雞抗小鵝瘟精致高免蛋黃抗體的研制

蘭信海 馮永勝 衣服德 （山東省青島市畜牧獸醫(yī)研究所 266100）

?

雞抗小鵝瘟精致高免蛋黃抗體的研制

蘭信海 馮永勝 衣服德 （山東省青島市畜牧獸醫(yī)研究所 266100）

利用發(fā)生小鵝瘟死亡的鵝的病料分離病毒，經處理后制備抗原，以制備的小鵝瘟滅活油乳劑抗原對試驗雞頸部皮下注射0.5ml/只；2周后加倍量進行強化免疫；間隔2周后用滅活油乳劑抗原再次強化免疫1次，頸部皮下注射2.0ml/只；以后間隔8周進行1次強化免疫，每次頸部皮下注射2.0ml/只；用瓊擴方法檢測萃提蛋黃上清液中抗小鵝瘟特異抗體效價，直到抗體效價達到1:64以上即可集蛋，用于制備瓊擴抗體效價達到1:32及以上小鵝瘟蛋黃抗體；并對抗體進行無菌檢驗、安全試驗、效力試驗、臨床治療試驗等，效果明顯。

小鵝瘟 高免蛋黃抗體 強化免疫

小鵝瘟是由鵝細小病毒引起的雛鵝急性敗血性傳染病。病雛鵝的臨診特點是精神委頓，食欲廢絕，嚴重下痢，有時出現神經癥狀，死亡率高。對養(yǎng)鵝業(yè)的發(fā)展，影響極大，搞好小鵝瘟的防治工作是當務之急小鵝瘟高免抗體對于治療該病效果明顯。

1 材料和方法

1.1 毒種及抗原的制備 將冷凍保存的患小鵝瘟疾病死亡的小鵝腸道病料按照1:5加滅菌生理鹽水搗碎，凍融2次后，形成混合組織懸液；將混合組織懸液進行4 000rpm離心，收集上清液并于56℃處理30min，每毫升加入青霉素和鏈霉素1 000IU，4℃處理2h；將青、鏈霉素處理后的種毒液用滅菌生理鹽水稀釋100倍，經0.22mm微孔濾膜過濾除菌，以0.1ml/只的劑量接種13~15日齡非免疫鵝胚尿囊腔，37℃孵育，棄去48h內的死亡鵝胚，收集48~120h內死亡的胚；無菌采集尿囊液及羊水作為抗原；

1.2 疫苗的制備 將收獲的尿囊毒液中加入0.1%甲醛溶液，37℃密閉滅活48h；滅活完成后，按滅活毒液96份，滅菌吐溫-80，4份配制，即為制苗用抗原；按油相3份、水相1份的比例取油相、水相攪拌均勻，加入高壓均質機中，調節(jié)壓力為35mpa，乳化制備成小鵝瘟滅活油乳劑疫苗，并加入1%硫柳汞溶液使之終濃度為0.01%；

1.3 試驗動物的選擇 選擇健康無病，200日齡蛋雞100只供試驗用。

1.4 抗體的制作 （1）以制備的小鵝瘟滅活油乳劑抗原對試驗雞頸部皮下注射0.5ml/只；2周后，以制備的小鵝瘟滅活油乳劑抗原頸部皮下注射1.0ml/只，進行強化免疫；間隔2周后用滅活油乳劑抗原再次強化免疫1次，頸部皮下注射2.0ml/只；以后間隔8周進行1次強化免疫，每次頸部皮下注射2.0ml/只；（2）從第2次強化免疫后第７d開始，每隔3d抽樣用瓊脂擴散方法測定高免蛋黃中抗小鵝瘟特異抗體效價；蛋黃與生理鹽水按1:3(V/V)稀釋后，加與蛋黃等體積三氯甲烷進行萃提，用瓊擴方法檢測萃提上清液中抗小鵝瘟特異抗體效價，若上清液瓊擴抗體效價達到1:64以上即可集蛋，用于制備小鵝瘟蛋黃抗體；（3）將蛋殼消毒，打蛋并充分除去蛋清、胚盤和系帶，收集蛋黃；于蛋黃中加入3倍體積的生理鹽水，充分攪拌均勻，然后在蛋黃液中加入與蛋黃等體積的三氯甲烷，充分振蕩混合均勻，室溫作用60min，以3500~ 4000rpm離心30min，收集上層清液備用；（4）在分離的上清液中加入終濃度為0.05%的甲醛溶液，充分攪拌混勻，37℃保溫密封8~12h；用0.22μm微孔濾膜過濾除菌，即得瓊擴抗體效價達到1:32及以上異源抗小鵝瘟蛋黃抗體。

2 抗體的檢驗

2.1 無菌檢驗 將生產的抗體抽檢2份，各以0.1ml分別接種于普通瓊脂斜面和肉湯培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24h，無菌生長為合格。

2.2 效價測定 以AGP法測定抗體效價，共進行5批，效價均在1:32以上。

2.3 安全試驗 選擇同批同日10日齡易感鴨30只，隨機分為3組，每組10只，第1組每只注射5ml，第2組每只注射10ml，第3組每只注射15ml，隔離觀察1周，以健活為安全。結果3組30只鴨的精神、采食和飲水均正常，無死亡，確定為安全。

2.4 效力試驗 試驗時應用不同抗體水平，與一定組織毒相互作用，37℃恒溫箱中作用1h，而后取一定量經口服、注射，并設抗體對照組，觀察1周，注意有無發(fā)病。

3 結果

3.1 不同抗體水平的保護率 見表1。

表1 不同抗體水平的保護率

3.2 臨床治療效果 選40只10日齡的雛鴨，分4組，每組10只，1、2、3、4組(對照組)用強毒攻毒，每只2ml，致病的鴨于發(fā)病第2天用不同劑量的抗體(1組為0.5ml，2組為1ml，3組為2ml，4組不注射)進行治療，觀察治療效果。結果如表2。

表2 臨床治療試驗效果

4 結論

由表1可以看出，抗體效價達到1:32時，試驗保護率可達90%，并且，抗體越高保護效果越好。由表2可以看出，保護率為1組90%，2、3組為100%，4組未注射抗體無保護率。結果表明，用此方法生產的高免抗體安全性強，效果良好，是解決小鵝瘟的有效方法。

（2011–02–28）

S852.4+3

A

1007-1733(2011)04-0015-02