高效液相法對(duì)比紫外分光光度法測(cè)定阿莫西林膠囊含量

曹喜紅

摘要：目的 HPLC及UV測(cè)定阿莫西林膠囊的含量對(duì)比。方法 高效液相色譜法選擇色譜柱為Agilent C18（4.6×250 mm，5 μm）， 流動(dòng)相為0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液（pH=5）-乙 腈 （97.5：2.5），流速為1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，紫外法選擇254 nm波長(zhǎng)測(cè)定含量。結(jié)果 HPLC法中阿莫西林在2.56 ～56.15ug/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程：Y=65257X-3244531（r=0.9996），加樣回收率平均值為100.68%，RSD 1.7%。結(jié)論 HPLC法對(duì)比紫外分光光度法測(cè)定阿莫西林含量更為準(zhǔn)確，重復(fù)性高，專屬性強(qiáng)

關(guān)鍵詞：阿莫西林；高效液相色譜法；紫外分光光度法

阿莫西林因其耐酸、口服吸收快、生物利用度高等特點(diǎn)，使其在臨床上深受醫(yī)生和患者的厚愛[1]。2015版藥典中推薦使用高效液相色譜法來分析本品[2]，但相對(duì)來說紫外分光光度法儀器設(shè)備要求簡(jiǎn)單，檢測(cè)時(shí)間快捷，該法是否可以作為本品基層藥物監(jiān)測(cè)的備選方法值得考察。本文由此出發(fā)，對(duì)比分析高效液相及紫外分光光度法測(cè)定阿莫西林含量。

1臨床資料

島津 LC-2010CHT 型高效液相色譜儀；島津UV-2450型紫外分光光度計(jì)；乙腈由霍尼韋爾貿(mào)易（上海）有限公司提供，為色譜醇；氫氧化鉀、磷酸二氫鉀、N-溴代丁二酰亞胺均為色譜純；阿莫西林對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：130409-201011，純度85.80%）；阿莫西林膠囊（武漢健民集團(tuán)隨州藥業(yè)有限公司）。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1高效液相色譜法

2.1.1色譜條件[2] 色譜柱選擇Agilent C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相：0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液 （用 2 mol/LKOH調(diào)節(jié)pH值5.0）-乙 腈 （97.5：2.5），檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm， 進(jìn)樣量10 μl，1.0 ml/min流速，柱溫為室溫（25℃）。

2.1.2溶液的制備

2.1.2.1供試品溶液的制備 精密稱取10顆阿莫西林膠囊，混合均勻，采用十萬分位天平精密稱定0.100g供試品，轉(zhuǎn)移入50 ml容量瓶中，加入20 ml流動(dòng)相后，震蕩至澄清，加流動(dòng)相至對(duì)應(yīng)刻度后，用0.2 μm有機(jī)濾膜過濾，取續(xù)濾液待用。

2.1.2.2對(duì)照品溶液制備 用十萬分位天平精密稱取11.23mg阿莫西林對(duì)照品，轉(zhuǎn)移入100 ml容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻至澄清即得。

2.1.3高效液相色譜法

2.1.3.1精密度試驗(yàn) 于“2.1.1” 項(xiàng)色譜條件下，取對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣（n=6），進(jìn)樣量均為10 μl，測(cè)定每次峰面積，結(jié)合所得數(shù)據(jù)計(jì)算RSD，結(jié)果RSD=1.6%<2.0%，達(dá)到藥典規(guī)定，提示本法精密度良好。

2.1.3.2重復(fù)性試驗(yàn) 取同批次供試品6份，根據(jù)“2.1.2.1”項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品溶液，采用“2.1.1” 項(xiàng)色譜條件，每份樣品進(jìn)樣10 μl，采集每次峰面積，結(jié)合所得數(shù)據(jù)計(jì)算RSD，結(jié)果RSD=1.4%<2.0%，達(dá)到藥典規(guī)定，提示本法重復(fù)性良好。

2.1.3.3穩(wěn)定性試驗(yàn) 于0h、4h、8h、12h、24h取“2.1.2.1”項(xiàng)供試品溶液，采用“2.1.1”項(xiàng)色譜條件，測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)的色譜峰面積，結(jié)合所得峰面積計(jì)算不同時(shí)間供試品濃度變化，結(jié)果RSD=1.3%<2.0%，達(dá)到藥典規(guī)定，提示供試品在24 h內(nèi)較為穩(wěn)定。

