玄參多糖對(duì)正常生理小鼠和免疫低下?tīng)顟B(tài)小鼠免疫功能的影響Δ

李自輝，張 寧，董婉茹，于 卉，劉樹(shù)民（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥物安全性評(píng)價(jià)中心，哈爾濱 150040）

玄參多糖對(duì)正常生理小鼠和免疫低下?tīng)顟B(tài)小鼠免疫功能的影響Δ

李自輝＊，張 寧，董婉茹，于 卉，劉樹(shù)民#（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥物安全性評(píng)價(jià)中心，哈爾濱 150040）

目的：考察玄參多糖對(duì)正常生理小鼠和免疫低下?tīng)顟B(tài)小鼠免疫功能的影響。方法：將80只小鼠隨機(jī)分為正常組，模型組，治療高、中、低劑量組和生理高、中、低劑量組，每組10只。正常組和模型組小鼠ig蒸餾水（10 mL/kg），治療高、中、低劑量組和生理高、中、低劑量組均按0.16、0.08、0.04 g/kg ig給藥，每天1次，連續(xù)7 d；于給藥第3天開(kāi)始，模型組和治療高、中、低劑量組小鼠分別ip環(huán)磷酰胺（100 mg/kg），連續(xù)4 d，復(fù)制免疫低下模型。采用碳廓清實(shí)驗(yàn)測(cè)定小鼠碳廓清指數(shù)和臟器（胸、脾）指數(shù)。另取80只小鼠分組、給藥同上，采用綿羊紅細(xì)胞致敏后測(cè)定其血清半數(shù)溶血值（HC50）。再另取80只小鼠分組、給藥同上，采用1%二硝基氟苯法誘導(dǎo)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)測(cè)定其耳腫脹度，測(cè)定其血清中白細(xì)胞介素（IL）-2、IL-4、血清免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、γ-干擾素（IFN-γ）含量，并考察脾淋巴細(xì)胞的體外增殖情況。結(jié)果：高劑量玄參多糖可促進(jìn)兩種免疫狀態(tài)下小鼠免疫器官及碳廓清指數(shù)的增長(zhǎng)（P＜0.05）；增強(qiáng)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的強(qiáng)度（HC50值升高）（P＜0.01）及改善模型小鼠血清溶血素含量的降低（P＜0.01）；促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞增殖（P＜0.05）及升高血清中IL-2、IL-4、IgG、IgM、IFN-γ含量（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論：玄參多糖可增強(qiáng)正常生理和環(huán)磷酰胺所致免疫低下兩種狀態(tài)下小鼠的免疫功能。

玄參多糖；免疫功能；生理狀態(tài)；免疫低下?tīng)顟B(tài)；小鼠

玄參為玄參科玄參屬多年生草本植物玄參（Scrophularia ningpoensis Hemsl.）的干燥塊根，是一種傳統(tǒng)的中藥，其中以浙江出產(chǎn)的玄參為佳品，公認(rèn)為“浙八味”之一[1]。玄參味甘、苦、咸，性微寒，歸肺、胃、腎經(jīng)，有涼血滋陰、瀉火解毒的作用，目前認(rèn)為其主要的化學(xué)成分為環(huán)烯醚萜類、苯丙素類、黃酮類及芳香糖類等[2-3]。中藥玄參能補(bǔ)虛勞損，臨床常與潞黨參合用，治療陰氣虧損、舌干無(wú)津、胃液消耗、口苦懶食[4]。近年來(lái)，已有大量關(guān)于中藥多糖組分對(duì)免疫系統(tǒng)具有調(diào)節(jié)作用的報(bào)道，有研究表明玄參多糖具有一定抗疲勞和抗氧化作用[5-7]，但鮮有關(guān)于其在不同狀態(tài)下免疫調(diào)節(jié)功能和機(jī)制的研究。鑒于此，本研究通過(guò)對(duì)正常生理和環(huán)磷酰胺所致免疫低下兩種狀態(tài)的小鼠細(xì)胞免疫、體液免疫及非特異性免疫的綜合評(píng)價(jià)，初步揭示玄參多糖對(duì)兩種不同免疫狀態(tài)小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)特點(diǎn)，為今后的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

