一起仔豬豬瘟的診制體會

滕金玲

（山東省莒南縣動物疫病預防控制中心 276600）

孫家偉

（山東省臨沂市河東區(qū)劉店子畜牧獸醫(yī)站）

譚善杰

（山東省臨沂市畜牧站）

一起仔豬豬瘟的診制體會

滕金玲

（山東省莒南縣動物疫病預防控制中心 276600）

孫家偉

（山東省臨沂市河東區(qū)劉店子畜牧獸醫(yī)站）

譚善杰

（山東省臨沂市畜牧站）

某豬場經(jīng)產(chǎn)母豬存欄30頭，所產(chǎn)仔豬在1～15日齡期間，臨床健康，哺乳正常，皮紅毛亮，生長發(fā)育良好，15日齡后陸續(xù)開始排黃色或深黃色稀便或糊狀便，體溫在39.5℃左右，任何藥物治療無效，同窩發(fā)病率、死亡率高達100%，維持3個月之久。曾在四家檢測診斷機構做過豬瘟、偽狂犬、流行性腹瀉等病原學檢測，結果均為陰性。

1 診斷過程

1.1 第一次出診

1.1.1 臨床癥狀 母豬：被毛粗糙，皮膚泛黃，毛孔有鐵銹色出血點，重者脊背皮膚開裂，表面有血樣滲出物，有些母豬淚斑嚴重，肌肉注射后針眼血流不止，血凝不良。仔豬：排黃色稀便或糊狀便，皮膚黃白色，哺乳次數(shù)減少直至停止，逐漸消瘦，最后衰竭死亡。

1.1.2 解剖癥狀 表現(xiàn)血液稀薄，凝固不良；小腸腸壁變薄，充氣，腸內有黃色內容物，腎臟表面有零星出血點，其他內臟器官無異常。

1.1.3 診斷處置 疑似診斷為母豬患有附紅細胞體。母豬用磺胺氯噠嗪鈉+多西環(huán)素，補充VC、VAD3粉及有機鐵制劑等混飼2周，重者配合血蟲凈(中牧集團)肌注，1支

/100～15kg體重，1次/d，連用2～3d，同時仔豬用抗生素保健，腹瀉日齡稍有延遲。但25日齡左右，仔豬又開始腹瀉。

1.2 第二次出診

1.2.1 臨床癥狀 母豬：精神狀況、膘情良好，個別母豬皮膚蒼白，表面出血點減少，潔凈度提高。發(fā)病仔豬：初期排黃色稀便，皮膚蒼白，后期皮膚發(fā)黃，四肢末梢發(fā)紫，皮下有出血點或斑，腹瀉，排黃色或黃褐色稀便，骨瘦如柴，眼屎增多，體溫39.5～40.8℃，扎堆怕冷，食欲廢絕。

1.2.2 解剖癥狀 血凝不良，打開胸腔、腹腔，內臟漿膜出血嚴重，喉頭有出血點，扁桃體出血，腎臟土黃色，表面有大量出血點，腸道出血，膀胱出血，淋巴結周邊出血等，出現(xiàn)疑似豬瘟癥狀。

1.3 實驗室診斷

采集發(fā)病仔豬血液12份，編號1-12，室溫靜置析出血清，然后經(jīng)2000r/5min離心，制備待檢血清。

1.3.1 豬瘟病毒抗體檢測 美國(IDEXX)豬瘟病毒抗體ELISA檢測試劑盒：使用前，所有試劑和微量包被反應板在22℃室溫下放置2h，并通過輕輕渦旋、旋轉混勻。整個實驗過程嚴格操作程序，且不同的樣本和試劑使用不同的吸頭。取出微量反應板，在原始記錄表上標記好每個樣本的位置。分別將50ul樣品稀釋液加入每個檢測孔和對照孔中。分別將50ul陰性對照和陽性對照加入到相應的對照孔中。分別將50ul的被檢樣品加入到剩余的檢測孔中。輕彈微量反應板，將反應板中的溶液混勻，然后將微量反應板用封條封閉，在室溫(22℃)條件下孵育2h。用300ul洗滌液洗滌每個板孔3次。每次洗滌后，甩去每個板孔中的液體，在最后一次甩掉后，在吸水材料上用力扣板，吸去剩余的液體。在加入下一個試劑前，避免孔壁變干。在每孔中加入100ul的酶標抗體，用封條封閉反應板，在室溫(22℃)條件下孵育30min。重復步驟5。每個反應孔中加入100ul的底物溶液，避光、室溫(22℃)條件下放置10min。加完第一孔后計時。在每個反應孔中加入100ul的終止液終止反應。加終止液的順序與底物的加入順序相同。酶標儀空氣調零，以450nm單波長測定樣本和對照的吸光度值。結果：陰性對照平均OD450=1.585大于0.500，陽性對照阻斷率=91.6大于50%，檢測結果有效。計算被檢樣本阻斷率=(陰性對照平均OD450-樣本OD45)÷陰性對照平均OD450×100%。判斷：被檢樣本的阻斷率≤30%，該樣本被判為陰性，無CSF抗體存在,被檢樣本的阻斷率＞40%，該樣本被判為陽性，有CSF抗體存在，如果被檢樣品阻斷率在30%～40%之間，該樣本判為可疑?？贵w檢測結果見表1、圖1。

