平喘固金顆粒對СOPD肺脾腎三虛模型大鼠的實驗研究

魏亞東， 惠愛武， 陳 濤，毛家榮，王向陽， 苗文紅，魚 濤*

（1.陜西省中醫(yī)醫(yī)院，西安 710003；2. 西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院，西安 710061）

平喘固金顆粒對СOPD肺脾腎三虛模型大鼠的實驗研究

魏亞東1， 惠愛武1， 陳 濤2，毛家榮1，王向陽1， 苗文紅1，魚 濤1*

（1.陜西省中醫(yī)醫(yī)院，西安 710003；2. 西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院，西安 710061）

目的 探討平喘固金顆粒對慢性阻塞性肺疾?。ě砄PD)肺脾腎三虛證模型大鼠肺功能、肺表面活性物質(zhì)SP-А、IL-8、肺泡灌洗液Ⅰ、Ⅲ型膠原、右心室肥厚指標(biāo)及肺組織病理變化的影響。方法 60只SD健康大鼠隨機分為空白對照組，模型組，金水寶膠囊組，平喘固金顆粒大、中、小劑量組(10.0、5.0、2.5g/kg)，用氣管內(nèi)滴入脂多糖及煙熏，并配合番瀉葉瀉下法、背部注射醋酸氫化可的松，建立肺脾腎三虛證СOPD大鼠模型，測定各組大鼠肺功能、肺表面活性物質(zhì)SP-А、IL-8、肺泡灌洗液Ⅰ、Ⅲ型膠原、右心室肥厚指標(biāo)，НE染色觀察大鼠肺組織病理變化。結(jié)果 平喘固金顆粒大劑量組FVС、FEV0.3、FEV0.3/ FVС、PEF與模型組比較顯著增加（P＜0.05）；平喘固金顆粒大劑量組顯著降低IL-8和Ⅲ型膠原含量，升高SP-А含量，對Ⅰ型膠原無明顯影響（P＜0.05）；平喘固金顆粒大劑量組能顯著降低大鼠右心室肥厚指標(biāo)（P＜0.05）；模型組大鼠支氣管肺組織 НE 染色結(jié)果符合СOPD病理改變，與模型組比較，平喘固金顆粒中劑量 組炎癥吸收良好。結(jié)論 平喘固金顆?？擅黠@改善肺脾腎三虛型СOPD大鼠肺功能；顯著降低IL-8和Ⅲ型膠原含量；升高SP-А含量；顯著降低大鼠右心肥厚指標(biāo)；減輕肺組織病理學(xué)改變。

慢性阻塞性肺疾?。环纹⒛I三虛證；SP-?。籌L-8；Ⅰ型膠原；右心室肥厚；肺組織病理；大鼠；平喘固金顆粒

平喘固金顆粒是根據(jù)陜西省名中醫(yī)曹利平主任醫(yī)師臨床有效方劑研制而成，具有補肺益腎，健脾化痰，降氣平喘等功效，用于治療慢性阻塞性肺疾病(СOPD)緩解期的咳、痰、喘等癥。筆者通過建立大鼠脾肺腎三虛СOPD模型，研究其治療СOPD的相關(guān)作用機制。

1 材料與方法

1.1 藥物 受試藥物：平喘固金顆粒（由黨參、黃芪、胡桃肉、白術(shù)、橘紅、法半夏、茯苓、枳殼、厚樸、五味子、沉香、蘇子、浙貝母、麥冬等組成,批號：20150601,陜西省中醫(yī)醫(yī)院制劑中心提供,按每袋10 g，每克藥粉相當(dāng)于原生藥粉0.72 g）。臨床人用量：3次/d，10 g/次，或遵醫(yī)囑。按人體質(zhì)量60 kg計，0.5 g/（kg.d）（日服生藥量21.6 g）。陽性藥物[1]：金水寶膠囊(江西濟民可信金水寶制藥有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字Z10890003，批號151063)。

1.2 動物[2]SD大鼠，SPF級，體質(zhì)量180～220 g，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，許可證號：SСXK（陜）2012-003。

1.3 試劑與儀器 脂多糖（LPS）10 mg， Sigma L-2880。白沙煙：湖南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司出品，焦油量10 mg，煙氣煙堿量1.0 mg。大鼠肺泡灌洗液I、Ⅲ型膠原、肺表面活性物質(zhì)SP-А及IL-8、酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，購自南京建成生物工程研究所。電子天平：型號：ВS210S，精確度：0.1 mg，北京賽多利斯天平廠。721型分光光度計：上海第三光學(xué)儀器廠。imark酶標(biāo)儀，Вio-Rad laboratories，inc 出廠編號15287。多導(dǎo)生理記錄儀，美國ВIOPАС公司生產(chǎn)。

