UHPLC法測定蒙藥扎沖十三味丸中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量

李偉 吳秀清 袁文洪 高宇明

【摘要】目的：建立超高效液相色譜（UHPLC）法同時(shí)測定扎沖十三味丸中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯含量的方法。方法：取本品研細(xì)過篩后用甲醇超聲提取，采用色譜柱ThermoSyncromis C18（100mm×3mm，17μm）；流動(dòng)相為甲醇-水（85∶15）；檢測波長225nm；進(jìn)樣體積1μL；柱溫室溫。結(jié)果：木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯分別在17860～142877μg（r=09991）、15553～124426μg（r=09995）范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率（n=6）分別為10104%、10129%，RSD分別為201%、185%。結(jié)論：該方法簡便快捷，重復(fù)性好，可用于扎沖十三味丸的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】扎沖十三味丸；木香烴內(nèi)酯；去氫木香內(nèi)酯；UHPLC

【中圖分類號】R2841【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2017）07-0024-02

扎沖十三味丸為傳統(tǒng)蒙藥，主要由訶子、木香、石菖蒲、制草烏等13味藥物組成，具有祛風(fēng)通竅、舒筋活血、鎮(zhèn)靜安神的功效，臨床用于半身不遂、左癱右瘓、口眼歪斜、四肢麻木、腰腿不利、言語不清、筋骨疼痛、神經(jīng)麻痹、風(fēng)濕、關(guān)節(jié)疼痛等。原標(biāo)準(zhǔn)收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)蒙藥分冊[1]，規(guī)定了顯微鑒別、化學(xué)鑒別、薄層鑒別。木香為扎沖十三味丸主要組成之一，其主要活性成分為木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯，具有較強(qiáng)的抗炎、抗腫瘤和抗?jié)冏饔肹2]，且2015年版《中國藥典》中收載有木香中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量測定項(xiàng)目[3]。本研究建立了UHPLC測定木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯含量的方法，比原標(biāo)準(zhǔn)更快速更簡潔，保證了藥品的質(zhì)量。

1儀器與材料

11儀器THERMO Ultimate 3000 UHPLC（含VWD檢測器），ThermoSyncromis C18（100mm×3mm，17μm）色譜柱，Mettler Toledo MS205DU 電子天平，KQ-100E型超聲波清洗器。

12材料木香烴內(nèi)酯（批號：111524-201509，純度990%）、去氫木香內(nèi)酯（批號：111525-201510，純度997%）對照品購自中國食品藥品檢定研究院，扎沖十三味丸（內(nèi)蒙古庫倫蒙藥廠，批號分別為14028087、160321202、160231043）。甲醇（色譜純，F(xiàn)isher公司），水為注射用水，其他試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

21色譜條件色譜柱：ThermoSyncromis C18（100mm×3mm，17μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（85：15）；流速：02mL/min；檢測波長：225nm；柱溫室溫；進(jìn)樣量1μL。在該條件下，木香烴內(nèi)酯與去氫木香內(nèi)酯分離度大于15（見圖1）。

22混合對照品溶液的制備分別稱取木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯對照品1804mg、1560mg，置于10mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，作為對照品儲(chǔ)備溶液。

23供試品溶液的制備將本品磨碎，過三號篩，精密稱取10g，置錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，超聲（100W，40HZ）20min，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液用022μm微孔濾膜過濾，即得。

24線性關(guān)系考察分別精密吸取木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯對照品儲(chǔ)備溶液020、040、060、080、100、120、140、160mL置20mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)022μm微孔濾膜過濾，得到8個(gè)濃度梯度的混合對照品溶液，按“21”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定。以峰面積為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，計(jì)算回歸方程和相關(guān)系數(shù)（見表1）。結(jié)果表明，2種成分在各自的濃度范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

25精密度試驗(yàn)精密吸取混合對照品溶液1μL，在“21”項(xiàng)下色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯峰面積的RSD分別為03%和05%，表明儀器精密度良好。

26穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液（批號：140238 087），在“21”項(xiàng)下色譜條件下，分別于0、2、4、8、12、24h進(jìn)樣，記錄色譜峰面積。結(jié)果，木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯峰面積的RSD分別為13%和11%，表明供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

27重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取同一批藥品（批號：140238 087），共6份，按“23”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣1μL，記錄峰面積。結(jié)果，木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯的平均含量為0594、0591mg/g，RSD分別為19%和16%，表明該方法重復(fù)性良好。

28加樣回收率試驗(yàn)精密稱取05g已知木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯含量的樣品6份（批號：140238 087），[JP2]分別精密加入相當(dāng)于樣品中兩種成分含有量80%、100%、120%的混合對照品溶液適量，按“23”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“21”項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)樣分析，記錄峰面積，計(jì)算回收率。

3討論

本研究在選擇色譜條件時(shí)，參考了《中國藥典》（2015年版）一部“木香”項(xiàng)下的含量測定方法?？疾炝瞬煌纳V柱和流動(dòng)相比例，最終結(jié)果以Thermo Syncromis C18（100mm×3mm，17μm）色譜柱，流動(dòng)相比例為甲醇∶水（85∶15），流速02mL/min時(shí)分離效果好，分析時(shí)間短。韓國珍等[2]用HPLC方法測定扎沖十三味丸中的木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯的含量，本研究采用的UHPLC方法分離效率更高，通過對色譜條件的優(yōu)化，大大縮短了分析時(shí)間，使得可以在10min以內(nèi)完成對扎沖十三味丸中木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯的含量測定。該方法分析時(shí)間短、重復(fù)性好、結(jié)果準(zhǔn)確，可適用于扎沖十三味丸的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)蒙藥分冊[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，1988：70.

[2]魏華，彭勇，馬國需，等.木香有效成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].中草藥，2012，43（3）：613-620.

[3]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

[4]韓國珍，溫愛平.高效液相色譜法測定扎沖十三味丸中木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯的含量[J].中國藥物與臨床，2007，7（10）：796-797.

（收稿日期：2017-02-09編輯：程鵬飛）