血痛定巴布劑抗炎鎮(zhèn)痛作用的藥效學(xué)研究

侯 君，竇建衛(wèi)，李 靜，劉愛琴，由鳳鳴，鄭德志，李聃丹，周龍甫，呼永河

血痛定巴布劑抗炎鎮(zhèn)痛作用的藥效學(xué)研究

侯 君1，竇建衛(wèi)2，李 靜1，劉愛琴3，由鳳鳴4，鄭德志5，李聃丹6，周龍甫1，呼永河1

目的 評價血痛定巴布劑的抗炎鎮(zhèn)痛作用。 方法 采用炎癥、疼痛動物模型，觀察血痛定巴布劑的藥效作用。 結(jié)果 血痛定巴布劑可顯著降低小鼠腹腔毛細血管通透性，可顯著降低二甲苯所致耳廓腫脹和小鼠肉芽腫，可顯著抑制角叉菜膠所致足趾腫脹；可顯著減少醋酸致小鼠扭體次數(shù)，對小鼠熱刺激所致痛閾值的變化不明顯。 結(jié)論 血痛定巴布劑具有明顯的抗炎作用，無鎮(zhèn)痛作用。

血痛定巴布劑；抗炎；鎮(zhèn)痛

血痛定巴布劑是課題組針對基層部隊外訓(xùn)常見軟組織損傷而新研制的一種中藥復(fù)方制劑，由三七、獨一味、大黃、紫草、冰片等中藥組成，具有消腫止痛、活血祛瘀和止血之功效，主要用于治療急性軟組織損傷所致的局部腫脹、疼痛，局部瘀斑或傷口出血、滲血等。為驗證其有效性，課題組采用小鼠炎癥模型和小鼠痛覺模型評價其抗炎、鎮(zhèn)痛作用，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 血痛定巴布劑（自制，批號：20120701，7 cm×10 cm／貼（10.5 g生藥／mL））；空白基質(zhì)（自制）；阿斯匹林（大同長興制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)，國藥準字HI4020657，批號：0704004）；醋酸潑尼松片（浙江仙琚制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號：080901，5 mg／片）；鹽酸嗎啡注射液（沈陽第一制藥廠制造，批號：000303，10支／盒，10 mg／mL／支）；硫化鈉（成都市化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號：980923，500 g／瓶）；二甲苯（成都市科龍化工試劑廠，批號：20051103，500 mL／瓶）；依文斯藍（Sigma試劑，批號：2062425）；CARRAGEENAN（角叉菜）（SIGMA，批號：46H0910，25 g／瓶）；無水乙醚（成都長聯(lián)化工試劑有限公司，批號：20120409，500 mL／瓶）。

1.2 儀器 MS204S型New classic電子天平（梅特勒—托利多儀器（上海）有限公司）；EB?3200D電子天平（日本SHIMADZU）；全波長掃描式多功能讀數(shù)儀（ThermoFisher scientific）；PV?200足跖容積測量儀（成都泰盟科技有限公司）；LDZ4?0.8離心機（北京醫(yī)用離心機廠）；DB210SD電熱鼓風(fēng)恒濕干燥箱（成都天宇試驗設(shè)備有限公司）。

1.3 實驗動物 SPF昆明小鼠，一級，18～22 g，雄性200只，雌性120只；SD大鼠，一級，180～220 g，雄性，60只。許可證號：SCXK（川）2013?19號。供應(yīng)單位：四川省中醫(yī)藥科學(xué)院實驗動物中心。實驗室溫度：18～22℃，相對濕度：60%～70%，光照條件：12 h／12 h明暗交替，通風(fēng)情況：自動定時過濾通風(fēng)換氣，換氣頻度10～15次／h。

1.4 給藥方法及劑量 參照文獻［1?2］的方法進行。實驗開始前24 h做皮膚準備，將各組實驗動物背部用8%硫化鈉溶液脫毛，小鼠脫毛面積約2 cm×2 cm，大鼠約3 cm×3 cm，操作時動作輕柔，避免皮膚受損，脫毛后以溫水洗凈去毛區(qū)皮膚，24 h后檢查去毛區(qū)皮膚是否有損傷。涂敷藥物前以溫水洗凈去毛區(qū)皮膚。血痛定巴布劑最大載藥量為10.5 g生藥，按1貼／人即臨床劑量約為0.175 g生藥／kg。安全性評價結(jié)果表明SD大鼠經(jīng)皮給予血痛定巴布劑的最大耐受劑量（MTD）大于6.3 g生藥／只。結(jié)合小鼠、大鼠皮膚給藥操作實際，劑量設(shè)計見表1、表2。

