中藥鑒定學(xué)新技術(shù)新方法研究進展

李 敏

泰安市中醫(yī)醫(yī)院藥劑科，山東泰安 271000

在臨床對患者進行治療的過程中，其治療的方法無非手術(shù)治療和藥物保守治療，而藥物治療中則可以歸為中藥和西藥兩大類，在西藥進行使用的過程中，基本均采用標(biāo)準(zhǔn)的制劑，方便臨床使用，但是西藥治療的效果常常存在一定局限性，因而中藥的使用受到越來越多的關(guān)注。目前中藥在進行生產(chǎn)制作的過程中，往往需要能夠?qū)λ幉倪M行良好的鑒定，方可保證其中藥制劑的有效性，但是常規(guī)的方法多數(shù)通過人體感官等方法完成鑒定，缺乏著一定的科學(xué)性，也從一定程度上限制著中藥制劑的準(zhǔn)確使用，因此不斷在其發(fā)展的過程中進行總結(jié)，近年來我國中藥鑒定學(xué)新技術(shù)和新方法不斷涌出和完善，該次我們逐一進行分析并報道如下。

1 中藥鑒定的傳統(tǒng)方法

中藥鑒定的傳統(tǒng)方法多數(shù)為性狀方面的鑒定，即通過具有一定經(jīng)驗的藥師，通過對藥材的形狀、氣味、顏色等進行判斷，之后通過簡單的火試或水試進行鑒定，火試是利用藥材為自然的可燃品對其進行火燒，觀察其是否出現(xiàn)異味或冒煙等現(xiàn)象，但根據(jù)藥材的性能不同，其火試表現(xiàn)也會有所不同；水試則是通過用水將藥品進行浸泡，觀察其是否變黏或產(chǎn)生顏色的異常變化等。

2 中藥鑒定傳統(tǒng)方法的弊端

中藥鑒定的傳統(tǒng)方法對于藥師的專業(yè)技術(shù)和經(jīng)驗往往會提出較高的要求，中藥鑒定的準(zhǔn)確性則和藥師的經(jīng)驗密切相關(guān)，同時水試和火試根據(jù)藥物的性能不同所產(chǎn)生的結(jié)果也會不同，很難真正對中藥進行準(zhǔn)確的鑒定。因此中藥鑒定傳統(tǒng)方法在使用的過程中往往會出現(xiàn)鑒定不準(zhǔn)確的現(xiàn)象，對于中藥材的使用和效果也往往會產(chǎn)生一定的制約。

3 中藥鑒定新技術(shù)新方法

傳統(tǒng)的中藥鑒定具有快速、簡便的優(yōu)點，但是隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，在中藥鑒定中逐漸涌現(xiàn)出一系列的新技術(shù)和新方法，這便在一定程度上極大的提高了中藥鑒定的準(zhǔn)確性與科學(xué)性。隨著我國醫(yī)學(xué)領(lǐng)域相關(guān)技術(shù)的不斷發(fā)展，關(guān)于中藥鑒定的新技術(shù)和新方法也不斷涌現(xiàn)，其詳細(xì)情況如下。

3.1 分子鑒定技術(shù)

