression ofmiR-200a in the NPC tissues isdown-regulated whichmay participate in the pathogenesis anddevelopment of NPC.

Key words:nasopharyngeal carcinoma;miR-200a; real-time fluorescent quantification polymerase chain reaction

鼻咽癌(NPC)是我國(guó)南方地區(qū)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在頭頸部惡性腫瘤中居首位［1］。研究發(fā)現(xiàn)，microRNA-200a(miR-200a)在多種腫瘤中表達(dá)下調(diào)，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中具有抑癌基因的功能［2］。有關(guān)miR-200a在鼻咽癌中表達(dá)的情況少見(jiàn)報(bào)道。本研究采用Real-time PCR方法檢測(cè)鼻咽癌組織中miR-200a表達(dá)，探討其在鼻咽癌發(fā)生發(fā)展中的作用。

1　資料與方法

1.1臨床資料選取2014年4～6月在廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院行活組織病理檢查的39例鼻咽癌患者(觀察組)和12例鼻咽黏膜炎性患者(對(duì)照組)，均經(jīng)病理檢查確診。觀察組男24例、女15例，年齡25～74歲、中位年齡45歲?；颊呔鶠槌醢l(fā)，未接受化療、放療及其他針對(duì)腫瘤的相關(guān)治療。對(duì)照組男6例、女6例，年齡20～58歲、中位年齡41.5歲。取新鮮活檢組織置－80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2miR-200a表達(dá)檢測(cè)取組織標(biāo)本，加入TRIzol試劑抽提總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。miR-200a上

游引物: CGCTAACACTGTCTGGTAACGATGT。PCR反應(yīng)體系為SYBR Premin Ex TaqⅡ(2×)10 μL，miR-200a上游引物(10 μmol/L)0.4 μL，Uni-miR qPCR引物(下游引物)(10 μmol/L)0.4 μL，ROX Referencedye(50×)0.4 μL，cDNA 1 μL，用無(wú)酶水補(bǔ)至20 μL。反應(yīng)條件: 95℃30 s，95℃5 s，60℃31 s。擴(kuò)增后進(jìn)行擴(kuò)增曲線分析，采用2－ΔΔCt計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)量。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料用珋x±s表示，數(shù)據(jù)比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1鼻咽癌組織中miR-200a的表達(dá)miR-200a在鼻咽癌組織中的相對(duì)表達(dá)量為0.539±0.281，在鼻咽黏膜炎性組織中為0.744±0.358;二者比較，P＜0.05。

2.2miR-200a表達(dá)與鼻咽癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系見(jiàn)表1。

表1　不同臨床病理參數(shù)的鼻咽癌患者miR-200a表達(dá)比較()

表1　不同臨床病理參數(shù)的鼻咽癌患者miR-200a表達(dá)比較()

臨床病理參數(shù)　n　miR-200a P年齡(歲)≤50　30　0.512±0.269　0.455 ＞50　9　0.582±0.304性別男24　0.521±0.275　0.469 女15　0.600±0.309 T分期T1、T2期　10　0.782±0.278　0.001 T3、T4期　29　0.455±0.233 N分期N0、N1期　11　0.719±0.259　0.010 N2、N3期　28　0.468±0.261臨床分期Ⅰ、Ⅱ期　5　0.839±0.266　0.011Ⅲ、Ⅳ期34　0.496±0.260

3　討論

miRNA是一類(lèi)長(zhǎng)20～25個(gè)核苷酸的小分子非編碼RNA，通過(guò)與靶基因mRNA的特定位點(diǎn)結(jié)合，抑制該蛋白的合成或誘導(dǎo)該mRNA的降解，從而在轉(zhuǎn)錄后水平參與基因的表達(dá)調(diào)控［3］。近年研究表明，miRNA可參與腫瘤的增殖、凋亡、侵襲轉(zhuǎn)移及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等多個(gè)環(huán)節(jié)，具有抑癌基因或癌基因的不同功能，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸中發(fā)揮重要作用［4～6］。miR-200是一組miRNA，其家族成員主要包括miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141和miR-429。根據(jù)不同的基因組定位，miR-200家族又可分為2個(gè)簇:miR-200a、miR-200b、miR-429基因簇定位于1號(hào)染色體p36.33，miR-200c、miR-141基因簇定位于12號(hào)染色體p13.31［7］。近年研究發(fā)現(xiàn)，miR-200a在肝癌、肺癌、胃癌、外陰鱗癌等多種腫瘤中的表達(dá)明顯低于正常組織［8，9］。miR-200家族與E盒結(jié)合鋅指蛋白(ZEB)家族成員ZEB1和ZEB2可相互負(fù)反饋抑制，miR-200家族可通過(guò)抑制ZEB1/ZEB2的表達(dá)，從而上調(diào)E-cadherin表達(dá);而E-cadherin表達(dá)可阻止上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化的發(fā)生，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移［10］。提示miR-200家族具有抑癌基因的作用。

