腦膠質(zhì)瘤患者外周血DC細(xì)胞的檢測(cè)及其臨床意義

王偉豐，張智峰

(1、濟(jì)源市人民醫(yī)院神經(jīng)外科，河南濟(jì)源459000；2、鄭州大學(xué)一附院神經(jīng)外科，河南鄭州450000)

腦膠質(zhì)瘤患者外周血DC細(xì)胞的檢測(cè)及其臨床意義

王偉豐1，張智峰2

(1、濟(jì)源市人民醫(yī)院神經(jīng)外科，河南濟(jì)源459000；2、鄭州大學(xué)一附院神經(jīng)外科，河南鄭州450000)

目的檢測(cè)腦膠質(zhì)瘤患者外周血樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）的改變，探討其相關(guān)的臨床意義。方法收集2015年1月至2016年4月我院神經(jīng)外科收治的腦膠質(zhì)瘤患者44例，另取同期我院健康體檢者40例作為正常對(duì)照。DC細(xì)胞表達(dá)使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。結(jié)果DC1細(xì)胞和DC2細(xì)胞在對(duì)照組分別為1．82±0．43%和1．89±0．42%，顯著高于膠質(zhì)瘤組的1．44±0．24%和1．52±0．26%（P＜0．05）。DC1細(xì)胞和DC2細(xì)胞亞型在膠質(zhì)瘤Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)、Ⅳ級(jí)不同分級(jí)之間存在顯著的差異（P＜0．05）。DC1細(xì)胞和DC2細(xì)胞術(shù)后1d和3d均顯著低于術(shù)前（P＜0．05）。DC1細(xì)胞和DC2細(xì)胞術(shù)后3d又顯著低于術(shù)后1d（P＜0．05），術(shù)后7d恢復(fù)到術(shù)前水平（P＞0．05）。結(jié)論膠質(zhì)瘤患者中存在DC細(xì)胞的低表達(dá)，不同分級(jí)之間DC細(xì)胞表達(dá)存在顯著差異，手術(shù)治療可以顯著減低DC細(xì)胞表達(dá)，為膠質(zhì)瘤患者圍手術(shù)期免疫治療的時(shí)期選擇提供了一定的理論依據(jù)。

腦膠質(zhì)瘤；樹(shù)突狀細(xì)胞；神經(jīng)外科

腦膠質(zhì)瘤（brain glioma）是中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤中最為常見(jiàn)腫瘤，起源于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng)與周圍正常腦組織分界不清，導(dǎo)致了腫瘤細(xì)胞外科手術(shù)無(wú)法徹底切除，需要手術(shù)后輔以放療和化療等綜合治療[1]，但由于血腦屏障對(duì)化療藥物的阻擋作用，以及膠質(zhì)瘤細(xì)胞對(duì)放療不敏感性，因此手術(shù)、放療、化療常規(guī)治療方法對(duì)膠質(zhì)瘤病人的治療效果并不顯著[2]。以樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cell，DC)為基礎(chǔ)的免疫治療作為一種特殊的治療方式，越來(lái)越引起人們的重視[3]。DC細(xì)胞是目前已知的體內(nèi)最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞(Antigen presenting cells，APC)，將腫瘤抗原遞呈給T細(xì)胞，并參與T細(xì)胞活化，殺滅腫瘤細(xì)胞[4]，已有的研究顯示以DC疫苗為基礎(chǔ)的主動(dòng)免疫治療在膠質(zhì)瘤中可以取得顯著的療效[5]。本研究檢測(cè)了腦膠質(zhì)瘤患者外周血DC細(xì)胞的改變，探討了其相關(guān)的臨床意義。

1 材料與方法

1．1臨床病例資料收集2015年1月至2016年4月我院神經(jīng)外科收治的腦膠質(zhì)瘤患者44例，所有病例均經(jīng)病理證實(shí)，組織學(xué)類型為星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤，其中男22例，女22例，年齡40～71歲，平均年齡58．7±11．3歲，WHO分級(jí)Ⅰ級(jí)10例，Ⅱ級(jí)11例，Ⅲ級(jí)12例，Ⅳ級(jí)11例。所有病例術(shù)前未經(jīng)化療、放療或其他治療。另取同期我院健康體檢者40例作為正常對(duì)照，其中男20例，女20例，年齡40～72歲，平均58．2±11．6歲。兩組樣本在性別、年齡臨床資料方面無(wú)顯著性差異（P＞0．05），具有可比性。