表1 血痛定巴布劑小鼠經(jīng)皮給藥劑量設(shè)計表（以20 g體重計）

表2 血痛定巴布劑大鼠經(jīng)皮給藥劑量設(shè)計表（以大鼠200 g體重計）

1.5 方法 參照文獻［3?8］的方法進行。

1.5.1 對小鼠腹腔毛細血管通透性影響的實驗 取雄性小鼠60只，按體重隨機分為5組，每組12只。血痛定巴布劑高、中、低劑量組分別按141 mg、70.6 mg和35.3 mg生藥／只的劑量背部貼敷血痛定巴布劑，每日1次，連續(xù)5 d。模型組背部貼敷空白基質(zhì)巴布劑，每日1次，連續(xù)5 d。阿斯匹林組每天灌胃給藥1次，連續(xù)5 d，0.1 mL／10g，濃度為20 mg／mL。

末次給藥前小鼠禁食不禁水20 h，準確稱量小鼠空腹體重。阿斯匹林末次給藥后1 h，受試藥及模型組給藥后2 h，尾靜脈注射2%依文斯藍生理鹽水溶液0.1mL／10g，腹腔注射0.75%醋酸0.2 mL／只，20 min后，斷頭處死小鼠，腹腔注射生理鹽水5 mL／只，打開腹腔，用巴氏吸管取腹腔洗滌液，1000 rpm離心5 min。取上清，590 nm波長，生理鹽水調(diào)零，全波長掃描式多功能讀數(shù)儀測定吸光度。計算各藥物組對伊文思蘭滲出量的抑制率。

抑制率＝（模型組平均OD值－給藥組平均OD值）／模型組平均OD值×100%

1.5.2 對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹影響的實驗 取雄性小鼠60只，按體重隨機分為5組，每組12只。血痛定巴布劑高、中、低劑量組分別按 141 mg、70.6 mg和35.3 mg生藥／只的劑量背部貼敷血痛定巴布劑，每日1次，連續(xù)5 d。模型組背部貼敷空白基質(zhì)巴布劑，每日1次，連續(xù)5 d。醋酸潑尼松組于實驗第5日灌胃給藥1次，0.1 mL／10g，濃度為5 mg／mL。

受試藥組及模型組末次給藥后2 h，醋酸潑尼松組末次給藥后1 h。各組小鼠右耳廓兩面均勻涂抹二甲苯，每只20 μL，15 min后脫頸椎處死小鼠，沿耳廓邊緣剪下左、右兩耳，兩耳外沿重疊，沿根部修剪，電子天平稱重。計算耳腫脹度（右耳片重－左耳片重）和腫脹抑制率。

腫脹抑制率＝（模型組平均腫脹度－給藥組平均腫脹度）／模型組平均腫脹度×100%

1.5.3 對角叉菜膠致大鼠足腫脹影響的實驗 取雄性大鼠60只，按體重隨機分為5組，每組12只。血痛定巴布劑高、中、低劑量組分別按 1.12 g、0.56 g和0.28 g生藥／只的劑量背部貼敷血痛定巴布劑，每日1次，連續(xù)5 d。模型組背部貼敷空白基質(zhì)巴布劑，每日1次，連續(xù)5 d。醋酸潑尼松組于實驗第1日、3日、5日分別灌胃給藥1次，1 mL／100g，濃度為5 mg／mL。

末次給藥30 min后，大鼠右后足跖皮下注射1%角叉菜溶液0.1 mL／只，足跖容積測量儀測定1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h致炎大鼠腫脹右后足跖容積。按下式計算鼠足跖腫脹率、腫脹抑制率。

足跖腫脹率＝（致炎后足跖容積－致炎前足跖容積）／致炎前足跖容積×100%

腫脹抑制率＝（對照組平均腫脹率－給藥組平均腫脹率）／對照組平均腫脹率×100%

1.5.4 對小鼠棉球肉芽腫影響的實驗 取雄性小鼠50只，按體重隨機分為5組，每組10只。乙醚淺麻醉，在無菌條件下將10 mg干燥高壓滅菌棉球植入雙側(cè)腋窩皮下，隨即縫合皮膚。從手術(shù)當(dāng)日開始，血痛定巴布劑高、中、低劑量組分別按141 mg、70.6 mg和35.3 mg生藥／只的劑量背部貼敷血痛定巴布劑，每日1次，連續(xù)5 d。模型組背部貼敷空白基質(zhì)巴布劑，每日1次，連續(xù)5 d。氫化可的松組于術(shù)后第1、3、5天肌肉注射給藥1次，0.1mL／10g，濃度為2 mg／mL。

