山東省雞源沙門(mén)氏菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

王曉藝，李濤，呂新新，張敏

（1.煙臺(tái)市牟平區(qū)姜格莊街道畜牧獸醫(yī)工作站，山東 煙臺(tái) 264114；2.青島潤(rùn)達(dá)生物科技有限公司，山東 青島 266200）

山東省雞源沙門(mén)氏菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

王曉藝1，李濤2，呂新新2，張敏2

（1.煙臺(tái)市牟平區(qū)姜格莊街道畜牧獸醫(yī)工作站，山東 煙臺(tái) 264114；2.青島潤(rùn)達(dá)生物科技有限公司，山東 青島 266200）

為了解山東地區(qū)雞沙門(mén)氏菌的流行及耐藥情況，本文對(duì)山東部分市縣的病死雞只進(jìn)行沙門(mén)氏菌的分離培養(yǎng)鑒定，最終得到12株致病性沙門(mén)氏菌菌種，并對(duì)分離菌株進(jìn)行耐藥性試驗(yàn)，結(jié)果鑒定12株沙門(mén)氏菌對(duì)沙門(mén)氏菌對(duì)替米考星、阿莫西林和林可霉素等均產(chǎn)生了一定的耐藥性，對(duì)潤(rùn)達(dá)炎迪克、硫酸粘菌素、呼治常安和強(qiáng)力霉素有一定的敏感性。

沙門(mén)氏菌；分離；藥敏試驗(yàn)

沙門(mén)氏菌是腸桿菌科革蘭氏陰性桿菌，廣泛存在于環(huán)境或寄居于人和動(dòng)物腸道內(nèi)，絕大多數(shù)對(duì)人和動(dòng)物具有致病性。雞源沙門(mén)氏菌是雞場(chǎng)的重要病原菌，可引發(fā)雞白痢、雞傷寒和禽副傷寒[1]，其典型癥狀為脾臟或肝臟表面密布黃白色壞死灶，心臟出現(xiàn)心肌炎癥狀，部分腸道或肺臟長(zhǎng)有白色肉芽。雞源沙門(mén)氏菌在雞群中能垂直感染，被感染成雞生長(zhǎng)性能或產(chǎn)蛋下降，雛雞大批死亡，死亡率高達(dá)80%，已成為危害養(yǎng)禽業(yè)的首要傳染病之一[2]。感染沙門(mén)氏菌或食用被帶菌者糞便污染的食品，可使人發(fā)生食物中毒，人畜感染后它可能加重病態(tài)或死亡率，或者降低動(dòng)物的繁殖生產(chǎn)力。沙門(mén)氏菌不但會(huì)對(duì)畜牧業(yè)生產(chǎn)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，而且會(huì)嚴(yán)重威脅人類(lèi)的健康，沙門(mén)氏菌病已成為一種常見(jiàn)多發(fā)的人畜共患病[3]。

對(duì)山東部分養(yǎng)雞場(chǎng)的雞源沙門(mén)氏菌病的流行情況進(jìn)行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)沙門(mén)氏菌廣泛存在于雞場(chǎng)中，由于沙門(mén)氏菌可以通過(guò)生殖道污染禽蛋，造成種蛋的孵化率降低和污染以及雞只的大規(guī)模發(fā)病和死亡，引起嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，極大困擾著養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展[4]。此外，濫用抗菌藥物造成耐藥菌株不斷產(chǎn)生，致使該病的治療越來(lái)越困難，給養(yǎng)雞業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。在這種背景下，快速、準(zhǔn)確地檢出病原體和體外藥敏分析結(jié)果就成為必要。本文從病死雞中分離培養(yǎng)沙門(mén)氏菌，用紙片法對(duì)分離菌株進(jìn)行藥物的敏感性研究，分析雞源沙門(mén)氏菌對(duì)各類(lèi)藥物的敏感性情況，為當(dāng)前流行的雞源沙門(mén)氏菌的合理用藥提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 培養(yǎng)基 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，SS瓊脂培養(yǎng)基，肉湯培養(yǎng)基，三糖鐵培養(yǎng)基，蛋白胨水培養(yǎng)基，賴(lài)氨酸鐵瓊脂培養(yǎng)基。