UVmini-1240紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（島津國(guó)際貿(mào)易上海有限公司）；AL204電子天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]；Anthos2010酶標(biāo)儀（奧地利安圖斯公司）；KDC-160HR臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司）；Vert.A1倒置顯微鏡（德國(guó)Zeiss公司）。

1.2 藥品與試劑

玄參多糖提取物（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院提供，批號(hào)：20130623012，多糖含量：＞35%）；白細(xì)胞介素2（IL-2）、IL-4、γ-干擾素（IFN-γ）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）試劑盒（南京建成生物科技有限公司）；印度墨汁（北京博奧拓達(dá)科技有限公司）；綿羊紅細(xì)胞（SRBC，石家莊華瑞創(chuàng)新生物科技開(kāi)發(fā)中心）；刀豆球蛋白A（ConA）、脂多糖（LPS）、二甲基亞砜（DMSO）均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；DMEM高糖培養(yǎng)基（美國(guó)Hyclone公司）；小牛血清（德國(guó)Capricorn公司）。

1.3 動(dòng)物

ICR小鼠240只，SPF級(jí)，♀♂各半，體質(zhì)量為18～22 g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，許可證號(hào)：SCXK（黑）2013-004。適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，所有實(shí)驗(yàn)小鼠的使用和喂養(yǎng)嚴(yán)格遵照動(dòng)物保護(hù)協(xié)會(huì)的規(guī)定進(jìn)行。

2 方法

2.1 分組與給藥

ICR小鼠240只隨機(jī)分為3個(gè)部分（非特異性免疫實(shí)驗(yàn)、體液免疫實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞免疫實(shí)驗(yàn)），每部分80只。將每部分的80只ICR小鼠隨機(jī)分為8組，每組10只，即正常組，模型組，治療高、中、低劑量組和生理高、中、低劑量組。其中，正常組和模型組小鼠ig給予蒸餾水，治療高、中、低劑量組和生理高、中、低劑量組小鼠分別ig給予0.16、0.08、0.04 g/（kg·d）玄參多糖（分別為臨床用藥上限的4、2、1倍劑量）。各組小鼠均在每天上午9：00－10：00按照10 mL/（kg·d）ig相應(yīng)溶液，每天1次，連續(xù)7 d。于第3天開(kāi)始，模型組和治療高、中、低劑量組小鼠分別按100 mg/（kg·d）ip環(huán)磷酰胺復(fù)制免疫低下模型，連續(xù)4 d。

2.2 非特異性免疫實(shí)驗(yàn)

各組小鼠于末次給藥1 h后，尾iv 20%印度墨汁0.01 mL/g。分別于注射后2 min（t1）和6 min（t2）時(shí)眼靜脈叢取血20 μL，立即加入2.0 mL 0.1%碳酸鈉溶液中，充分搖勻后，于600 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光密度（OD）值；以0.1%碳酸鈉溶液作廓清指數(shù)的空白對(duì)照。小鼠頸椎脫臼處死，分別稱定肝、胸腺和脾質(zhì)量，計(jì)算廓清指數(shù)K、校正廓清指數(shù)（吞噬指數(shù)）α及臟器指數(shù)[8]：K＝（lgOD1－＝小鼠體質(zhì)量/（肝質(zhì)量+脾質(zhì)量）臟器指數(shù)＝臟器質(zhì)量（g）/小鼠體質(zhì)量（10 g）。

2.3 體液免疫實(shí)驗(yàn)