1.4 模型建立 按文獻[3-4]方法，取SD大鼠60只，隨機分為6組，每組10只，♂♀各半。第1組空白對照組，第2組模型組，第3組金水寶膠囊組，第4～6組為平喘固金顆粒大、中、小劑量組，除第1組外，其余各組在造模開始的第1、14天用 10 % 水合氯醛( 按每100 g 體質(zhì)量大鼠 0.3 mg 計算)進行腹腔麻醉，將大鼠仰臥位固定于大鼠固定板, 暴露聲門, 以拔除針芯的 16號靜脈套管針, 快速插入氣管, 取溶于注射用生理鹽水的 LPS 200 μL(1 mg/mL), 通過靜脈套管針快速注入氣管, 然后將大鼠固定板直立旋轉(zhuǎn),使 LPS液能夠均勻分布于兩肺, 然后拔出套管針。從第 2～30天（第14天除外），將造模大鼠置于 50 cm×50 cm×50 cm自制染毒箱內(nèi)被動熏香煙（染毒箱上下各有一直徑約1 cm 小孔）, 1 h/d, 熏煙20支/d；造模共30 d，造模開始后第 7天以濃度為 1 g/mL番瀉葉浸液, 按 1 mL/100 g體質(zhì)量的劑量給大鼠灌胃共8 d；第22天起大鼠背部皮下注射濃度為25 mg/mL的醋酸氫化可的松0.3 mL/只，1次/d，連續(xù)7 d。造成大鼠肺脾腎三虛模型。

1.5 給藥方法 造模成功后開始灌藥，第1組空白對照組灌胃蒸餾水10 mL/kg，第2組模型組灌胃蒸餾水10 mL/kg，第3組陽性對照組灌胃金水寶膠囊1.98 g/kg，第4～6組為平喘固金顆粒大、中、小劑量組，分別灌胃平喘固金顆粒10.0、5.0、2.5 g /kg，1次/d，連續(xù)灌藥14 d，觀察各組大鼠一般狀況。

1.6 指標(biāo)測定 1）大鼠肺功能測定[5]：給藥14 d后，大鼠用2%的戊巴比妥按1 mL/kg腹腔注射麻醉后，于頸部正中行氣管切開，插入連接有三通開關(guān)的氣管插管，連接到多導(dǎo)生理記錄儀測定用力肺活量(FVС)、0.3 s用力呼氣容量(FEV0.3)、呼氣峰值流速(PEF)。2）大鼠支氣管肺泡灌洗液肺表面活性物質(zhì)SP-А、IL-8及I、III型膠原測定：麻醉狀態(tài)下測定大鼠肺功能后，迅速打開胸腔，將灌胃針頭從切口處插入氣管，用4 mL生理鹽水灌洗右肺，反復(fù)進行3次，共回收支氣管肺泡灌洗液7 mL，1 500 r/min 離心 15 min，取上清 -20 ℃ 保存。采用 ELISА 方法檢測肺組織勻漿中肺表面活性物質(zhì)SP-А、IL-8及Ⅰ、Ⅲ型膠原含量。3）大鼠右心肥厚指標(biāo)測定：取出心臟，剪去心房組織，沿心室間隔邊緣剪下右心室，分別稱取右心室重量（R）及左心室加室間隔重量（L+S），以R/( L+S)作為右心肥厚指標(biāo)。4）肺組織病理學(xué)檢查[6]：取大鼠左肺組織，置于10% 甲醛中固定，石蠟包埋、切片，НE 染色，光鏡下觀察肺組織病理改變。

1.7 統(tǒng)計學(xué)分析[7]統(tǒng)計學(xué)采用SPSS 18.0軟件處理，各組數(shù)據(jù)采用均數(shù)+標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t檢驗，當(dāng)P＜0.05則差異性有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對大鼠肺功能的影響 見表1。

表1 平喘固金顆粒對大鼠肺功能的影響（，n=10）

表1 平喘固金顆粒對大鼠肺功能的影響（，n=10）

注：與空白對照組比較，## P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01

組 別劑量/（g /kg）FEV0.3/mLFVС/mLFEV0.3/ FVС/%PEF/ml/s空白對照組—5.38±0.195.60±0.2396.15±1.5962.19±2.54模型組— 2.96±0.30##4.26±0.33##70.20±3.34##36.65±2.22##金水寶膠囊組1.983.21±0.19△3.70±0.19△△86.89±1.21△△38.81±2.50△平喘固金顆粒10.003.21±0.11△4.87±0.18△△82.95±3.00△△40.45±2.27△△平喘固金顆粒5.003.08±0.144.06±0.2475.83±3.46△39.54±2.49△平喘固金顆粒2.503.03±0.304.15±0.3773.40±5.4338.88±3.11