1．2主要試劑和儀器單個(gè)核細(xì)胞分離試劑盒購(gòu)自天津?yàn)笊镏破房萍加邢挢?zé)任公司，PECDl1c、FITC－CD123、APC－HLA－DR流式抗體購(gòu)自美國(guó)BD公司，F(xiàn)ACBCalibu流式細(xì)胞分析儀為美國(guó)BD公司產(chǎn)品。

1．3 DC細(xì)胞的流式細(xì)胞儀檢測(cè)取受試者術(shù)前、術(shù)后1d、3d、7d外周靜脈血5ml，單個(gè)核細(xì)胞的分離使用密度梯度離心分離法，按照試劑盒說(shuō)明5ml靜脈血加入等體積的分離液，1500g×20min，血漿層和分離液交界處即為單個(gè)核細(xì)胞層，吸出單個(gè)核細(xì)胞層。調(diào)整細(xì)胞濃度為106個(gè)細(xì)胞/ml，標(biāo)本分成2份，按照抗體說(shuō)明書一份標(biāo)本加入PE－CDl1c、APC－HLA－DR，另一份加入FITC－CD123、APCHLA－DR室溫避光孵育30min。同型對(duì)照調(diào)零，流式細(xì)胞儀檢測(cè)PE－CDl1c、APC－HLA－DR雙陽(yáng)性的DC1細(xì)胞和FITC－CD123、APC－HLA－DR雙陽(yáng)性的DC2細(xì)胞。

1．4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 13．0軟件進(jìn)行分析，兩組樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，多組間均數(shù)比較采用方差分析，P＜0．05為統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異。

2 結(jié)果

2．1 DC細(xì)胞亞群在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)DC細(xì)胞分為DC1細(xì)胞和DC2細(xì)胞兩個(gè)亞型，從表1可見(jiàn)DC1細(xì)胞和DC2細(xì)胞在對(duì)照組分別為1．82±0．43%和1．89±0．42%，顯著高于膠質(zhì)瘤組的1．44±0．24%和1．52±0．26%（P＜0．05）。

表1 兩組DC1細(xì)胞和DC2細(xì)胞表達(dá)的比較

2．2 DC細(xì)胞亞群在腦膠質(zhì)瘤不同分級(jí)中的表達(dá)從表2可見(jiàn)DC1細(xì)胞和DC2細(xì)胞亞型在膠質(zhì)瘤Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)、Ⅳ級(jí)不同分級(jí)之間存在顯著的差異（P＜0．05）。

2．3 DC細(xì)胞亞群在術(shù)后的動(dòng)態(tài)變化從表3可見(jiàn)DC1細(xì)胞和DC2細(xì)胞術(shù)后1d和3d均顯著低于術(shù)前（P＜0．05）。DC1細(xì)胞和DC2細(xì)胞術(shù)后3d又顯著低于術(shù)后1d（P＜0．05），術(shù)后7d恢復(fù)到術(shù)前水平（P＞0．05）。

表2 四組DC1細(xì)胞和DC2細(xì)胞表達(dá)的比較

表3 DC1細(xì)胞和DC2細(xì)胞術(shù)后表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化

3 討論

腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)極為復(fù)雜的過(guò)程，發(fā)病機(jī)制目前仍不清楚，其中涉及到病毒感染、遺傳、環(huán)境、免疫等多種因素，近年來(lái)免疫系統(tǒng)的紊亂逐漸引起了學(xué)者們的關(guān)注，并成為了研究的熱點(diǎn)[6，7]。樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)的研究是近幾年腫瘤免疫治療領(lǐng)域中的熱點(diǎn)之一，由于膠質(zhì)瘤的特殊性以DC細(xì)胞為基礎(chǔ)的免疫治療有可能成為繼手術(shù)、放療、化療后的膠質(zhì)瘤第四種臨床治療方法[8，9]。DC細(xì)胞分為DC1細(xì)胞和DC2細(xì)胞兩個(gè)亞型，不同的亞型具有不同的生物學(xué)功能，例如DCl誘導(dǎo)Th1分化，DC2誘導(dǎo)Th2分化[10]，本研究檢測(cè)了DC細(xì)胞的兩個(gè)亞型，結(jié)果顯示膠質(zhì)瘤患者外周血DC1和DC2細(xì)胞比例顯著低于健康對(duì)照人群，說(shuō)明了膠質(zhì)瘤患者DC細(xì)胞的低表達(dá)與膠質(zhì)瘤的發(fā)生可能密切相關(guān)。進(jìn)一步的分析顯示DC1細(xì)胞和DC2細(xì)胞亞型在膠質(zhì)瘤Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)、Ⅳ級(jí)不同分級(jí)之間也存在顯著的差異，WHO分級(jí)中指出Ⅱ級(jí)及以上的膠質(zhì)瘤為惡性膠質(zhì)瘤[11，12]，結(jié)果顯示Ⅱ級(jí)及以上的膠質(zhì)瘤DC1細(xì)胞和DC2細(xì)胞顯著低于Ⅰ級(jí)，說(shuō)明了膠質(zhì)瘤患者DC細(xì)胞的低表達(dá)與患者的預(yù)后也有著密切的聯(lián)系。