于給藥第3天時(shí)，各組小鼠均ip 4%壓積SRBC混懸液0.2 mL致敏，持續(xù)4 d。于末次給藥1 h后，摘眼球取血，制備血清，用生理鹽水將血清稀釋200倍。取稀釋后血清1.0 mL、4%壓積SRBC混懸液0.5 mL、10%豚鼠血清1.0 mL（補(bǔ)體）于試管中，混勻；以等體積生理鹽水代替小鼠血清作為空白對(duì)照。于37℃水浴30 min，取出后置于冰浴中終止反應(yīng)，冷卻后以離心半徑為10.5 cm、1 500 r/min離心10 min。取上清液1.0 mL，加都氏液3.0 mL，混勻后靜止10 min，然后于540 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度；另取4%壓積SRBC混懸液0.25 mL和都氏液3.75 mL于試管中，混勻，測(cè)定SRBC的半數(shù)溶血值（HC50）[9]。樣品HC50＝樣品吸光度×200/SRBC的HC50。

2.4 細(xì)胞免疫實(shí)驗(yàn)

于第2天給藥后，各組小鼠均腹部去毛，面積大小約為2 cm×2 cm。于腹部暴露皮膚處均勻涂抹1%二硝基氟苯（DNFB）50 μL，進(jìn)行初次免疫，每天1次，連續(xù)致敏5 d；空白組小鼠涂抹丙酮和橄欖油。致敏小鼠于末次給藥1 h后，再次于小鼠右耳正背兩面均勻涂抹1%DNFB 10 μL進(jìn)行抗原攻擊，24 h后摘眼球取血，制備血清。采用ELISA法測(cè)定血清中IL-2、IL-4、IFN-γ、IgG、IgM水平。頸椎脫臼處死小鼠，剪下左右兩耳，用8 mm打孔器在兩耳相同部位打取耳片，稱質(zhì)量，測(cè)定耳腫脹度[耳腫脹度（mg）＝右耳質(zhì)量（mg）－左耳質(zhì)量（mg）]和耳腫脹率[耳腫脹率（%）＝耳腫脹度（mg）/左耳質(zhì)量（mg）× 100%]。

2.5 脾淋巴細(xì)胞增殖能力測(cè)定

將“2.4”項(xiàng)下小鼠的脾臟在常規(guī)條件下制備成懸濁液，調(diào)整細(xì)胞密度為5×106mL－1。稱取適量無(wú)菌尼龍綿裝入注射器內(nèi)，DMEM洗柱2次，加入脾細(xì)胞懸濁液，37℃孵育1 h后，用常溫培養(yǎng)液淋洗3次，收集液離心，收集的沉淀即為T淋巴細(xì)胞。再將注射器放入4℃冷藏1 h，用4℃培養(yǎng)液沖洗，收集的懸濁液即為B淋巴細(xì)胞。經(jīng)臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)，細(xì)胞存活率＞95%，說(shuō)明可用于試驗(yàn)。將上述細(xì)胞按100 μL/孔接種于96孔板，孵育24 h后，T淋巴細(xì)胞孔分別加100 μL ConA（終質(zhì)量濃度為5 μg/mL）以誘導(dǎo)細(xì)胞增殖，B淋巴細(xì)胞孔加100 μL LPS（終質(zhì)量濃度為10 μg/mL）誘導(dǎo)細(xì)胞增殖，并另設(shè)加入培養(yǎng)基的空白對(duì)照孔，均設(shè)3個(gè)復(fù)孔。將培養(yǎng)板置于5%CO2、37℃條件培養(yǎng)44 h后，每孔加入MTT溶液20 μL，繼續(xù)孵育4 h，棄上清液，加入DMSO溶液150 μL，充分振蕩后靜置10 min。采用酶標(biāo)儀于570 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)其OD值，計(jì)算脾淋巴細(xì)胞增殖率（%）[細(xì)胞增殖率（%）＝（實(shí)驗(yàn)孔OD值－空白對(duì)照孔OD值）/空白對(duì)照孔OD值×100%]。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 非特異性免疫實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

與正常組比較，模型組小鼠的脾指數(shù)、胸腺指數(shù)、K以及α均顯著降低（P＜0.01），生理高劑量組小鼠各項(xiàng)指數(shù)均明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，治療高劑量組小鼠各項(xiàng)指數(shù)均顯著升高（P＜0.05），結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 玄參多糖對(duì)正常生理小鼠和免疫低下?tīng)顟B(tài)小鼠非特異性免疫功能的影響（s，n＝10）Tab 1 Effect of polysaccharides on nonspecific immune function in mice under normal physiological and hypoimmunical state（s，n＝10）

