三種檢測技術在不孕不育癥患者解脲脲原體檢測中的應用比較

王利軍

(鄭州市婦幼保健院檢驗科，河南鄭州450000)

三種檢測技術在不孕不育癥患者解脲脲原體檢測中的應用比較

王利軍

(鄭州市婦幼保健院檢驗科，河南鄭州450000)

目的應用實時熒光核酸恒溫擴增檢測技術（Simultaneous Amplification and Testing，SAT）、液體培養(yǎng)法、熒光定量PCR法檢測不孕不育癥患者解脲脲原體（Ureaplasma urealyticum，Uu），對檢測結果進行評估，以評價臨床效果。方法對180例不孕不育癥患者取泌尿生殖道拭子和尿液樣本各一份，拭子樣本采用SAT檢測法、液體培養(yǎng)法及熒光定量PCR法進行檢測，尿液標本再進行SAT方法檢測，并對結果進行分析。結果三種方法檢測解脲脲原體，陽性率分別為45．00%、48．33%、46．67%，差異無顯著意義（P＞0．05）。結論SAT檢測不孕不育患者解脲脲原體與液體培養(yǎng)法和熒光定量PCR法相比具有較好相關性，為解脲脲原體的臨床實驗室診斷提供了新的檢測手段。

實時熒光核酸恒溫擴增檢測技術；SAT；液體培養(yǎng)法；PCR；解脲脲原體

近年來，隨著不孕不育癥發(fā)病率的逐漸上升，解脲脲原體引起的生殖道感染日益受到關注，已成為備受關注的公共衛(wèi)生問題之一[1，2]。本文主要應用實時熒光核酸恒溫擴增檢測技術（SAT）、液體培養(yǎng)法、熒光定量PCR法檢測不孕不育癥患者解脲脲原體（Uu），對檢測結果進行評估，以評價臨床效果。

1 材料與方法

1．1標本來源和采集選取2014年3月至2016年5月來我院就診確診的不孕不育患者，年齡22～43歲，由門診醫(yī)生采集女性生殖道標本。拭子樣本采集：用醫(yī)用棉拭子伸入女性宮頸口約1～2cm，旋轉1周，停留10s后取出，并將拭子頭放入1ml生理鹽水浸泡貼管壁擠干，取0．5ml加入0．5ml專用尿液保存液混勻，立即檢測或－20℃保存待測。尿液標本采集：取清晨首次尿，或長時間（至少1h）不排尿后的首段尿1ml加入1ml專用尿液保存液混勻，立即檢測或－20℃保存待測。同一患者收集到的三份拭子標本分別做Uu－SA、TUu培養(yǎng)及Uu－PCR，尿液標本只做Uu－SAT。

1．2主要試劑及儀器解脲脲原體（Uu）核酸檢測試劑盒（RNA恒溫擴增）和專用磁珠分離裝置（上海仁度生物科技有限公司）；解脲脲原體培養(yǎng)鑒定藥敏試劑盒（珠海麗珠試劑有限公司）；ABI Prism 7600實時熒光定量PCR儀及檢測試劑盒（中山大學達安基因股份有限公司）

1．3實驗方法三種檢測嚴格按照試劑盒說明書進行。

1．4統(tǒng)計分析方法采用SPSS 19．0統(tǒng)計軟件，各組試驗數(shù)據(jù)處理均采用χ2檢驗來進行差異統(tǒng)計學分析，P＜0．05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2．1三種檢測方法結果的比較三種方法檢測解脲脲原體，陽性率分別為45．00%、48．33%、46．67%，差異無顯著意義（P＞0．05）；尿液SAT檢測陽性率為46．11%，與液體培養(yǎng)法相比，差異無顯著意義（P＞0．05），表明SAT檢測解脲脲原體具有較好的相關性，見表1。

表1 三種檢測方法陽性率的比較

3 討論

解脲脲原體（Uu）是一類大小介于細菌和病毒之間的沒有細胞壁的原核細胞微生物，是人類泌尿生殖道的常見病原體之一，也是育齡夫婦不孕不育的重要原因之一[2，3]。

目前，Uu臨床檢測主要有培養(yǎng)法和熒光定量PCR法。液體培養(yǎng)法雖然操作簡便，可同時做藥敏試驗，能指導臨床用藥，是目前臨床實驗室最常用的檢測方法[4]。但是它主要依據(jù)培養(yǎng)基顏色變化來判斷有無Uu的生長，主觀性強，易造成假陽性或假陰性結果，且培養(yǎng)常需24～48h[5]。熒光定量PCR雖具有靈敏度高、特異性好、檢測快速的優(yōu)點，但也存在需后期處理[6]，同時需要嚴格規(guī)范的實驗條件和昂貴的實驗儀器，適合大型醫(yī)院，尚不能廣泛應用[7]。

實時熒光核酸恒溫擴增檢測技術（Simultaneous Amplification and Testing，SAT）是采用RNA恒溫擴增技術原理，結合實時熒光檢測的一種新的RNA檢測技術[8，9]。本文使用SAT技術對患者拭子及尿液標本進行解脲脲原體RNA檢測，結果發(fā)現(xiàn)三種方法檢測解脲脲原體，陽性率分別為45．00%、48．33%、46．67%，差異無顯著意義（P＞0．05）；尿液SAT檢測陽性率為46．11%，與液體培養(yǎng)法相比，差異無顯著意義（P＞0．05），表明SAT檢測解脲脲原體具有較好的相關性；由于SAT法無須高速離心、高溫加熱，RNA在環(huán)境中易降解，交叉污染少，并且采用水相洗滌，特異性靶標捕獲，反應抑制物少，可有效解決污染引起的假陽性問題及有效減少假陰性，提高檢測靈敏度[9]。

在檢測結果中，對于出現(xiàn)SAT檢測陰性而液體培養(yǎng)法或PCR定量法檢出陽性的情況，可能是操作過程中受到RNase的作用使得RNA降解，因此在實驗操作過程中必須使用專用加樣器，并且離心管、吸頭等一次性耗材實驗前必須進行高壓滅菌，防止影響結果[10]。近年來研究認為[11，12]，PCR法雖然有較高的靈敏度和特異性，但不能區(qū)分所檢測的DNA是來自活菌還是死菌，患者治療后病菌死亡，但病菌DNA仍在體內繼續(xù)存在一段時間，PCR檢測陽性，容易導致過度治療[13－15]。

綜上所述，實時熒光核酸恒溫擴增檢測技術作為新一代的核酸檢測技術在臨床實驗室生殖道解脲脲原體檢測中，既具備了PCR的靈敏度和特異性，又具有很好的判愈效果，同時又可采用尿液作為檢測標本，方便患者及醫(yī)務人員，是值得推廣的一種檢測方法。

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R446．19，R446．5，R518．9

A

1674－1129(2017)02－0239－02

10．3969/j.issn.1674－1129．2017．02．032

2016－10－17；

2016－12－12)