表1 豬瘟病毒抗體檢測結果

圖1 豬瘟病毒抗體檢測結果

1.3.2 豬瘟病毒抗原檢測 美國(IDEXX)豬瘟病毒抗原血清ELISA檢測試劑盒：使用前，所有試劑和微量包被反應板在22℃室溫下放置2h，并通過輕輕渦旋、旋轉混勻。整個實驗過程嚴格操作程序，且不同的樣本和試劑使用不同的吸頭。（1）操作過程基本同病毒抗體檢測步驟。（2）結果：陽性對照OD的平均值與陰性對照OD的平均值之差=1.018，大于0.150，陰性對照OD的平均值=0.085，小于0.250，試驗結果成立。計算S-N值：即樣品S(OD450)與陰性對照N(OD450)的平均值之差。判斷：被檢樣本S-N值≤0.100的，該樣本判為陰性；被檢樣本S-N值＞0.300，該樣本判為陽性；被檢樣本S-N值＞0.100，≤0.300，判為可疑。判定結果見表2、圖2。

表2 豬瘟病毒抗原檢測結果

圖2 豬瘟病毒抗原檢測結果

1.4 結果分析

12份血清樣品，豬瘟病毒抗體水平參差不齊，最大92，最小-16，其中4份樣品為陽性，1份可疑，7份陰性；豬瘟病毒抗原3份陰性，1份可疑，8份陽性；且病毒抗體陽性的，其病毒抗原為陰性或可疑，病毒抗體陰性的，其病毒抗原陽性，符合率幾乎達到100%。根據(jù)臨床癥狀、解剖變化及實驗室診斷，確診該豬群感染豬瘟病毒。

2 防控措施

（1）加強監(jiān)測，淘汰豬瘟隱形帶毒豬、病豬，病死豬進行無害化處理，徹底消滅傳染源。（2）加強場地及圈舍消毒，并適當增加消毒次數(shù)，糞尿等排泄物和污染物進行發(fā)酵、消毒、深埋、焚燒等無害化處理，人員定崗定位，器具專舍專用，減少外來人員及車輛流動，切斷傳播途徑。（3）飼料配比得當，營養(yǎng)全面；圈舍結構合理，干燥衛(wèi)生，舍溫適宜，通風良好；減少應激，環(huán)境舒適安靜，提高機體抵抗力。（4）根據(jù)檢測結果及豬場發(fā)病情況，調整豬瘟免疫程序，保證豬體持有較高的抗體水平，抵御野毒感染。（5）加強母豬配種前豬瘟免疫，所產(chǎn)仔豬用豬瘟傳代細胞苗1頭份/豬，實施豬瘟超前免疫。（6）嚴格執(zhí)行免疫程序，尤其注重免疫抑制性疾病的預防，合理驅蟲，定期投藥，防止繼發(fā)或并發(fā)疾病。通過采取以上措施，豬場疫情得以控制。

3 體會

在畜牧業(yè)快速發(fā)展的今天，疾病的發(fā)展變化日新月異，望聞問切的診斷手段已經(jīng)難以滿足疾病的診斷需求。獸醫(yī)實驗室診斷雖然滯后于臨床感官診斷，但卻是確診疾病的唯一手段。根據(jù)臨床癥狀和尸體剖檢變化做出疑似診斷，采用抗體檢測和抗原檢測相結合的實驗室診斷方法，該病例得以確診。究其在四家檢測機構診斷無果，筆者認為樣本采集的時間、部位及樣本的保存、運輸?shù)纫蛩赜绊懥藰颖镜馁|量，從而影響到檢測結果，造成對該病例的誤診誤判。當?shù)貏游镆卟☆A防控制機構獸醫(yī)實驗室要充分發(fā)揮檢測職能，建立完整的獸醫(yī)診斷體系，對疾病達到快速、精準的判斷，以更好地服務于畜牧業(yè)。

S858.28

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1007-1733(2017)03-0023-02

2016-01-13）