表1 玄參多糖對(duì)正常生理小鼠和免疫低下?tīng)顟B(tài)小鼠非特異性免疫功能的影響（s，n＝10）Tab 1 Effect of polysaccharides on nonspecific immune function in mice under normal physiological and hypoimmunical state（s，n＝10）

注：與正常組比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05Note：vs.normalgroup，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.model group，#P＜0.05

胸腺指數(shù)，g/10 g 2.44±0.55 1.78±0.44＊＊3.08±0.70＊2.85±0.63 2.50±0.53 2.23±0.50#1.99±0.42 1.88±0.38組別正常組模型組生理高劑量組生理中劑量組生理低劑量組治療高劑量組治療中劑量組治療低劑量組劑量，g/（kg·d）K α 0.16 0.08 0.04 0.16 0.08 0.04 0.051 2±0.014 9 0.034 6±0.010 2＊＊0.069 4±0.019 9＊0.060 1±0.015 5 0.057 1±0.014 9 0.044 6±0.010 6#0.040 0±0.010 2 0.038 6±0.011 0 5.623 1±0.522 4 4.597 4±0.913 8＊＊6.546 2±1.042 8＊6.076 1±0.917 5 5.983 9±0.588 4 5.356 8±0.560 5#5.018 2±0.709 2 4.793 3±0.683 6脾指數(shù)，g/10 g 3.91±0.95 2.93±0.45＊＊4.79±0.89＊4.29±1.11 4.18±1.03 3.81±0.91#3.44±0.65 3.29±0.58

3.2 體液免疫實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

與正常組比較，模型組小鼠的HC50明顯降低（P＜0.01），生理高劑量組小鼠的HC50明顯升高（P＜0.01）；與模型組比較，治療高、中劑量組小鼠的HC50明顯升高（P＜0.01），結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 玄參多糖對(duì)正常生理小鼠和免疫低下?tīng)顟B(tài)小鼠體液免疫功能的影響（s，n＝10）Tab 2 Effect of polysaccharides on humoral immune function in mice under normal physiological and hypoimmunical state（s，n＝10）

表2 玄參多糖對(duì)正常生理小鼠和免疫低下?tīng)顟B(tài)小鼠體液免疫功能的影響（s，n＝10）Tab 2 Effect of polysaccharides on humoral immune function in mice under normal physiological and hypoimmunical state（s，n＝10）

注：與正常組比較，＊＊P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01Note：vs.normal group，＊＊P＜0.01；vs.model group，#P＜0.05，##P＜0.01

HC50值，% 100.05±19.28 72.51±21.49＊＊126.29±21.07＊＊106.14±15.21 101.26±16.29 105.45±25.08##94.88±22.63#80.14±21.64組別正常組模型組生理高劑量組生理中劑量組生理低劑量組治療高劑量組治療中劑量組治療低劑量組劑量，g/（kg·d）0.16 0.08 0.04 0.16 0.08 0.04

3.3 細(xì)胞免疫實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

3.3.1 對(duì)耳腫脹度和耳腫脹率的影響 與正常組比較，模型組小鼠耳腫脹度、耳腫脹率明顯降低（P＜0.01），生理高、中劑量組小鼠耳腫脹度、耳腫脹率明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）；與模型組比較，治療高劑量組小鼠的耳腫脹度、耳腫脹率顯著升高（P＜0.01），結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 玄參多糖對(duì)正常生理小鼠和免疫低下?tīng)顟B(tài)小鼠耳腫脹度和耳腫脹率的影響（s，n＝10）Tab 3 Effect of polysaccharides on cellular immune function in mice under normal physiological and hypoimmunical state（s，n＝10）

表3 玄參多糖對(duì)正常生理小鼠和免疫低下?tīng)顟B(tài)小鼠耳腫脹度和耳腫脹率的影響（s，n＝10）Tab 3 Effect of polysaccharides on cellular immune function in mice under normal physiological and hypoimmunical state（s，n＝10）