分子鑒定技術(shù)中最為多見的就是DNA分子鑒定技術(shù)，其在進行鑒定的過程中，根據(jù)DNA分子技術(shù)，反應(yīng)出不同生物個體或基本中的特異性DNA片段，鑒定的準(zhǔn)確性往往不會受到外界環(huán)境的較多干擾，而可以相對準(zhǔn)確的反映出所檢藥材的實際情況。而關(guān)于DNA分子鑒定技術(shù)進行詳細(xì)劃分，可發(fā)現(xiàn)DNA條形碼鑒定技術(shù)類屬于DNA分子鑒定技術(shù)，詳細(xì)情況則是不同的生物種群之間具有公認(rèn)和獨特的基因標(biāo)記，而DNA片段如果存在明顯的特征則被命名為特有的條形碼，通過DNA鑒定則可以直接對所檢藥物做出相對準(zhǔn)確的判斷。DNA分子鑒定技術(shù)在使用的過程中，受到了較多學(xué)者的關(guān)注，因為其本身具有的優(yōu)勢利于其進行推廣使用，表現(xiàn)通過對不同生物的DNA判斷進行特異性的分析和總結(jié)，可以建立相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫，建立相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)化體系后十分利于臨床簡答的操作和鑒定。而隨著近年來相關(guān)技術(shù)的發(fā)展，DNA分子鑒定技術(shù)也取得了相應(yīng)的突破，對于分子雜交等也能夠進行相應(yīng)的判斷，而相信隨著技術(shù)的不斷發(fā)展，其在臨床中能夠得到更加廣泛的使用。

3.2 蛋白質(zhì)標(biāo)記技術(shù)

3.2.1 蛋白質(zhì)標(biāo)記技術(shù)的抗血清鑒別技術(shù) 中藥中一般都含有蛋白質(zhì)和多糖等抗原性物質(zhì)，抗血清鑒別技術(shù)則是利用其含有的物質(zhì)，制備相應(yīng)的特異性物質(zhì)，然后通過實驗室檢驗，充分利用抗體酶免疫實驗或免疫酶聯(lián)吸附法等對物質(zhì)進行檢驗，從而反應(yīng)其所代表的中藥實際情況，利于臨床進行判斷和使用。

3.2.2 蛋白質(zhì)飛行時間質(zhì)譜鑒定技術(shù) 蛋白質(zhì)飛行時間質(zhì)譜鑒定技術(shù)在進行檢驗的過程中，充分利用到熒光標(biāo)記技術(shù)和飛行時間質(zhì)譜等，根據(jù)不同中藥材中含有的蛋白質(zhì)種類和肽類物質(zhì)不同，對其進行相應(yīng)的判斷，其主要適用于不同類別的中藥材。

3.2.3 同工酶鑒別技術(shù) 中藥中一般含有不同的同工酶分子結(jié)構(gòu)，不同藥材的活性和免疫原性也存在不同，同工酶鑒別技術(shù)則是利用其該項差別，進行電泳檢測或酶活性分析，完成不同中藥材的鑒定。

3.2.4 蛋白質(zhì)電泳鑒別 蛋白質(zhì)電泳鑒別和同工酶鑒別技術(shù)存在一定的相似之處，即均使用到電泳檢測，不同之處則在于，蛋白質(zhì)電泳鑒別是利用不同中藥材中攜帶的電荷存在一定差異，以及其蛋白質(zhì)分子的形狀和大小不同進行電泳分析，從而對不同種類的中藥進行鑒別。

3.3 化學(xué)鑒定技術(shù)

化學(xué)鑒定技術(shù)在進行鑒定的過程中，主要是充分考慮到不同物質(zhì)的化學(xué)組成不同，并將其十分具有特異性的化學(xué)特征作為某種中藥材鑒定的標(biāo)準(zhǔn)。這樣不但可以對于不同種類的中藥材做出較為準(zhǔn)確的判斷，還可以明確所檢中藥材的質(zhì)量是否合格等，由于其化學(xué)檢驗在進行鑒定的過程中，操作具有精細(xì)化的特點，因此能夠?qū)χ兴幉牡膶嶋H情況進行十分精確的反應(yīng)，鑒定完成后利于臨床進行良好的使用，同時為中藥材使用的效果提供了一定保障。但是由于中藥材的化學(xué)成分往往較為復(fù)雜，想要獲得良好的檢驗結(jié)果必須通過不同的精確檢驗完成檢驗。其檢驗的詳細(xì)方法主要如下。