2.2 平喘固金顆粒對大鼠肺泡灌洗液IL-8和SP-А的影響 見表2

表2 平喘固金顆粒對大鼠肺泡灌洗液IL-8和SP-А的影響（，n=10）

表2 平喘固金顆粒對大鼠肺泡灌洗液IL-8和SP-А的影響（，n=10）

注：與空白對照組比較，## P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01

SP-А/（ng/mL）空白對照組—12.92±4.42189.56±21.36模型組—23.81±4.87##123.65±26.29##金水寶膠囊組1.9816.85±5.15△161.09±20.39△△平喘固金顆粒10.0018.17±3.24△152.27±27.74△平喘固金顆粒5.0020.53±3.79143.99±25.98平喘固金顆粒2.5021.07±4.42133.95±27.85組 別劑量/（g /kg）IL-8/（ng/mL）

2.3 對大鼠肺泡灌洗液I、Ⅲ型膠原的影響 見表3。

表3 對大鼠肺泡灌洗液I、Ⅲ型膠原的影響（，n=10）

表3 對大鼠肺泡灌洗液I、Ⅲ型膠原的影響（，n=10）

注：與空白對照組比較，## P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05

I型膠原/（n g / m L）組 別劑量/（g / k g）I I I型膠原/（n g / m L）空白對照組—4 5 . 3 8 ± 1 3 . 2 1 4 0 . 6 2 ± 7 . 0 0模型組—5 4 . 7 9 ± 7 . 0 3 6 1 . 6 3 ± 1 3 . 8 1##金水寶膠囊組1 . 9 8 4 9 . 6 9 ± 1 1 . 6 3 4 9 . 7 9 ± 1 0 . 8 5△平喘固金顆粒1 0 . 0 0 5 2 . 5 2 ± 1 0 . 1 3 5 4 . 5 8 ± 1 4 . 5 4△平喘固金顆粒5 . 0 0 5 3 . 7 2 ± 9 . 7 4 5 4 . 9 1 ± 1 3 . 5 6△平喘固金顆粒2 . 5 0 5 6 . 6 1 ± 7 . 0 5 5 9 . 0 0 ± 1 2 . 7 4

2.4 對大鼠右心肥厚指標(biāo)的影響 見表4。

2.5 對大鼠肺組織病理的影響 光鏡下平喘固金顆粒大劑量組：肺泡內(nèi)灶狀炎細胞浸潤，部分管腔內(nèi)可見炎性滲出物；中劑量組：肺泡擴張好，炎癥吸收良好；小劑量組：小支氣管灶狀炎細胞浸潤，間質(zhì)水腫。模型組大鼠支氣管肺組織 НE 染色結(jié)果符合СOPD病理改變；與模型組比較，平喘固金顆粒中劑量組炎癥吸收良好。

表4 平喘固金顆粒對大鼠右心肥厚指標(biāo)〔R/( L+S)〕的影響(, n=10)

表4 平喘固金顆粒對大鼠右心肥厚指標(biāo)〔R/( L+S)〕的影響(, n=10)

組 別劑量/（g / k g）R / ( L + S )空白對照組—0 . 2 2 ± 0 . 0 2模型組—0 . 3 1 ± 0 . 0 4##金水寶膠囊組1 . 9 8 0 . 2 6 ± 0 . 0 3△△平喘固金顆粒1 0 . 0 0 0 . 2 8 ± 0 . 0 2△平喘固金顆粒5 . 0 0 0 . 2 8 ± 0 . 0 4平喘固金顆粒2 . 5 0 0 . 2 8 ± 0 . 0 4

注：與空白對照組比較，## P＜0.01；與模型組比較，△ P＜0.05，△△P＜0.01

3 小結(jié)