末次給藥后2 h，頸椎脫臼處死小鼠，將棉球連同周圍結(jié)締組織一起取出，剔除脂肪組織，置70℃烤箱12 h后稱重，減去原棉球重量即為肉芽腫凈重，計算肉芽腫系數(shù)及各組抑制率。氫化可的松組肌注給藥后45 min后同法操作。

肉芽腫系數(shù)＝棉球肉芽腫凈重（mg）／體重（10 g）

肉芽腫抑制率＝（對照組肉芽腫平均干重－給藥組肉芽腫平均干重）／對照組肉芽腫平均干重×100%

1.5.5 對醋酸致小鼠扭體影響的實驗 取小鼠60只，雌雄各半，按體重隨機分為5組，每組12只。血痛定巴布劑高、中、低劑量組分別按141 mg、70.6 mg和35.3 mg生藥／只的劑量背部貼敷血痛定巴布劑，每日1次，連續(xù)5 d。模型組背部貼敷空白基質(zhì)巴布劑，每日1次，連續(xù)5 d。阿斯匹林組每天灌胃給藥1次，連續(xù)5 d，0.1mL／10g，濃度為20 mg／mL。阿斯匹林組末次給藥后1 h，受試藥及模型對照組外敷給藥后 2 h，腹腔注射 0.75%冰醋酸溶液0.2 mL／只后，立即觀察并記錄小鼠在20 min內(nèi)的扭體次數(shù)。計算抑制率。

抑制率＝（模型組扭體次數(shù)－給藥組扭體次數(shù)）／模型組扭體次數(shù)×100%

1.5.6 對熱刺激致小鼠疼痛影響的實驗 取雌性小鼠90只，以小鼠舔后足所需時間為痛閾值，（55± 0.5）℃熱板法篩選痛閾值5～30 s合格小鼠。取篩選合格的小鼠70只，按痛閾值隨機分為5組，每組14只。血痛定巴布劑高、中、低劑量組分別按141 mg、70.6 mg和35.3 mg生藥／只的劑量背部貼敷血痛定巴布劑，每日1次，連續(xù)5 d。模型組背部貼敷空白基質(zhì)巴布劑，每日1次，連續(xù)5 d。血痛定巴布劑高、中、低各劑量組動物末次給藥時間為第一次測定痛閾值前120 min。鹽酸嗎啡組于第一次測定痛閾值前30 min，腹腔注射1次，0.1mL／10g，濃度為1 mg／mL。全部動物分別共測定3次痛閾值，間隔時間30 min。痛閾值超過60 s者則按60 s計算。

1.6 統(tǒng)計學(xué)分析 采用PEMS3.1分析軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差表示。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義

2 結(jié) 果

2.1 對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響 與模型組比較，血痛定巴布劑高劑量組腹腔洗液OD值顯著降低（P＜0.05），抑制率31.7%；中、低劑量組腹腔洗液OD值降低，無統(tǒng)計學(xué)差異；阿斯匹林組腹腔洗液OD值極顯著降低（P＜0.01），抑制率35.5%。見表3。

表3 對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響

2.2 對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響 與模型組比較，血痛定巴布劑高劑量組耳腫脹度（左右耳重量差）顯著減少（P＜0.05），腫脹抑制率為33.3%；中、低劑量組耳腫脹度（左右耳重量差）減少，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），腫脹抑制率分別為17.6%、8.2%；醋酸潑尼松組耳腫脹度（左右耳重量差）極顯著減少（P＜0.01），腫脹抑制率為68.4%。見表4。

表4 對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響

2.3 對角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響 各組動物1 h、2 h、3 h足跖腫脹率呈上升趨勢；4 h、5 h、6 h足跖腫脹率呈下降趨勢。與模型組比較，血痛定巴布劑高劑量組2 h、3 h、4 h、5 h足跖腫脹率顯著降低（P＜0.05），抑制率分別為19.70%、16.93%、17.39%、23.72%；中劑量組3 h、4 h足跖腫脹率顯著降低（P＜0.05），抑制率分別為16.79%、16.32%；低劑量組足跖腫脹率有降低趨勢，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；醋酸潑尼松組2 h、3 h、4 h、5 h、6 h足跖腫脹率極顯著降低（P＜0.01），抑制率分別為41.28%、 43.01%、60.10%、70.86%、78.16%。見表5、表6。