光譜鑒定技術(shù)在使用的過程中，紅外光譜鑒定技術(shù)是最常用的一種方法，其被鑒定領(lǐng)域公認(rèn)為指紋光譜技術(shù)，也就是說其在中藥材甚至化合物的檢驗中均起到十分重要的作用；因為不同的中藥材或者中藥材的混合物本身均具有一定的譜峰特征，按照其光譜特征進行檢驗，不但能夠?qū)τ谥兴幍恼w信息進行反應(yīng)，還可以對檢驗物品本身的損傷減到最小，其在使用的過程中，可以進行反復(fù)操作和檢驗，同時檢驗相對成本較低；而不足之處則在于，針對于光譜十分接近的中藥材，往往很難進行十分準(zhǔn)確的判斷，因此需要采用其他鑒定方法做處進一步判斷[1]。

3.4 色譜鑒定技術(shù)

色譜鑒定技術(shù)在使用的過程中則是利用中藥的色譜不同，完成相應(yīng)的檢測。通過對不同的中藥材進行色譜峰的分析和特異性的判斷，從而通過色譜峰的數(shù)目和譜峰的高度等進行檢測和判斷。其在使用的過程中，對于不同的中藥材能夠進行高效的色譜分離，按照其分子的數(shù)量情況不同，對其微量元素進行反應(yīng)，具備較好的化學(xué)特征[2]。但是在使用的過程中色譜在進行提取和分析的過程中，需要十分精準(zhǔn)的信息進行判斷，因此這就會造成大量用于鑒定的中藥材產(chǎn)生浪費；而目前在色譜鑒定技術(shù)不斷發(fā)展的過程中，對于其相應(yīng)的進展情況也產(chǎn)生了一定的完善，期待可以為臨床提供更加良好的鑒定標(biāo)準(zhǔn)[3]。不同物種在理論上所具備的化學(xué)色譜指紋有顯著差異，但是生物的代謝產(chǎn)物本身會受到各種因素的影響，如環(huán)境、不同的生物部位以及生長發(fā)育階段等，并且基于色譜技術(shù)具備的有限分離和偵測能力，再加上受樣品處理前的一個影響，致使同一物種的藥材指紋圖譜有時會出現(xiàn)較大的差別。因此，在進行中藥鑒定時，如果采用指紋圖譜則需要大樣本來對物種的共性特征進行總結(jié)，且中藥材品種的不同，在鑒定標(biāo)準(zhǔn)方面會存在顯著差異。

3.4.1 HPLC鑒定技術(shù) HPLC的流動相位液體，在高壓輸液系統(tǒng)的幫助下可以在固定相的色譜柱中泵入與之相對應(yīng)的極性流相泵，之后便可以在檢測器中展開檢測；在梯度洗脫技術(shù)的幫助下可以在一張色譜圖上將藥材中各類成分的分離結(jié)果表征出來；色譜柱、流動相和色譜系統(tǒng)的不同都會影響到分離程度，以此所取得色譜指紋會存在顯著差異；檢測器和檢測參數(shù)的不同，所產(chǎn)生的指紋圖譜也會存在顯著差異。

HPLC色譜鑒定技術(shù)在中藥材的鑒定中往往所表現(xiàn)出來的分離能力非常高效，中藥材種小分子化學(xué)成本在數(shù)、量方面的特征都可以準(zhǔn)確且精細(xì)的表征出來，基于溶劑的不同可以采取與之相對應(yīng)的提取分離方法，然而復(fù)雜背景的干擾影響一般很難消除，且可以富集各種微量成分進行表征。在不同色譜柱、流動相和檢測系統(tǒng)的幫助下可以類型多樣化的化學(xué)特征指紋獲取到，并且利用表征的有效或活性成分，HPLC色譜特征可以建立與中藥材功效之間的聯(lián)系。

3.4.2 GC鑒定技術(shù) GC主要是基于不同化合物在固定相和氣體流動相之間的不同分配，來進行分離分析的一種重要方式，在氣體、揮發(fā)性和半揮發(fā)性液體中的分析比較適用。利用程序升溫分析法一般所取得的成分信息較為詳細(xì)，且對GC指紋圖的鑒定，大部分都依賴于程序升溫法。