1.1.2 菌株 試驗(yàn)菌株來(lái)自山東部分市縣養(yǎng)雞場(chǎng)的病死雞只，分離自病雞內(nèi)臟，共12株。

1.1.3 藥敏紙片 硫酸安普霉素（Apramycin Sulfate），硫酸新霉素（Neomycin Sulphate），氟苯尼考 （Florfenicol）， 強(qiáng)力霉素 （Doxy）， 替米考星（Tilmicosin），阿米卡星 （Amikacin），林可霉素（Lincomycin），阿莫西林（Amoxicillin），硫酸黏菌素（Colistin Sulfate），磷霉素鈉（Fosfomvcin Sodium），頭孢噻肟鈉（Claforan）（注：以上藥敏片均購(gòu)自杭州濱和生物試劑有限公司），呼治常安，潤(rùn)達(dá)炎迪克（注：以上二種藥敏片為實(shí)驗(yàn)室自制）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 雞源沙門(mén)氏菌的分離試驗(yàn) 將病料肝臟組織無(wú)菌條件下接種于普通瓊脂和SS瓊脂培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)18～24h。

1.2.2 雞源沙門(mén)氏菌的鑒定試驗(yàn) 將分離到疑似沙門(mén)氏菌的菌株進(jìn)行編號(hào)，按常規(guī)方法進(jìn)行三糖鐵試驗(yàn)、尿素酶試驗(yàn)、靛基質(zhì)(吲哚)試驗(yàn)和賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 12株雞源沙門(mén)氏菌生化鑒定結(jié)果

1.2.2.1 將被檢菌穿刺接種三糖鐵瓊脂，36±1℃培養(yǎng)18～24h后，觀察結(jié)果。

1.2.2.2 將被檢菌接種到尿素酶肉湯中，于36±1℃培養(yǎng)18～24h，觀察結(jié)果。變紅色為陽(yáng)性，不變色或者變黃色為陰性。

1.2.2.3 將被檢菌接種到蛋白胨水培養(yǎng)基中，36± 1℃培養(yǎng)18～24h后，沿試管壁滴加數(shù)滴吲哚試劑于培養(yǎng)物液面，觀察結(jié)果。

1.2.2.4 將被檢菌接種到賴(lài)氨酸脫羧酶肉湯和氨基酸脫羧酶對(duì)照生化管中，于36±1℃培養(yǎng)18～24h后，觀察結(jié)果。賴(lài)氨酸脫羧酶肉湯和氨基酸脫羧酶對(duì)照均變黃為陰性，賴(lài)氨酸脫羧酶肉湯變紫，氨基酸脫羧酶對(duì)照變黃為陽(yáng)性。

1.2.3 雞源沙門(mén)氏菌的藥敏試驗(yàn) 采用世界衛(wèi)生組織 (WHO)推薦的Kirby-Bauer紙片法進(jìn)行耐藥沙門(mén)氏菌對(duì)抗菌藥物的敏感性測(cè)定。用滅菌棒將LB培養(yǎng)物涂抹于LB瓊脂平板，將藥敏紙片貼壓于該平板上，然后37℃培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果。判定標(biāo)準(zhǔn)：抑菌圈直徑＞15mm為高度敏感；10mm＜抑菌圈直徑＜15mm為中度敏感；抑菌圈直徑＜10mm為低度敏感；無(wú)抑菌圈為不敏感。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 雞源沙門(mén)氏菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果

2 結(jié)果

2.1 雞源沙門(mén)氏菌的分離鑒定結(jié)果

2.1.1 培養(yǎng)特性 將病料接種普通瓊脂和SS瓊脂培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)18～24h，在普通瓊脂平板，形成均一、無(wú)色、半透明、表面光滑、隆起、邊緣整齊的針尖大小的菌落，在SS瓊脂培養(yǎng)基上呈灰色、圓形、中心帶黑色的可疑菌落，染色鏡檢挑取單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)菌的形態(tài)及染色特點(diǎn)，呈現(xiàn)革蘭氏陰性、無(wú)芽孢的中等大小桿菌。

