氧化葡萄糖酸桿菌老黃酶Go的酶學(xué)性質(zhì)鑒定

陳晶晶，盛茜茜，錢姝文，嚴(yán) 明，許 琳

(南京工業(yè)大學(xué)生物與制藥工程學(xué)院，江蘇南京211800)

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氧化葡萄糖酸桿菌老黃酶Go的酶學(xué)性質(zhì)鑒定

陳晶晶，盛茜茜，錢姝文，嚴(yán) 明，許 琳

(南京工業(yè)大學(xué)生物與制藥工程學(xué)院，江蘇南京211800)

從氧化葡萄糖酸桿菌(Gluconobacteroxydans)H24中克隆出老黃酶Go的基因，通過構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒，在大腸桿菌BL21中誘導(dǎo)表達(dá)可溶性的蛋白，使用離子交換柱(HiTrap DEAE FF)對(duì)重組酶進(jìn)行純化，并對(duì)其酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行表征。結(jié)果表明：老黃酶Go的溫度和pH耐受性都較好，在40 ℃條件下，12 h后能保持40%的活性；在pH10的條件下，12 h后能保持40%的活性；Go的底物譜十分廣泛，對(duì)酰亞胺類、α,β-不飽和醛酮、萜類都有一定的活性。老黃酶Go有良好的有機(jī)溶劑耐受性，在體積分?jǐn)?shù)20%的乙酸丁酯中可以保持90%左右的活性，但是金屬離子對(duì)其影響較大，除Mg2+和K+外，所選的其他離子對(duì)Go都有著不同程度的抑制作用。最后，在催化性質(zhì)的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，Go對(duì)檸檬醛的轉(zhuǎn)化率有60%，并且其對(duì)映體過量值(e.e.)可以達(dá)到99%。

老黃酶；不對(duì)稱還原碳碳雙鍵；氧化葡萄糖酸桿菌H24；酶學(xué)性質(zhì)

1933年，老黃酶首次從啤酒酵母中分離出來，并且是最早被發(fā)現(xiàn)的含有黃素輔酶黃素單核苷酸(FMN)的酶[4-8]。老黃酶在自然界的分布十分廣泛，在植物、細(xì)菌和低等真菌[4,9-11]中都有發(fā)現(xiàn)。到目前為止，已報(bào)道的老黃酶微生物來源主要有Saccharomycescarlsbergensis[9-10]、Escherichiacoli[12]、Bacillussubtilis[13-15]、Saccharomycescerevisiae[16-18]、Pseudomonasputida[19-20]、Pseudomonasf￣l￣u￣o￣r￣e￣s￣cens[21]和Shewanellaoneidensis[22]，老黃酶可以催化一系列的活性烯烴，底物譜十分廣泛，包括α,β-不飽和醛酮[4,9,23]、羧酸[22]、硝基烯[23-25]及各種衍生物(包括酯、內(nèi)酯、酰亞胺等)[24-25]。

筆者以已知老黃酶OYE1為模板，在GenBank上進(jìn)行序列比對(duì)搜索，發(fā)現(xiàn)一種新來源的老黃酶——存在于氧化葡萄糖酸桿菌H24中的老黃酶Go，并將其構(gòu)建至大腸桿菌中進(jìn)行異源表達(dá)，進(jìn)一步對(duì)重組酶進(jìn)行純化和酶學(xué)性質(zhì)的研究，以期為老黃酶的研究提供新的酶源，為其工業(yè)應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 菌株與質(zhì)粒

氧化葡萄糖酸桿菌(Gluconobacteroxydans)H24購(gòu)自中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心(CGMCC)。載體質(zhì)粒pET-22b(+)購(gòu)自Novagen公司?？寺∷拗鱁.coliDH5α以及表達(dá)宿主E.coliBL21(DE3)為筆者所在實(shí)驗(yàn)室保藏。