大量的實(shí)驗(yàn)室證據(jù)顯示DC細(xì)胞可激活患者體內(nèi)自身的免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)機(jī)體的抗癌能力，阻止腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)等[13－15]，本研究的結(jié)果觀察到手術(shù)后患者DC1細(xì)胞和DC2細(xì)胞比例會(huì)顯著減低，第3d達(dá)到低值，到第7d時(shí)可以恢復(fù)到術(shù)前水平，術(shù)后DC1細(xì)胞和DC2細(xì)胞的減低可能是因?yàn)槭中g(shù)創(chuàng)傷以及麻醉應(yīng)激等刺激兒茶酚胺、糖皮質(zhì)激素等內(nèi)源性激素釋放入血，抑制了免疫功能，這一發(fā)現(xiàn)可以為膠質(zhì)瘤患者免疫治療提供一定的理論依據(jù)，例如術(shù)后盡量早期使用DC細(xì)胞免疫治療。

綜上所述，本研究顯示膠質(zhì)瘤患者中存在DC細(xì)胞的低表達(dá)，不同分級(jí)之間DC細(xì)胞表達(dá)存在顯著差異，手術(shù)治療可以顯著減低DC細(xì)胞表達(dá)，為膠質(zhì)瘤患者圍手術(shù)期免疫治療的時(shí)期選擇提供了一定的理論依據(jù)。

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The expresssion of DC cells in patients with brain glioma and its clinical significance

WANG Weifeng1，ZHANG Zhifeng2.1. Department of Neurosurgery，Jiyuan people's Hospital，Jiyuan Henan，459000，China；2.Department of Neurosurgery，the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University，Zhengzhou，450000，China.

Objective To detect the expresssion of DC cells in patients with brain glioma and explore its clinical significance．Methods A total of 44 patients with brain glioma were enrolled in our hospital．Another 40 cases of healthy person were used as normal control．The DC cells were detected by cytometry analysis．Results The proportion of the DC1 and DC2 cells in control group was 1．82±0．43%and 1．89±0．42%，which was higher than that of 1．44±0．24%and 1．52±0．26%in glioma group(P＜0．05)．There was significant difference of DC1 and DC2 cells among gradeⅠ，Ⅱ，Ⅲ，andⅣ(P＜0．05)，After operation for 1d and 3d，DC1 and DC2 cells were significantly lower than that before operation(P＜0．05)，Which was significantly lower 3d than 1d after operation (P＜0．05)．DC1 cells and DC2 cells recovered to the preoperative level after operation 7d(P＞0．05)．Conclusion The expression of DC cells was lower patients with glioma，which bore significant difference among different grades．Operation therapy can significantly reduce the expression of DC cells，which provides a theoretical basis for selection of appropriate period in immunotherapy of glioma patients．

Brain glioma；Dendritic cells(DC)；Neurosurgery

R446．8，R739．41

A

1674－1129(2017)02－0196－03

10．3969/j.issn.1674－1129．2017．02．018

2016-12-12；

2017-03-09)

王偉豐，男，1980年生，本科學(xué)士，主治醫(yī)師，神經(jīng)外科專業(yè)，研究方向：腦膠質(zhì)瘤的綜合治療。

張智峰，男，1972年生，博士畢業(yè)，神經(jīng)外科專業(yè)，主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師，研究方向：腦膠質(zhì)瘤的綜合治療、顱底腫瘤的基礎(chǔ)與臨床治療。