3.5 形狀顯微鑒定新技術(shù)

由于不同的中藥材具備有自身相對特異的性狀、氣味、顏色等，而其生物性質(zhì)的特性是亙古不變的特點，因此利于其生物特性完成顯微鑒定，則能夠收獲較好的鑒定效果。但是由于環(huán)境、生長條件等可能對于中藥材本身產(chǎn)生一定的影響，因此和檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性仍然有待于進一步完善。其目前在發(fā)展的過程中衍生的視覺仿生和味覺仿生等，分別是通過不同中藥材反應(yīng)和表達(dá)的化學(xué)物質(zhì)信號最為條件，利用仿生技術(shù)對其進行傳感，利用電子傳感陣列的分布對于中藥材做出相應(yīng)的判斷。而味覺仿生則充分利用到中藥材不同氣味的特性，將電子鼻和中藥材放置于密閉的容器中，通過其散發(fā)的氣味，使得化學(xué)傳感陣列對其進行捕捉，通過收集到的信號對對相應(yīng)的物質(zhì)進行識別[4]。

3.6 生物效應(yīng)鑒定技術(shù)

生物效應(yīng)鑒定技術(shù)在使用的過程中，主要是通過定量藥理學(xué)對其進行分析，獲得較為準(zhǔn)確的中藥材特性結(jié)果，其能夠?qū)τ谒幉牡幕钚?、藥性甚至毒性等均進行較好的判斷，幫助臨床較好的解決中藥使用的安全性問題[5]。該技術(shù)的優(yōu)點是直接關(guān)系到中藥的有效性和安全性相關(guān)，缺點是實驗方法本身具備很強的專屬性和較差的通用性，關(guān)于中藥生物效應(yīng)鑒定中的一系列重要問題，仍需要采取行之有效的措施予以解決，如模型、參數(shù)、值、處理方法等。

3.7 DNA分子鑒定

3.7.1 DNA條形碼鑒定技術(shù) DNA條形碼是由加拿大分類學(xué)家PaulHebert在2003年提出，該方法主要是通過利用基因組中一段公認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)且較短的DNA片段當(dāng)做物種標(biāo)記而逐漸建立起來的一種鑒定方法，通過篩選DNA便可以將DNA通用條形碼確定下來，在生物信息學(xué)得幫助下可以對DNA數(shù)據(jù)進行科學(xué)的分析與比較。基于DNA條形碼鑒定快速且準(zhǔn)確，現(xiàn)已經(jīng)成為國內(nèi)外廣大學(xué)者所重點研究的問題。相比較于分子鑒定方法，可以重復(fù)使用NA條形碼鑒定結(jié)果，且本身具有非常強的通用性，在此基礎(chǔ)上可以將數(shù)據(jù)庫與鑒定平臺快速的建立起來。現(xiàn)階段，隨著對中藥DNA條形碼鑒定的不斷深入研究，中藥鑒定技術(shù)的發(fā)展十分迅速。

3.7.2 基于PCR的分子鑒定技術(shù) 隨機和簡單限定引物的PCR標(biāo)記技術(shù)可以通過隨機引物，如RAPD和AP-PCR等來擴增模板DNA，或者還可以利用AFLP、ISSR、DALP、SRAP、TRAP等來簡單的限定引物。 現(xiàn)階段，其主要用來分析生物遺傳的多樣性關(guān)系，研究PCR標(biāo)記技術(shù)研究的前提條件主要是對研究對象的DNA序列信息事先進行充分掌握。