1.2 儀器和試劑

各種限制性內(nèi)切酶、Prime STAR HS DNA聚合酶和T4 DNA 連接酶，寶生物工程(大連)有限公司；細(xì)菌基因組試劑盒、質(zhì)粒小提試劑盒、膠回收試劑盒，天根生化科技(北京)有限公司；PCR引物合成，南京金斯瑞生物科技有限公司。所用底物(馬來酰亞胺、馬來酸二甲酯、香芹酮、茶香酮、衣康酸、中康酸、檸康酐、2-環(huán)戊烯酮、2-環(huán)己烯酮、3-甲基-2-環(huán)戊烯酮、3-甲基-2-環(huán)己烯酮、乙酰環(huán)己烯、薄荷酮、α-甲基肉桂醛、2-甲基-2-戊烯醛、反式-2-己烯醛、1-苯基-2-硝基丙烯、硝基苯、檸檬醛等)，Aladdin公司；抗生素、考馬斯亮藍(lán)、牛血清白蛋白(BSA)及其余試劑，生工生物工程(上海)股份有限公司；PowerWave XS酶標(biāo)儀，BIO-TEK公司；Centrifuge 5804R型高速冷凍離心機(jī)，Eppendorf公司。

1.3 老黃酶Go基因在大腸桿菌中的克隆和表達(dá)

根據(jù)GluconobacteroxydansH24(GenBank登錄號(hào)為CP003926.1)設(shè)計(jì)引物。上游引物：5′-CATGCCATGGATGGAAGTTTCGATCAAGG-3′，下游引物：5′- C￣G￣G￣G￣A￣T￣C￣C￣A￣T￣G￣G￣A￣A￣G￣T￣T￣T￣C￣G￣A￣T￣C￣A￣A￣G￣G￣A￣G￣T￣A￣C -3′， (上游、下游引物分別引入NcoⅠ及BamHⅠ酶切位點(diǎn)，劃線處為酶切位點(diǎn))。將擴(kuò)增的DNA片段與pET-22b(+)載體同時(shí)進(jìn)行相同的限制性內(nèi)切酶酶切，用 T4 DNA 連接酶連接并轉(zhuǎn)化至E.coliDH5α克隆載體，挑取陽(yáng)性克隆送至南京金斯瑞生物科技有限公司進(jìn)行測(cè)序。將正確測(cè)序的Go基因轉(zhuǎn)入表達(dá)載體BL21 (DE3)進(jìn)行表達(dá)。挑取重組菌單菌落，接種到含有100 mg/mL氨芐青霉素抗性的5 mL液體培養(yǎng)基中，在37 ℃、200 r/min的恒溫?fù)u床中培養(yǎng)12 h。將培養(yǎng)12 h的菌液以體積分?jǐn)?shù)2%的接種量接入含有100 mg/mL氨芐青霉素抗性的100 mL自誘導(dǎo)液體培養(yǎng)基中，在30 ℃、200 r/min的搖床中誘導(dǎo)培養(yǎng)15 h。誘導(dǎo)結(jié)束后，用高速冷凍離心機(jī)收集菌體。用磷酸緩沖(pH 8.0)清洗菌體1次，最后用5 mL磷酸懸浮菌體。在冰上用超聲細(xì)胞粉碎機(jī)破碎細(xì)胞，破碎后的細(xì)胞在4 ℃、10 000 r/min條件下離心15 min。將收集得到的上清液過膜后置于4 ℃冰箱待用。

1.4 老黃酶Go的分離純化

將粗酶液使用AKTA蛋白純化儀和陰離子交換柱(Hi Trap DEAE FF)進(jìn)行純化。用20 mmol/L、pH 8.0的磷酸緩沖平衡柱子，用1 mol/L NaCl和20 mmol/L、pH 8.0的磷酸緩沖的混合液進(jìn)行梯度洗脫。收集到的目的蛋白使用SDS-PAGE進(jìn)行檢測(cè)。

1.5 Go蛋白濃度測(cè)定

利用常規(guī)Bradford法測(cè)定蛋白濃度[29]。

標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液：取10 mg牛血清蛋白，用蒸餾水定容至100 mL，配制成100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)蛋白液。

考馬斯亮藍(lán)G-250溶液：取50 mg考馬斯亮藍(lán)G-250，加入25 mL 90%的乙醇溶液及85%磷酸溶液50 mL，定容至500 mL。

將標(biāo)準(zhǔn)蛋白液稀釋成10、20、40、60、80和100 μg/mL的蛋白質(zhì)量濃度梯度溶液，分別取1 mL放入10 mL試管中，每管加入5 mL考馬斯亮藍(lán)試劑，混勻，靜置5 min，于595 nm處測(cè)定其吸光值A(chǔ)595。以標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)量(mg)為橫坐標(biāo)、吸光值A(chǔ)595為縱坐標(biāo)作圖，即得到一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。由此標(biāo)準(zhǔn)曲線和未知樣品的A595可以計(jì)算樣品的蛋白濃度。