以上結(jié)果符合沙門(mén)氏菌的生長(zhǎng)特性。

2.1.2 生化鑒定結(jié)果 ①三糖鐵試驗(yàn)：沙門(mén)氏菌反應(yīng)為：斜面產(chǎn)堿，底層產(chǎn)酸，產(chǎn) H2S；②尿素酶試驗(yàn)：沙門(mén)氏菌反應(yīng)為陰性；③靛基質(zhì)(吲哚)試驗(yàn)：沙門(mén)氏菌反應(yīng)為陰性；④賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)：沙門(mén)氏菌反應(yīng)為陽(yáng)性。

結(jié)合以上結(jié)果，確定12株菌種均為沙門(mén)氏菌。

2.2 沙門(mén)氏菌的藥物敏感性試驗(yàn) 采用世界衛(wèi)生組織 (WHO)推薦的Kirby-Bauer紙片法進(jìn)行敏感性測(cè)定。測(cè)試沙門(mén)氏菌對(duì)硫酸安普霉素、硫酸新霉素、氟苯尼考、強(qiáng)力霉素、替米考星、阿米卡星、林可霉素、阿莫西林、硫酸黏菌素、磷霉素鈉、頭孢噻肟鈉、呼治常安、潤(rùn)達(dá)炎迪克的敏感性。

根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果分析可知：分離得到的12株沙門(mén)氏菌對(duì)替米考星、阿莫西林和林可霉素的敏感率為0，說(shuō)明沙門(mén)氏菌對(duì)這三種藥的耐藥性高，呈現(xiàn)多重耐藥；沙門(mén)氏菌分離株對(duì)潤(rùn)達(dá)炎迪克、硫酸黏菌素、呼治常安和強(qiáng)力霉素的敏感率高達(dá)80%以上，以上這幾種藥可作為臨床用藥。

3 討論

3.1 根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，沙門(mén)氏菌對(duì)替米考星、阿莫西林和林可霉素的耐藥性高，對(duì)潤(rùn)達(dá)炎迪克、硫酸黏菌素、呼治常安和強(qiáng)力霉素的敏感率高。在科學(xué)用藥的前提下，今后相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)，防治雞源沙門(mén)氏菌病可首選阿米卡星、頭孢噻肟、強(qiáng)力霉素、硫酸黏菌素、潤(rùn)達(dá)炎迪克、呼治常安等，應(yīng)通過(guò)藥敏試驗(yàn)來(lái)選擇使用。

3.2 臨床上用藥時(shí)要注意交替用藥，以免沙門(mén)氏菌形成抗藥性，合理科學(xué)地使用抗生素，減少不必要的抗生素濫用。為了避免因抗藥性影響治療，在進(jìn)行藥物治療之前，需對(duì)分離的細(xì)菌做藥敏試驗(yàn)，從中選出最有效的藥物進(jìn)行治療與預(yù)防。

3.3 在使用藥物治療的同時(shí)，對(duì)雞舍應(yīng)進(jìn)行嚴(yán)格消毒，保證雞舍衛(wèi)生，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，溫度、濕度、通風(fēng)、光照應(yīng)嚴(yán)格控制。在禽蛋、雛雞的選擇上應(yīng)擇優(yōu)選擇。

[1]張步嫻,李鳳梅,胡杰,等.雞源沙門(mén)氏菌的分離鑒定及耐藥性檢測(cè)[J].農(nóng)業(yè)與技術(shù),2014(08):176-178.

[2]周廷宣.后備種雞血清中沙門(mén)氏菌病抗體的檢測(cè)[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2007(09):87-88.

[3]王貴升,田夫林,陳靜,等.山東省小規(guī)模養(yǎng)雞場(chǎng)沙門(mén)氏菌流行病學(xué)調(diào)查分析[J].家禽科學(xué),2007(05):11-13.

[4]趙貴,張華.畜產(chǎn)品中沙門(mén)氏菌的危害及檢測(cè)方法概述[J].貴州畜牧獸醫(yī),2004(03):21-22.

S858.314.4+3

B

1673-1085（2017）04-0051-03

2017-03-14