2.4 對小鼠棉球肉芽腫的影響 與模型組比較，血痛定巴布劑高劑量組肉芽腫凈重、肉芽腫系數(shù)極顯著減少（P＜0.01），肉芽腫抑制率為19.2%；中、低劑量組肉芽腫凈重、肉芽腫系數(shù)增加，肉芽腫抑制率分別為15.2%、－0.2%；醋酸潑尼松組肉芽腫凈重、肉芽腫系數(shù)極顯著減少（P＜0.01），肉芽腫抑制率為34.9%。見表7。

2.5 對醋酸致小鼠扭體的影響 與模型組比較，血痛定巴布劑高、中劑量組20 min內(nèi)扭體次數(shù)顯著減少（P＜0.01、P＜0.05），抑制率分別為 37.5%、29.6%；低劑量組扭體次數(shù)減少，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），抑制率為18.7%；阿斯匹林組20 min內(nèi)扭體次數(shù)顯著減少（P＜0.05），抑制率為61.8%。見表8。

2.6 對熱刺激致小鼠疼痛的影響 與模型組比較，血痛定巴布劑高、中、低劑量組3次痛閾值變化均不明顯，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；鹽酸嗎啡組給藥后30 min、60 min、90 min后痛閾值顯著增加（P＜0.01）。見表9。

表5 不同時間血痛定巴布劑對角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響

表6 不同時間血痛定巴布劑對角叉菜膠致大鼠足腫脹抑制率的影響

表7 血痛定巴布劑對小鼠棉球肉芽腫的影響

表8 血痛定巴布劑對醋酸致小鼠扭體的影響

表9 血痛定巴布劑對熱刺激致小鼠疼痛的影響

表9 血痛定巴布劑對熱刺激致小鼠疼痛的影響

與模型組比較，??P＜0.01

組別 n 劑量（mg生藥／只×d） 基礎(chǔ)痛閾值 痛閾值第1次測定 第2次測定 第3次測定模型組 14 等量賦形劑 18.75±3.30 22.13±6.79 22.14±7.19 21.10±5.90高劑量組 14 141×5 18.65±3.40 23.70±7.91 22.39±8.17 20.46±6.05中劑量組 14 70.6×5 18.68±3.62 22.66±6.39 21.07±7.16 20.90±5.78低劑量組 14 35.3×5 18.83±3.53 22.11±6.82 21.23±7.42 20.43±6.67鹽酸嗎啡組 14 10 mg／kg 18.81±3.36 54.75±8.39?? 48.23±13.71?? 33.08±13.17??

3 討 論

急性軟組織損傷是臨床常見病與多發(fā)病，屬中醫(yī)“筋傷”范疇?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證實：該病主要是受損組織的炎癥反應(yīng)，血管活性物質(zhì)和組胺等炎性介質(zhì)釋放的增加和酸性產(chǎn)物的積聚，使損傷部位的毛細血管通透性增加，血管張力下降，血流緩慢甚至瘀滯，從而加重炎癥病變［9］。目前針對這類疾病，西醫(yī)尚缺乏特效的治療方法，而中醫(yī)外治方法多，且安全有效，在臨床上廣為應(yīng)用［10］。血痛定巴布劑由三七、獨一味、大黃、紫草、冰片等中藥組成，具有消腫止痛、活血祛瘀和止血的功能。通過本次藥理試驗結(jié)果表明，在抗炎作用方面，血痛定巴布劑可顯著降低小鼠腹腔毛細血管通透性，可顯著降低二甲苯所致耳廓腫脹，可顯著降低棉球肉芽腫凈重、肉芽腫系數(shù)，可顯著抑制角叉菜膠所致足趾腫脹；可顯著減少醋酸致小鼠扭體次數(shù)，對小鼠熱刺激所致痛閾值的變化不明顯。以上結(jié)果表明，血痛定巴布劑對急性非特異性炎癥有較強的抗炎作用，對炎癥后期的組織增殖也有一定的抑制作用，對小鼠無明顯的鎮(zhèn)痛作用。

血痛定巴布劑的給藥方式為局部給藥，直接貼于患處?？寡鬃饔秒m不及西藥組，但具有給藥劑量準確，血藥濃度穩(wěn)定，吸收面積小，作用迅速持久、安全、舒適、方便等優(yōu)點［11?12］，對外訓(xùn)受到軟組織挫傷的戰(zhàn)士取得了良好的臨床療效，在臨床實踐中倍受患者歡迎，具有廣闊的發(fā)展前景。

［1］ 李 亨，許學(xué)猛，陳 能，等.自熱式痹痛巴布劑的藥效學(xué)研究［J］.中藥新藥與臨床藥理，2014，25（4）：442?445.