注：與正常組比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與模型組比較，##P＜0.01Note：vs.normal group，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.model group，##P＜0.01

耳腫脹率，% 67.26±12.48 47.82±11.35＊＊89.48±18.80＊＊78.07±8.09＊71.02±11.01 63.04±11.06##56.22±15.90 53.10±13.33組別正常組模型組生理高劑量組生理中劑量組生理低劑量組治療高劑量組治療中劑量組治療低劑量組劑量，g/（kg·d）0.16 0.08 0.04 0.16 0.08 0.04耳腫脹度，mg 5.29±0.91 3.86±1.16＊＊7.12±1.62＊＊6.36±0.82＊5.56±0.53 5.25±0.92##4.56±1.11 4.15±0.89

3.3.2 對(duì)血清中生化指標(biāo)的影響 與正常組比較，模型組小鼠血清中IFN-γ、IL-2、IL-4、IgG和IgM含量均明顯減少（P＜0.05或P＜0.01），生理高劑量組小鼠血清中上述指標(biāo)含量以及生理中劑量組小鼠血清中IgM含量均明顯增加（P＜0.05或P＜0.01）；與模型組比較，治療高劑量組小鼠血清中上述指標(biāo)含量以及治療中劑量組小鼠血清中IL-2、IFN-γ、IgG和IgM含量均明顯增加（P＜0.05或P＜0.01），結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 玄參多糖對(duì)正常生理小鼠和免疫低下?tīng)顟B(tài)小鼠血清中IL-2、IL-4、IFN-γ、IgG和IgM含量的影響（s，n＝10）Tab 4 Effect of polysaccharides on IL-2，IL-4，IFN-γ，IgG，IgM serum contents in mice under normalphysiologicaland hypoimmunical state（s，n＝10）

表4 玄參多糖對(duì)正常生理小鼠和免疫低下?tīng)顟B(tài)小鼠血清中IL-2、IL-4、IFN-γ、IgG和IgM含量的影響（s，n＝10）Tab 4 Effect of polysaccharides on IL-2，IL-4，IFN-γ，IgG，IgM serum contents in mice under normalphysiologicaland hypoimmunical state（s，n＝10）

注：與正常組比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01Note：vs.normal group，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.model group，#P＜0.05，##P＜0.01

IgM，mg/mL 371.07±56.79 296.41±36.39＊＊451.24±63.45＊＊425.07±51.87＊398.38±57.72 348.68±37.88##340.20±44.13#315.87±47.50組別正常組模型組生理高劑量組生理中劑量組生理低劑量組治療高劑量組治療中劑量組治療低劑量組劑量，g/（kg·d）0.16 0.08 0.04 0.16 0.08 0.04 IL-2，pg/mL 16.58±3.10 12.93±2.94＊19.54±2.12＊18.17±1.95 17.80±2.37 16.23±2.01##15.69±2.70#14.94±3.34 IL-4，pg/mL 18.46±2.77 14.40±4.02＊22.03±3.59＊19.70±3.65 17.37±3.93 18.11±3.80#16.55±3.07 16.72±2.82 IFN-γ，pg/mL 21.19±2.34 17.34±2.56＊＊24.37±3.87＊21.21±2.29 20.52±1.43 20.34±1.98##19.48±1.34#17.40±1.94 IgG，mg/mL 4.22±0.55 3.57±0.36＊＊4.84±0.37＊＊4.54±0.31 4.39±0.47 4.05±0.38##3.97±0.42#3.89±0.35

3.4 脾淋巴細(xì)胞增殖能力測(cè)定結(jié)果

與正常組比較，模型組小鼠脾B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞增殖率明顯降低（P＜0.05或P＜0.01），生理高劑量組小鼠脾T淋巴細(xì)胞增殖率明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，治療高劑量組小鼠脾B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞增殖率和治療中劑量組小鼠脾B淋巴細(xì)胞增殖率均明顯升高（P＜0.05或P＜0.01），結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 玄參多糖對(duì)正常生理小鼠和免疫低下?tīng)顟B(tài)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力的影響（s，n＝10）Tab 5 Effect of polysaccharides on splenic lymphocyte proliferation in mice under normal physiological and hypoimmunical state（s，n＝10）