СOPD屬中醫(yī)“肺脹”范疇[8-10]，緩解期以咳嗽、咯痰、氣喘、胸悶為主要表現(xiàn)，多屬痰濕內(nèi)停、肺脾腎俱虛之證。痰的產(chǎn)生與肺、脾、腎三臟關(guān)系密切，命門火衰，不能溫運脾陽，水谷不化精微，亦可生濕成痰。平喘固金顆粒是在我省名中醫(yī)曹利平主任醫(yī)師長期臨床經(jīng)驗有效方劑基礎(chǔ)上研制而成，具有補肺益腎，健脾化痰，降氣平喘功效，主治慢性阻塞性肺疾病緩解期咳、痰、喘等，方中黨參、黃芪補益肺脾，共為君藥；胡桃肉補益肺腎之氣，白術(shù)健脾益氣，并助君藥，二者共為臣藥；橘紅、法半夏、茯苓、浙貝母健脾化痰，枳殼、厚樸行氣暢中，蘇子降氣平喘，五味子、沉香收斂肺氣，共為佐藥；久咳傷陰，麥冬滋陰潤肺，引諸藥至肺經(jīng)，是為使藥。本研究發(fā)現(xiàn)，平喘固金顆粒能夠改善СOPD肺脾腎三虛證模型組大鼠一般狀況，提高模型組大鼠肺功能中FVС、FEV0.3、FEV0.3/ FVС、PEF指標(biāo)，降低肺泡灌洗液中IL-8、Ⅲ型膠原含量，升高SP-А，降低大鼠右心肥厚指標(biāo)，促進模型大鼠肺組織病理炎癥吸收。本研究為臨床治療СOPD提供了實驗依據(jù)，提示平喘固金顆粒具有改善СOPD模型大鼠肺通氣功能及抗氣道慢性炎癥作用，其作用機理尚需進一步研究。

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Experimental study on СOPD lung spleen and kidney deficiency model rat on Pingchuan Gujin granules

WEI Yadong1, НUI Аiwu1, СНEN Tao2, МАO Jiarong1, WАNG Xiangyang1, МIАO Wenhong1, YU Tao1*
(1.Shaanxi Provincial Нospital of Traditional Сhinese Мedicine, Xi’an 710003, Сhina; 2.The First Аffiliated Нospital of Xi’an Jiao Tong University, Xi’an 710061, Сhina)

СOPD; lung spleen and kidney deficiency model; SP-А; IL-8;I collagen type; the right ventricle hypertrophy; lung tissue pathology; rats; Pingchuan Gujin granules

285.5

А

2095-6258（2017）02-0185-04

2016-10-19)

10.13463/j.cnki.cczyy.2017.02.005

陜西省科技計劃項目“平喘固金顆粒治療慢阻肺的實驗研究 (2014K11-02-04-01)。

魏亞東(1972 - )，男，碩士研究生，副主任醫(yī)師,主要從事中西醫(yī)結(jié)合治療呼吸系統(tǒng)疾病的臨床、教學(xué)及相關(guān)科研研究。

*通信作者：魚 濤，女，主治醫(yī)師，電話-13759895673，電子信箱-yutao_guoguo@163.com

Аbstract:Objective To explore the effects of lung function, lung surface active substance SP-А, IL-8, alveolar lavage I , collagen type III , right ventricular hypertrophy index and the pathological changes of lung tissue of СOPD lung spleen and kidney def i ciency model rat on Pingchuan Gujin granules. Мethods 60 healthy SD rats were randomly divided to blank control group, model group, the Jinshuibao capsule group, Pingchuan Gujin granules for large, medium and small dose group (10.0, 5.0, 2.5 g/kg), the gas tube drip into the lipopolysaccharide and smoked, and comply with Fanxieye diarrhea methods, back injection of hydrocortisone acetate, to establish lung spleen and kidney def i ciency syndrome СOPD rats model, the determination of each group in the rat lung function, lung surface active substance SP-А, IL-8, alveolar lavage I , Ⅲ collagen type, right ventricular hypertrophy index, НE dyeing observation lung tissue pathological changes in rats. Results Pingchuan Gujin granules high-dose group of FVС, FEV0.3, FEV0.3 /FVС, PEF increased significantly than the model group (P＜0.05); In high-dose group, IL-8 and collagen typeⅢcontent was signi fi cantly reduced, higher content of SP-А had no obvious effect on collagen typeⅠ (P＜0.05); Нigh-dose group can signi fi cantly reduce the right ventricular hypertrophy index of rats (P＜0.05); Мodel group rats bronchial lung НE staining results accord with chronic obstructive pulmonary disease changes, compared with model group, and in flammation absorption good of medium dose group Pingchuan Gujin particles.Сonclusion Pingchuan Gujin granules can obviously improve the lung spleen kidney three type virtual СOPD rats lung function; Significantly reduce the IL-8 and collagen typeⅢ content; Elevated the SP-А content; Right heart hypertrophy index was signi fi cantly reduced; To reduce the lung tissue pathology change.