［2］ 李馳榮，張尊祥，蔡曉紅，等.散瘀止痛巴布膏對大鼠試驗性炎癥和疼痛藥效學(xué)研究［J］.東南國防醫(yī)藥，2008，10（5）：349?351.

［3］ 衛(wèi)生部藥政局.中藥新藥臨床前研究指導(dǎo)原則匯編［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社.

［4］ 陳 奇.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社.

［5］ 徐叔云，卞如濂，陳 修.藥理實驗方法學(xué)［M］.3版.北京：人民衛(wèi)生出版社.

［6］ 余玖霞，陸兔林，毛春芹，等.中藥硇砂不同品種抗炎作用及急性毒性實驗研究［J］.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2012，28（1）：77?79.

［7］ 張樂之，孟德勝，溫寶書，等.祛瘀寧痛貼治療急性軟組織損傷的實驗研究［J］.中國中醫(yī)骨傷科雜志，2004，12（1）：35?37.

［8］ 周國林，姚全勝，潘玉英.一種動物軟組織損傷的實驗方法［J］.中國藥理學(xué)通報，1991，7（5）：396?398.

［9］ 邵先舫，劉志軍，熊 輝，等.中醫(yī)藥外治急性軟組織損傷實驗研究現(xiàn)況及進展［J］.中醫(yī)藥導(dǎo)報，2011，17（2）：98?100.

［10］ 袁建迪，朱少兵，沈 彥，等.中醫(yī)外治急性軟組織損傷的臨床研究進展［J］.中醫(yī)外治雜志，2008，17（1）：41?43.

［11］ 賈 偉，高文遠，王 濤，等.中藥巴布劑的研究現(xiàn)狀［J］.中國中藥雜志，2003，28（1）：7?10.

［12］ 萬東桂.痛塊消巴布劑治療癌性疼痛的臨床研究［D］.北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2003：57?58.

Anti?inflammatory and analgesic effect of Xuetongding cataplasm

HOU Jun1，DOU Jian?wei2，LI Jing1，LIU Ai?qin3，YOU Feng?ming4，ZHENG De?zhi5，LI Dan?dan6，ZHOU Long?fu1，HU Yong?he1

（1.Department of Pharmacy，General Hospital of Chengdu Military Region，Chengdu610083，Sichuan，China；2.School of Pharmacy，Xi'an Jiaotong University，Xi'an710061，Shaanxi，China；3.Department of Ophthalmology，the452th Hospital of PLA，Chengdu610021，Sichuan，China；4.Department of Endocrinology，Attached Hospital of Chengdu University of TCM，Chengdu610075，Sichuan，China；5. Department of Cadiovascular Surgery，General Hospital of Jinan Military Region，Jinan250031，Shandong，China；6.Drug of Clinical Basement，XinQiao Hospital of the3rd Military Medical University，Chongqing400037，China）

Objective To evaluate the anti?inflammatory and analgesic effects of Xuetongding cataplasm. Methods Animal models of inflammation and ache were adopted，and pharmacodynamic actions of Xuetongding cataplasm were observed. Results Xuetongding cataplasm lowered the capillaries permeability distinctly and inhibited xylol?induced mouse ear inflammation and cotton ball?induced mouse granuloma.Xuetongding cataplasm could conspicuously restrain rat foot metatarsus tumid treated by carrag?eenan，and decreased the twist?reaction stimulated by acetic acid.Thermal stimulation did not change pain threshold significantly. Conclusion Xuetongding cataplasm has obvious anti?inflammatory effects，and no analgesic effects.

Xuetongding cataplasm；Anti?inflammatory；Analgesic effect

R285

A

1672?271X（2017）01?0008?05

10.3969／j.issn.1672?271X.2017.01.003

2016?06?14；

2016?12?05）

（本文編輯：葉華珍； 英文編輯：王建東）

國家科技重大專項課題（2014ZX09J14107?03B）

1.610083 成都，成都軍區(qū)總醫(yī)院藥劑科；2.710061 西安，西安交通大學(xué)藥學(xué)院；3.610021成都，解放軍第452醫(yī)院眼科；4.610075 成都，成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科；5.250031濟南，濟南軍區(qū)總醫(yī)院心外科；6.400037 重慶，第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院臨床藥理基地

呼永河，E?mail：djw＠m(xù)ail.xjtu.edu.cn

侯 君，竇建衛(wèi)，李 靜，等.血痛定巴布劑抗炎鎮(zhèn)痛作用的藥效學(xué)研究［J］.東南國防醫(yī)藥，2017，19（1）：8?12.