1.6 老黃酶Go酶活的測(cè)定

用Molecular Devices 公司的多功能酶標(biāo)儀SpectraMax M2進(jìn)行酶活力測(cè)定。酶反應(yīng)體系包括1 mmol/L NADPH、10 mmol/L 底物、100 mmol/L磷酸緩沖液(pH 8.0)中進(jìn)行測(cè)定。在30 ℃、波長(zhǎng)340 nm處檢測(cè)吸光值變化。每分鐘催化氧化1 μmol NADPH所需的酶量為1個(gè)活力單位(U)。設(shè)置兩組對(duì)照：相同的反應(yīng)體系不加酶進(jìn)行測(cè)定，和相同的反應(yīng)體系不加底物進(jìn)行測(cè)定。

1.7 老黃酶Go酶學(xué)性質(zhì)研究

1.7.1 Go的最適溫度和溫度穩(wěn)定性

最適溫度的研究：將磷酸緩沖分別放在20～70 ℃的水浴鍋保溫30 min后，迅速取出進(jìn)行最適溫度的測(cè)定。

溫度穩(wěn)定性的研究：將酶液放置在30～60 ℃條件下保溫12 h，檢測(cè) 12 h后的殘余酶活。以酶活最高為100%，其余酶活與之相比，計(jì)算其相對(duì)酶活。每組設(shè)置3個(gè)重復(fù)實(shí)驗(yàn)。檢測(cè)最適溫度和溫度穩(wěn)定性時(shí)以馬來酰亞胺為底物。

1.7.2 Go的最適pH和pH穩(wěn)定性

最適pH的研究：配制pH分別為4、5、6、7、8、9和10的緩沖液，在不同的pH緩沖液條件下檢測(cè)酶的活性，確定最適pH。

pH穩(wěn)定性的研究：將酶液按測(cè)酶活的體系加入到不同pH的緩沖溶液中，檢測(cè)12 h后的殘余酶活。以酶活最高為100%，其余酶活與之相比，計(jì)算其相對(duì)酶活。每組設(shè)置3個(gè)重復(fù)實(shí)驗(yàn)。檢測(cè)最適pH和pH穩(wěn)定性，以馬來酰亞胺為底物。

1.7.3 Go的底物譜

選取19種底物進(jìn)行底物譜的研究，包括馬來酰亞胺、馬來酸二甲酯、香芹酮、茶香酮、衣康酸、中康酸、檸康酐、2-環(huán)戊烯酮、2-環(huán)己烯酮、3-甲基-2-環(huán)戊烯酮、3-甲基-2-環(huán)己烯酮、乙酰環(huán)己烯、薄荷酮、α-甲基肉桂醛、2-甲基-2-戊烯醛、反式-2-己烯醛、1-苯基-2-硝基丙烯、硝基苯和檸檬醛。

將以上底物分別配制成100 mmol/L的母液，并在超聲清洗器中超聲15 min來均勻混合底物。測(cè)定底物譜時(shí)，加入1 mmol/L的NADPH、10 mmol/L的底物、適量的酶液，再用緩沖補(bǔ)足到200 μL，最后加入到96孔板中，并在酶標(biāo)儀上檢測(cè)。每個(gè)樣品至少做3個(gè)平行樣。

1.7.4 Go的動(dòng)力學(xué)參數(shù)

采用雙倒數(shù)法檢測(cè)米氏常數(shù)Km值和最大反應(yīng)速率rmax。轉(zhuǎn)換數(shù)kcat是指每摩爾酶活性中心每秒轉(zhuǎn)換底物的摩爾數(shù)，其計(jì)算方法如下：kcat=rmax/cE0，這里cE0表示總的酶濃度。Go蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量為4.5×104。測(cè)定輔酶的動(dòng)力學(xué)常數(shù)時(shí)，底物(馬來酰亞胺)的濃度為10 mmol/L，輔酶的底物濃度范圍為0.1～3 mmol/L。