2.1.3.4回收率考察 采用5 ml移液管精密量取5 ml “2.1.2.1”項(xiàng)供試液（n=3），保存至3個(gè)錐形瓶?jī)?nèi)，依次加阿莫西林對(duì)照品2.42mg、5.87和10.29mg，混合均勻后取續(xù)濾液，進(jìn)樣10 μl，測(cè)定對(duì)應(yīng)樣品的峰面積，結(jié)合所得濃度計(jì)算回收率，所得回收率分別為：100.93%、100.62%和100.48%，平均100.68%，RSD 1.7%<2.0%，達(dá)到藥典規(guī)定。

2.1.4 線性關(guān)系考察 采用對(duì)應(yīng)刻度移液管分別量取“2.1.2.2”下對(duì)照品溶液0.20 ml、0.50 ml、0.80 ml、1 ml、2 ml、5 ml于10 ml容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，用0.2 um有機(jī)濾膜過濾，取對(duì)應(yīng)續(xù)濾液即為系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。采用“2.1.1” 項(xiàng)色譜條件，進(jìn)樣10 ul，測(cè)定系列標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜峰面積，并以峰面積為橫坐標(biāo)和濃度縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到方程為：Y =65257X-3244531（r=0.9996），提示，阿莫西林濃度在2.56～56.15ug/ml范圍內(nèi)與峰面積存在良好的線性關(guān)系。

2.2紫外分光光度法 參考文獻(xiàn)[3]，平行精密稱取3份阿莫西林膠囊，每份約0.1 g，置于100 ml容量瓶，加水溶解搖勻至澄清后，補(bǔ)充至刻度，精密量取上述溶液5 ml，稀釋一倍后再精密量取該液1.0 ml，加入0.1 mol/L NaoH1.0 ml及0.05% NBS（N-溴代丁二酰亞胺）1.0 ml，加蒸餾水稀釋至5 ml配成檢測(cè)液，另以0.1 mol/L NaOH及0.05% NBS（N-溴代丁二酰亞胺）等體積混合溶液為空白對(duì)照于385 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度；精密取對(duì)照品10.23 mg同上法制備不同濃度溶液，測(cè)定吸光度，并以吸光度對(duì)其濃度進(jìn)行線性回歸，得到線性方程為： Y =23252X-42431，（r=0.9994），結(jié)果表明，阿莫西林濃度在2.56～56.15ug/ml范圍內(nèi)與吸光度存在較好線性關(guān)系。參考“2.1.3.1- 2.1.3.4”項(xiàng)過程并結(jié)合藥典，對(duì)紫外分光光度法進(jìn)行精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、回收率實(shí)驗(yàn)，結(jié)果上述RSD均<2%，與藥典標(biāo)準(zhǔn)相符。

2.3樣品中阿莫西林含量測(cè)定 結(jié)合上述檢測(cè)條件，分別測(cè)定阿莫西林對(duì)照品溶液與3批阿莫西林膠囊供試品溶液（取供試品0.1 g），高效液相色譜法及紫外分光光度法均采用自身對(duì)照法對(duì)供試品內(nèi)含有的阿莫西林含量進(jìn)行測(cè)定。

3結(jié)果

結(jié)果顯示，高效液相法測(cè)定阿莫西林膠囊中阿莫西林平均含量（與標(biāo)識(shí)量比較）為（100.49±0.14）%，而紫外分光光度法測(cè)定的平均含量為（101.55±0.47）%，兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

4討論

由本文結(jié)果，HPLC方法測(cè)得的阿莫西林含量低于UV方法（P<0.05），且該法測(cè)得量更為接近樣品標(biāo)示含量，分析原因主要是：不同物質(zhì)在固定相和流動(dòng)相的分配系數(shù)不同，以至通過色譜柱后，溶液中不同性質(zhì)的物質(zhì)得以分開，進(jìn)而將阿莫西林制備過程中的有關(guān)物質(zhì)、雜質(zhì)等干擾有效分離，而UV法沒有上述作用，故而HPLC法更為準(zhǔn)確。

綜上所述，高效液相法及紫外分光光度法測(cè)定阿莫西林含量的方法準(zhǔn)確性高、精密度好、重現(xiàn)性和相關(guān)性均符合相關(guān)要求，但高效液相所測(cè)結(jié)果更接近藥物真實(shí)含量，建議考慮此種方式來測(cè)定阿莫西林膠囊中阿莫西林含量。

參考文獻(xiàn)：

[1]陳宏，陳友存，程樂華，等.HPLC測(cè)定阿莫西林膠囊中的有效成分[J].光譜實(shí)驗(yàn)室，2013，30（6）：2733-2736.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）[S].北京： 化學(xué)工業(yè)出版社，2015.566-567.

[3]盧海波，李航，楊蓮芝.紫外分光光度法快速測(cè)定阿莫西林含量[J].四川醫(yī)學(xué)，2000，21（4）：344-344.編輯/李樺