Chen等［11］通過(guò)miRNA微陣列芯片證實(shí)，miR-200a在鼻咽癌中表達(dá)明顯下調(diào)。Xia等［6］在鼻咽癌細(xì)胞株中檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，miR-200a的表達(dá)隨鼻咽癌細(xì)胞分化程度的增加而增加，且miR-200a可通過(guò)下調(diào)ZEB2抑制鼻咽癌細(xì)胞的遷移和侵襲，通過(guò)下調(diào)CTNNB1抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖。本研究結(jié)果顯示，與鼻咽黏膜炎性組織相比，miR-200a在鼻咽癌組織中的表達(dá)明顯下調(diào);miR-200a的表達(dá)隨著T分期、N分期及臨床分期增加而下調(diào)，提示miR-200a可能通過(guò)發(fā)揮類(lèi)似抑癌基因的作用參與鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展。

參考文獻(xiàn):

［1］劉鵬，譚盛葵，肖勝軍，等.鼻咽癌中E-cadherin和β-catenin的表達(dá)及意義［J］.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2013，29(11):1222-1225.

［2］Bracken CP，Gregory PA，Kolesnikoff N，et al.Adouble-negative feedback loop between ZEB1-SIP1 and themicroRNA-200 family regulates epithelial-mesenchymal transition［J］.Cancer Res，2008，68(19):7846-7854.

［3］Tulalamba W，Janvilisri T.Nasopharyngeal carcinoma signaling pathway: an update onmolecular biomarkers［J］.Int J Cell Biol，2012(2012): 594681.

［4］Cascio S，D'Andrea A，F(xiàn)erla R，et al.miR-20bmodulates VEGF expression by targeting HIF-1 alpha and STAT3 inmCF-7 breast cancer cells［J］.J Cell Physiol，2010，224(1): 242-249.

［5］王小軍，周良芬，張華.miR-200c在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其臨床意義［J］.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生，2013，51(28): 1-3.

［6］Xia H，Ng SS，Jiang S，et al.miR-200a-mediateddownregulation of ZEB2 and CTNNB1differentially inhibits nasopharyngeal carcinoma cell growth，migration and invasion［J］.Biochem Biophys Res Commun，2010，391(1): 535-541.

［7］CochranedR，Spoelstra NS，Howe EN，et al.MicroRNA-200cmitigates invasiveness and restores sensitivity tomicrotubule-targeting chemotherapeutic agents［J］.Mol Cancer Ther，2009，8(5): 1055-1066.

［8］王勇，李宇男，于曉松.肺癌細(xì)胞及組織中miR-181a、miR-200a、miR-200c表達(dá)變化及意義［J］.山東醫(yī)藥，2014，54(48):16-18.

［9］張士泰，李博，歐陽(yáng)玲.miR-200a在外陰鱗癌組織中的表達(dá)及臨床意義［J］.中國(guó)婦幼保健，2013，28(17): 2697-2699.

［10］劉鋒，王占祥.miR-200與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究進(jìn)展［J］.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2013，21(6): 1410-1413.

［11］Chen HC，Chen GH，Chen YH，et al.MicroRNAderegulation and pathway alterations in nasopharyngeal carcinoma［J］.Br J Cancer，2009，100(6): 1002-1011.

收稿日期:( 2015-06-12)

通信作者簡(jiǎn)介:易翔(1970-)，男，副教授，碩士研究生導(dǎo)師。研究方向?yàn)楸茄拾┝馨徒Y(jié)轉(zhuǎn)移的機(jī)制及抗鼻咽癌藥物的篩選。E-mail: yixiang 16300@163.com

作者簡(jiǎn)介:第一李曉雪(1987-)，女，醫(yī)師，碩士在讀。研究方向?yàn)楸茄拾┝馨徒Y(jié)轉(zhuǎn)移的機(jī)制。E-mail: 1360808767@ qq.com

基金項(xiàng)目:廣西醫(yī)學(xué)科學(xué)實(shí)驗(yàn)中心開(kāi)放基金(KFJJ2010-12)。

文章編號(hào):1002-266X(2015)34-0014-02

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

中圖分類(lèi)號(hào):R739.6

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.34.005