根據(jù)底物譜測(cè)定的結(jié)果，一共選取了8種底物進(jìn)行動(dòng)力學(xué)常數(shù)的測(cè)定：馬來酰亞胺、馬來酸二甲酯、香芹酮、茶香酮、α-甲基肉桂醛、檸檬醛、2-甲基-2-戊烯醛以及2-環(huán)戊烯酮。測(cè)定底物的動(dòng)力學(xué)常數(shù)時(shí)，輔酶的濃度為1 mmol/L，底物的濃度為0.1～32 mmol/L。

1.7.5 金屬離子及EDTA對(duì)Go活性影響

本研究以馬來酰亞胺為底物，以不加金屬離子為對(duì)照，檢測(cè)體系中加入了5 mmol/L的Mg2+、Ca2+、Zn2+、Li+、Na+、K+、Cu2+、Ba2+和EDTA后的酶活力。

1.7.6 有機(jī)溶劑耐受性

本研究以馬來酰亞胺為底物，選取了11種有機(jī)溶劑進(jìn)行了研究，包括：乙醇、甲醇、乙酸丁酯、乙酸乙酯、異丙醇、正己醇、正戊醇、正丁醇、二甲基亞砜(DMSO)、三氯甲烷和正己烷等。并以不加有機(jī)溶劑為對(duì)照，分別檢測(cè)了老黃酶Go在5%、10%和20%(體積分?jǐn)?shù))的有機(jī)溶劑條件下的酶活力。

1.8 Go催化性質(zhì)

2 結(jié)果與討論

2.1 老黃酶Go基因的克隆和重組質(zhì)粒的構(gòu)建

根據(jù)Go的基因序列設(shè)計(jì)引物，將PCR產(chǎn)物經(jīng)0.8%的瓊脂糖凝膠電泳鑒定，電泳結(jié)果見圖1。由圖1可知：在近1 100 bp處有特異性擴(kuò)增條帶，其大小與預(yù)期符合(目的產(chǎn)物約為1 101 bp)。酶切鑒定后的陽(yáng)性克隆送南京金斯瑞生物科技有限公司測(cè)序，測(cè)序結(jié)果與GenBank中目的序列完全一致。重組大腸桿菌細(xì)胞蛋白的SDS-PAGE電泳見圖2。由圖2可知，表達(dá)的重組蛋白大約為4.0×104，與預(yù)測(cè)的酶蛋白相對(duì)分子質(zhì)量大小一致。

M為標(biāo)準(zhǔn)DNA；1—PCR結(jié)果圖1 Go基因的PCR結(jié)果Fig.1 PCR analysis of Go gene

M為標(biāo)準(zhǔn)蛋白；Go為老黃酶Go在BL21(DE3)中表達(dá)結(jié)果；BL21為對(duì)照?qǐng)D2 Go蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)結(jié)果Fig.2 SDS-PAGE analysis of Go protein

將不同來源的老黃酶氨基酸序列進(jìn)行BLASTp比對(duì)發(fā)現(xiàn)，老黃酶Go與來源于Rhizobiumsp. UR51a的NerA序列相似性最高為42%[12]，與來源于Bacillussubtili的YqjM氨基酸序列相似性為31%[15]，與來源于Saccharomycescerevisiae的OYE1氨基酸序列相似性為34%[9]，與來源于Gluconobacteroxydans621H的Gox氨基酸序列相似性最低僅有19%[9]。

2.2 老黃酶Go的純化

蛋白純化使用的是AKTA蛋白純化儀和陰離子交換柱(Hi Trap DEAE FF)。純化后蛋白電泳圖見圖3。純化后的老黃酶濃度使用Bradford蛋白定量檢測(cè)法進(jìn)行測(cè)定，得到這4種老黃酶最終的蛋白濃度為10 mg/mL。

M為標(biāo)準(zhǔn)蛋白；1為純化前樣品；2為純化后的Go蛋白圖3 Go蛋白純化后的電泳圖Fig.3 SDS-PAGE analysis of purified Go protein