表5 玄參多糖對(duì)正常生理小鼠和免疫低下?tīng)顟B(tài)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力的影響（s，n＝10）Tab 5 Effect of polysaccharides on splenic lymphocyte proliferation in mice under normal physiological and hypoimmunical state（s，n＝10）

注：與正常組比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01Note：vs.normal group，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.model group，#P＜0.05，##P＜0.01

T淋巴細(xì)胞增殖率，% 39.10±2.78 36.13±4.38＊41.40±3.79＊40.51±3.71 39.30±3.24 39.21±3.76#37.18±3.29 36.49±3.13組別正常組模型組生理高劑量組生理中劑量組生理低劑量組治療高劑量組治療中劑量組治療低劑量組劑量，g/（kg·d）0.16 0.08 0.04 0.16 0.08 0.04 B淋巴細(xì)胞增殖率，% 36.07±4.82 29.53±3.72＊＊39.20±4.49 38.53±3.67 36.22±3.75 34.60±3.59##32.61±2.66#30.95±3.29

4 討論

胸腺和脾是重要的外周免疫器官，機(jī)體的免疫應(yīng)答主要以脾為主，T淋巴細(xì)胞分化的主要場(chǎng)所則以胸腺為主，影響機(jī)體溶血素的含量與巨噬細(xì)胞的分泌。碳粒廓清實(shí)驗(yàn)主要對(duì)能反映出清除血液中異物速率的吞噬細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，是非特異性免疫的一個(gè)重要衡量指標(biāo)[9-11]。本研究結(jié)果顯示，玄參多糖可促進(jìn)正常小鼠和免疫低下小鼠免疫器官的發(fā)育，刺激機(jī)體單核巨噬細(xì)胞分泌，這提示其對(duì)小鼠具有相應(yīng)的預(yù)防（正常生理狀態(tài)）與治療（免疫低下?tīng)顟B(tài)）作用。

經(jīng)小鼠體液免疫和細(xì)胞免疫的各項(xiàng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，玄參多糖不僅能升高生理或病理狀態(tài)小鼠的臟器指數(shù)，還能增強(qiáng)小鼠的遲發(fā)型超敏反應(yīng)能力。遲發(fā)型超敏反應(yīng)是由T淋巴細(xì)胞經(jīng)過(guò)2次相同抗原的刺激后產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)，釋放出多種因子，并同時(shí)產(chǎn)生炎癥因子。由于IL-2、IL-4是刺激和誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞增殖的重要因子，IgG、IgM是參與體液免疫并存在于淋巴細(xì)胞中最主要的免疫球蛋白，而IFN-γ是增強(qiáng)T細(xì)胞分化及自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）活力的重要因子，所以本研究以其作為衡量T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞活力的客觀判斷指標(biāo)[12-14]。本研究結(jié)果顯示，玄參多糖能升高處于正常生理和免疫低下兩種狀態(tài)小鼠血清中IL-2、IL-4、IFN-γ、IgG、IgM含量，這提示玄參多糖免疫調(diào)節(jié)機(jī)制可能與T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞增殖和NK細(xì)胞活力提高的共同作用有關(guān)，但其具體機(jī)制的表達(dá)有待于進(jìn)一步探索。

本課題組前期以鹽酸左旋咪唑（40 mg/kg）為陽(yáng)性藥開(kāi)展實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示玄參多糖高劑量組的上述指標(biāo)多數(shù)趨近于陽(yáng)性藥的藥效作用，部分略好于陽(yáng)性藥的作用。然而在本研究中，筆者重點(diǎn)在于比較玄參多糖對(duì)正常生理與免疫低下兩種狀態(tài)小鼠免疫功能的影響，而并非只是就玄參多糖與陽(yáng)性藥對(duì)小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用進(jìn)行簡(jiǎn)單對(duì)比，故在本研究中未設(shè)置陽(yáng)性藥物組。