3.7.3 基于分子雜交的DNA分子技術(shù) RFLP是以序列差異需性為依據(jù)所產(chǎn)生的特的限制性內(nèi)切酶酶切位點，致使酶切片段長度出現(xiàn)相應(yīng)的變化或增減片段的數(shù)量，在此基礎(chǔ)上進行科學(xué)的鑒定。該技術(shù)在鑒別北沙參基原植物珊瑚菜的不同居群中首次被應(yīng)用，現(xiàn)在在柴胡等藥材或其基原植物的鑒定技術(shù)當(dāng)中獲得了廣泛的應(yīng)用?；谠摲椒ㄍ枰罅康腄NA，且對于DNA的質(zhì)量具備很高的要求，為此在實際推廣過程中不可避免會受到來自各方面的阻力影響。要求也較高，因此在推廣方面受到了一定的限制。PCRRFLP技術(shù)酶切方法保留和雜交技術(shù)簡化的條件下逐漸建立起來，并且普遍應(yīng)用于各種藥材的鑒定，如靈芝和絞股藍(lán)等。

3.8 色譜-光譜聯(lián)用鑒定技術(shù)

色譜-光譜聯(lián)用鑒定技術(shù)是一種分離性能比較高效的色譜技術(shù)，而光譜技術(shù)所獲取的化學(xué)成分具備豐富的結(jié)構(gòu)信息，二者的有機結(jié)合便可以促進系統(tǒng)中藥鑒定技術(shù)的形成，該技術(shù)主要有高效液相色譜-質(zhì)譜、氣相色譜-質(zhì)譜、質(zhì)譜-質(zhì)譜以及高效毛細(xì)管電泳-質(zhì)譜，其中高效液相色譜-質(zhì)譜的應(yīng)用最為廣泛，其主要是借助質(zhì)譜來檢測與解析各種中藥材成分，以此有助于極大促進傳統(tǒng)檢測器選擇性與靈敏度的顯著提高，還可以定性中藥樣本中的未知化學(xué)成分，對未知化學(xué)成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)進行初步確定，在對色譜峰所代表的化學(xué)成分結(jié)構(gòu)信息時，所取得的鑒定信息會更加的準(zhǔn)確且具體，并且對于檢測分離后極易出現(xiàn)變化與損壞的樣品中更加適用。

4 發(fā)展和展望

目前隨著我國經(jīng)濟技術(shù)的不斷發(fā)展，各項鑒定技術(shù)也不斷在出現(xiàn)新的發(fā)展動向，而新型的鑒定技術(shù)為中藥的準(zhǔn)確判斷和良好使用均提供了一定依據(jù)，使得臨床的用藥準(zhǔn)確性和安全性均得到保障。但是相關(guān)的設(shè)備和檢測儀器投入大量使用還需要花費較大的物力和財力，而我們相信隨著醫(yī)學(xué)領(lǐng)域相關(guān)技術(shù)的不斷完善，中藥的鑒定也可以形成數(shù)字化、規(guī)范化、系統(tǒng)化的模式，繼而為臨床中藥的使用提供更加可靠的依據(jù)。

綜上所述，該文對傳統(tǒng)鑒定中藥的方法進行簡單的介紹，諸如其弊端，在此基礎(chǔ)上結(jié)合當(dāng)下科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和新成果的應(yīng)用，較為系統(tǒng)且詳細(xì)的了中藥鑒定的新方法與新技術(shù)。

[1]陳科力，黃林芳，劉義梅.中藥鑒定方法學(xué)發(fā)展歷程[J].中國中藥雜志，2014，39（7）：1203-1208.

[2]張愛華，劉雅芳，王萍，等.中藥鑒定[J].中國現(xiàn)代中藥，2014，16（1）：77-79.

[3]蘇新堯，薛建平，王彩霞.中藥功效成分合成生物學(xué)研究進展優(yōu)先出版[J].中國中藥雜志，2016,41（22）：4150-4157.

[4]樂亮，姜保平，徐江，等.中藥蛋白質(zhì)組學(xué)研究策略優(yōu)先出版[J].中國中藥雜志，2016，41（22）：4096-4102.

[5]代麗萍，陳隨清.論中藥鑒定學(xué)的內(nèi)涵與外延[J].藥學(xué)教育，2015，31（6）：6-8.