2.3 最適溫度和溫度穩(wěn)定性研究結(jié)果

圖4 溫度對(duì)Go活性和穩(wěn)定性的影響Fig.4 Effects of temperature on activity and stability of Go protein

老黃酶Go的最適溫度和溫度穩(wěn)定性見圖4。由圖4可知:該酶的最適溫度在45 ℃左右，在25～50 ℃時(shí)酶活能達(dá)到60%以上，與Xu等[13]得到的老黃酶相比，Go在50 ℃下的酶活更高。在35 ℃以下保溫12 h后能保持70%以上的活性。綜上，該酶有著廣泛的溫度范圍和較高的溫度耐受性，這在生物催化中有著一定的優(yōu)勢(shì)。

2.4 最適pH和pH穩(wěn)定性研究結(jié)果

老黃酶Go的最適pH和pH穩(wěn)定性見圖5。由圖5可知：該酶的最適pH在8.0左右，在pH 7～10時(shí)，酶活能達(dá)到80%以上，與Xu等[13]和Zhang等[14]得到的老黃酶相比，Go在堿性條件下的酶活更高。12 h后pH穩(wěn)定性的結(jié)果顯示出，在pH 6～9時(shí)，12 h后殘余酶活能維持在60%以上。綜上，該酶的適用溫度范圍偏堿性，并且堿性條件下的pH耐受性更好。

2.5 底物譜研究

考察老黃酶Go的底物適應(yīng)性，結(jié)果見表1。從表1可以看出：Go對(duì)環(huán)內(nèi)雙鍵的醛酮活力相對(duì)較高，例如馬來酰亞胺、茶香酮、香芹酮和2-環(huán)己烯酮等；對(duì)開環(huán)的醛酮活力相對(duì)較低，例如檸檬醛、香芹酮、2-甲基-2-戊烯醛和α-甲基肉桂醛等；對(duì)硝基烯類和羧酸類基本沒有活性。同F(xiàn)u等[18]得到的老黃酶相比，底物譜要更加廣泛，活性也相對(duì)較高。

圖5 pH對(duì)Go酶活力和穩(wěn)定性的影響Fig.5 Effects of pH on activity and stability of Go protein

表1 Go的底物譜鑒定

2.6 動(dòng)力學(xué)參數(shù)研究

根據(jù)底物譜的研究結(jié)果挑選了9種底物和輔酶進(jìn)行了動(dòng)力學(xué)參數(shù)的研究，結(jié)果見表2。

表2 Go的動(dòng)力學(xué)參數(shù)測(cè)定

從表2中可看出，Go對(duì)NADPH的親和力要遠(yuǎn)大于對(duì)NADH的親和力。因此，本實(shí)驗(yàn)中選用NADPH作為輔酶。從kcat/Km的數(shù)據(jù)可看出，馬來酰亞胺的kcat/Km為219 L/(s·mmol)，要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他的底物，因此馬來酰亞胺可坐為Go的天然底物。Go對(duì)馬來酸二甲酯、茶香酮、2-環(huán)己烯酮、檸檬醛也有著較高的催化能力。并且對(duì)2-環(huán)己烯酮的kcat/Km值為21.8 L/(s·mmol)要高于之前發(fā)現(xiàn)的老黃酶YqjM 15 L/(s·mmol)、MR 0.19 L/(s·mmol)和TOYE 0.5 L/(s·mmol)。

2.7 金屬離子和EDTA對(duì)Go酶活力的影響研究結(jié)果

考察金屬離子和EDTA對(duì)Go的影響，結(jié)果見圖6。由圖6可知：Cu2+和Ca2+對(duì)Go有很強(qiáng)的抑制作用，5 mmol/L的Cu2+使Go完全失去了活性；Na+、Li+、Ba2+、Zn2+和EDTA對(duì)Go也有不同程度的抑制作用；Mg2+和K+對(duì)Go沒有明顯的作用。

圖6 金屬離子對(duì)Go酶活的影響Fig.6 Effects of metal ions on activity of Go protein

2.8 有機(jī)溶劑耐受性研究結(jié)果

考察有機(jī)溶劑對(duì)Go的影響，結(jié)果見圖7。由圖7可知：Go的有機(jī)溶劑耐受性較好，在20%的乙酸丁酯中能保持80%以上的活力，在20%的異丙醇、正丁醇、乙酸乙酯、正己烷、甲醇和DMSO中能保持60%的活力，在20%的乙醇中能保持40%的活力，這對(duì)后續(xù)老黃酶Go的進(jìn)一步的生物催化反應(yīng)有很大的作用。