本研究結(jié)果提示，玄參多糖高劑量對(duì)正常生理與免疫低下兩種狀態(tài)小鼠均具有顯著的免疫增強(qiáng)作用。但玄參多糖中劑量組可提高兩種狀態(tài)的小鼠血清中IL-2、IFN-γ含量及改善遲發(fā)性免疫反應(yīng)，增加血清中IgG、IgM的含量。從量效關(guān)系來(lái)看，玄參多糖0.04 g/kg可能是其最低有效劑量，隨著劑量的增加，小鼠機(jī)體的免疫作用可能不斷增強(qiáng)。但由于中藥存在多藥性、多靶點(diǎn)的特性，是一個(gè)復(fù)雜的系統(tǒng)，很難反映藥物的整體作用規(guī)律；且一般藥物在一定范圍內(nèi)藥效會(huì)隨著劑量的增加而增強(qiáng)，但超出一定范圍后，藥效很可能會(huì)降低或者消失，甚至產(chǎn)生毒副作用[15]。玄參多糖伴隨著給藥劑量的提高，是否符合上述規(guī)律，也有待進(jìn)一步研究。

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Effect of Polysaccharides of Radix scrophulariae on Immune Functions in Mice under Normal Physiological and Hypoimmunical State

LI Zihui，ZHANG Ning，DONG Wanru，YU Hui，LIU Shumin（Drug Safety Evaluation Center，Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040，China）

OBJECTIVE：To study the effect of polysaccharides of Radix scrophulariae on immune function in mice under normal physiological and hypoimmunical state.METHODS：80 mice were randomly divided into normal group，model group，treatment high-dose，medium-dose，low-dose groups and physiological high-dose，medium-dose，low-dose groups，10 in each group. Mice in normal group and model group were received distilled water（10 mL/kg）intragastrically，treatment high-dose，mediumdose，low-dose groups and physiological high-dose，medium-dose，low-dose groups were administrated 0.16，0.08，0.04 g/kg drug，ig，once a day，for 7 d.From the third day，mice in model group and treatment high-dose，medium-dose，low-dose groups were respectively received cyclophosphamide（100 mg/kg），ip，for 4 d to induce hypoimmunical model.Carbon clearance test was adopted to determine the carbon clearance indexes and organs（chest，spleen）indexes of mice.Another 80 mice were grouped with the same administration，serum half hemolytic value（HC50）was determined after compressed Mianyang red blood cell sensitization.Then another 80 mice were grouped with the same administration，1%dinitrofluorobenzene method was used to induce delayed hypersensitivity in mice；its ear swelling was determined，as well as IL-2，IL-4，immunoglobulin G（IgG），immunoglobulin M（IgM），γ-interferon（IFN-γ）contents in serum，and the proliferation in vitro of splenic lymphocytes were detected.RESULTS：High-dose polysaccharides can promote the increasing of immune organ and carbon clearance indexes（P＜0.05）；enhance the intensity of delayed type hypersensitivity（HC50increasing）（P＜0.01）and improve the decreasing of serum hemolysin in model mice（P＜0.01）；promote the splenic lymphocytes proliferation and increase IL-2，IL-4，IgG，IgM，IFN-γ contents in serum（P＜0.05 or P＜0.01）.CONCLUSIONS：Polysaccharides can enhance the immune function in mice under normal physiological and hypoimmunical state induced by cyclophosphamide.

Polysaccharides；Immune function；Physiological state；Hypoimmunical state；Mice

R285

A

1001-0408（2017）10-1316-04

2016-08-22

2016-12-28）

（編輯：林 靜）

國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃“973”計(jì)劃（No.2013CB531804）

＊碩士研究生。研究方向：中藥性味理論。電話：0451-82193278。E-mail：1831794073@qq.com

#通信作者：教授，博士生導(dǎo)師。研究方向：中藥臨床藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及中藥藥性理論。電話：0451-82193278。E-mail：lsm@hljucm.net

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.10.05