小葉米仔蘭的葉中總黃酮的提取工藝的研究

何健民　劉憶明　楊澤興

摘 要 采用微波輔助法對小葉米仔蘭的葉中的黃酮類化合物進(jìn)行提取，并利用單因素與正交實驗相結(jié)合，得出最佳提取工藝條件為：料液比1：30，乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%，微波功率350W，提取時間50s，此條件下小葉米仔蘭葉總黃酮的含量為3.91%。

關(guān)鍵詞 總黃酮 微波 小葉米仔蘭

小葉米仔蘭（AglaiaodorataLour.var.microphyllinaC.DC.Monogr.）是楝科米仔蘭屬植物。原產(chǎn)海南，在我國南方各省被作為一種芬芳類觀賞植物廣泛栽培。海南的黎族人民將其用于治療跌打損傷。文獻(xiàn)報道小葉米仔蘭的枝條具有抗菌活性，米仔蘭屬的植物碧綠米仔蘭、紅果米仔蘭等都具有一定的生物活性，而未見對小葉米仔蘭的葉的研究報道。黃酮類化合物在降脂、抗氧化、抗衰老、抗腫瘤、抗炎等方面具有藥理作用。常見黃酮的提取方法有溶劑法、超聲輔助法、微波輔助法等，而微波輔助法具有方便、省時、節(jié)能、提取率高等優(yōu)點，是一種高效的植物總黃酮提取技術(shù)。本研究采用微波輔助法對小葉米仔蘭的葉中總黃酮的提取工藝進(jìn)行探討，采用單因素和正交實驗相結(jié)合得出最佳的工藝條件，以期為小葉米仔蘭的綜合利用提供條件。

1材料與方法

1.1材料與試劑

小葉米仔蘭葉，采自云南保山，清洗，干燥，粉碎，過80目篩，備用；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品購自阿拉丁試劑公司；所用試劑亞硝酸鈉、氯化鋁、氫氧化鈉、乙醇等均為國產(chǎn)分析純試劑；所用水為蒸餾水。

1.2儀器與設(shè)備

旋風(fēng)式粉碎磨（杭州麥哲儀器有限公司），MW20-M605微波爐（廣東歐派集團有限公司），電子天平（奧豪斯儀器上海有限公司），721型可見光分光光度計（上海菁華科技有限公司），2XZ-1型旋轉(zhuǎn)式真空泵（南京真空泵廠），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（東京理化N-1001D）。

1.3實驗方法

1.3.1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

參照文獻(xiàn)報道方法稍作改進(jìn)，用721可見分光光度計在510nm波長處測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.2小葉米仔蘭葉總黃酮含量的測定

（1）樣品液的制備。

準(zhǔn)確稱取小葉米仔蘭葉原料1.0000g，然后加入體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇30mL，放入微波爐中，在微波功率為350W下進(jìn)行間歇式微波加熱，每提取10s暫停一次，冷卻后再加熱，共加熱提取40s。提取完后抽濾并用少量50%乙醇洗滌濾渣，取濾液，然后用體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇定容至50mL容量瓶中，得小葉米仔蘭葉總黃酮的樣品液，避光保存。

（2）總黃酮含量的測定。

準(zhǔn)確吸取1.00mL樣品溶液至于10mL比色管中，再按繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法測定吸光度，對照回歸方程得到總黃酮濃度，然后計算出小葉米仔蘭葉總黃酮含量。黃酮得率（%）=（提取液中黃酮含量/樣品質(zhì)量）€？00%。