圖7 有機(jī)溶劑對(duì)Go酶活的影響Fig.7 Effects of organic solvents on activity of Go protein

2.9 催化性質(zhì)的研究結(jié)果

一共選取了5種底物進(jìn)行了催化轉(zhuǎn)化率和對(duì)映體過量值(e.e.)的研究，結(jié)果見表3。

表3 Go的轉(zhuǎn)化率和e.e.值測(cè)定

從表3中可看出：所選的5種底物中，老黃酶Go對(duì)馬來酰亞胺的轉(zhuǎn)化率最高，可以達(dá)到99%；對(duì)α-甲基肉桂醛的轉(zhuǎn)化率最低僅有17%。檸檬醛可以被還原成香茅醛，香茅醛是一種重要的香料，而Go對(duì)檸檬醛的轉(zhuǎn)化率有60%，但是其e.e.值可以達(dá)到99%。同時(shí)，茶香酮可以被還原成(R)-左旋二酮，(R)-左旋二酮是生產(chǎn)類胡蘿卜素中的重要手性中間體，Go對(duì)茶香酮的轉(zhuǎn)化率僅有54%，但是e.e.值可以達(dá)到83%。

3 結(jié)論

筆者成功克隆了氧化葡萄糖酸桿菌H24中的老黃酶基因Go，并成功構(gòu)建了重組菌BL21-pET22b(+)-Go。將老黃酶Go純化后進(jìn)行了酶學(xué)性質(zhì)的鑒定，包括最適溫度和溫度的穩(wěn)定性、最適pH和pH穩(wěn)定性、底物譜、動(dòng)力學(xué)參數(shù)、金屬離子的影響、有機(jī)溶劑的影響以及催化性質(zhì)的鑒定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)Go的底物譜十分廣泛，溫度和pH的耐受性都較好，并且有著良好的有機(jī)溶劑耐受性，在20%的乙酸丁酯中可以保持90%左右的活性，但是金屬離子對(duì)其影響較大，除了Mg2+和K+，所選的其他離子對(duì)Go都有著不同程度的抑制作用。最后，在催化性質(zhì)的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，Go對(duì)檸檬醛的轉(zhuǎn)化率有60%，并且其e.e.值可以達(dá)到99%。以上這些研究為老黃酶家族的研究提供了一個(gè)新的酶源，并且為以后的工業(yè)化研究提供了充足的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

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(責(zé)任編輯 荀志金)

Characterization of an old yellow enzyme fromGluconobacteroxydansH24

CHEN Jingjing,SHENG Xiqian,QIAN Shuwen,YAN Ming,XU Lin

(College of Biotechnology and Pharmaceutical Engineering,Nanjing Tech University,Nanjing 211800,China)

Go,a novel old yellow enzyme fromGluconobacteroxydansH24,was successfully cloned and overexpressed in BL21(DE3). Then the recombinant protein was identified and characterized after purified with HiTrap DEAE FF column. Go can reduce various activated alkenes imides,α,β-unsaturated ketones, and terpene and exhibits high temperature (retaining 40% catalytic activity, 40 ℃ for 12 h) and pH stability (retaining 40% activiy, pH 10 for 12 h),indicating that it has a great potential for biocatalysis. Also,it shows high tolerance toward organic solvents and maintain 90% activity in 20% ethyl acetate. However,Go has low tolerance towards metal ions. Tested metal ions all existed inhibitions toward Go except Mg2+and K+.Besides,Go can catalyze citral to (S)-citronellal with 60% conversion and but high enantiomeric excess value (e.e.>99%).

10.3969/j.issn.1672-3678.2017.01.004

2016-04-22

國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究計(jì)劃(973計(jì)劃)(2011CBA00804)

陳晶晶(1990—)，女，湖北紅安人，研究方向：基因工程與生物信息學(xué);嚴(yán) 明(聯(lián)系人)，副教授，E-mail：yanming@njtech.edu.cn

Q554

A

1672-3678(2017)01-0020-08