1.3.3單因素實驗條件

選擇對小葉米仔蘭葉總黃酮得率有影響的4個因素，即料液比（A）、微波功率（B）、乙醇濃度（C）和提取時間（D）進(jìn)行單因素實驗。①設(shè)定乙醇濃度（體積分?jǐn)?shù)50%）、微波功率（350W）、提取時間（40s），選擇料液體積比（1：20、1：25、1：30、1：35、1：40）。②設(shè)定料液比（1：30）、提取時間（40s），設(shè)定乙醇濃度（體積分?jǐn)?shù)50%）、料液比（1：20）、提取時間（40s），選擇5種不同微波功率（70、210、350、490、700W）。③設(shè)定料液比（1：30）、微波功率（490W）、提取時間（40s），分別選擇體積分?jǐn)?shù)為（20%、30%、40%、50%和60%）的乙醇作為溶劑。④選擇5種提取時間（30、40、50、60、70s）、乙醇濃度40%、料液比1：30、微波功率（490W）。在上述條件下按1.3.2法進(jìn)行小葉米仔蘭葉總黃酮的提取，并計算總黃酮得率。

1.3.4正交實驗設(shè)計

為進(jìn)一步綜合考察各因素的相互影響及得出最佳的提取工藝條件，根據(jù)單因素實驗結(jié)果，選擇上述4個因素的較優(yōu)水平，按L9（34）設(shè)計進(jìn)行正交實驗。實驗設(shè)計如表1所示。

2結(jié)果與分析

2.1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

以吸光度A為縱坐標(biāo)，蘆丁溶液濃度C為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：A=8.0725C+0.0532，R2=0.9992。結(jié)果表明，蘆丁的含量在0.01g/L-0.09g/L之間時，線性關(guān)系良好。

2.2單因素實驗

2.2.1料液比對總黃酮得率的影響

料液比對總黃酮得率的影響見圖2，由圖可知。當(dāng)料液比較小時，總黃酮得率隨著料液比的增加而增大，當(dāng)料液比超過1：30時，總黃酮得率隨之下降。因此，選用的最佳料液比為1：30。

2.2.2微波功率對總黃酮得率的影響

微波功率對總黃酮得率的影響見圖3，當(dāng)微波功率在70-490W時，得率隨功率的增大而增大。當(dāng)功率超過490W后，得率下降。因此，本實驗選定微波提取功率為490W。

2.2.3乙醇濃度對總黃酮得率的影響

乙醇濃度對總黃酮得率的影響見圖4，當(dāng)乙醇濃度小于40%時，隨著乙醇濃度的增加，總黃酮得率也隨之增加；當(dāng)體積分?jǐn)?shù)為40%時，得率最高，當(dāng)體積分?jǐn)?shù)大于40%時，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加得率隨之下降。因此，本實驗選擇乙醇體積分?jǐn)?shù)為40%。

2.2.4微波時間對總黃酮得率的影響

微波時間對總黃酮得率的影響見圖5，當(dāng)提取時間小于50s時，黃酮的得率隨提取時間的增加而提高，當(dāng)提取時間為50s時得率達(dá)最大，當(dāng)增加提取時間，黃酮得率隨之下降。因此，延長或減少提取時間，都不利于總黃酮的提取。本實驗選最佳提取時間為50s。

2.3正交實驗結(jié)果

正交實驗因素水平表見表2，通過數(shù)據(jù)分析可知，RA>RD>RC>RB，各因素對小葉米仔蘭總黃酮得率的影響大小依次為：料液比（A）>微波時間（D）>乙醇濃度（C）>微波功率（B）。微波輔助提取的優(yōu)化工藝條件是A2B2C3D2，即料液比為1：30，乙醇濃度為50%，提取時間50s，微波功率為350W。按此工藝條件下進(jìn)行了3次驗證實驗，總黃酮得率分別為3.90%，3.88%和3.95%，平均3.91%。

表2：微波輔助提取小葉米仔蘭葉總黃酮的L9（34）正交實驗結(jié)果表

3結(jié)論

微波輔助法對小葉米仔蘭葉中總黃酮的提取是一種高效的的方法。小葉米仔蘭葉根中總黃酮的微波提取工藝，受料液比、微波功率、乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取時間和間隔時間的影響，通過單因素實驗和正交實驗得出了最佳提取工藝條件為料液比1：30，乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%，微波功率350W，提取時間50s。此條件下小葉米仔蘭葉總黃酮的含量為3.91%。

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