銀屑病不同證候血清細(xì)胞因子的表達(dá)差異研究?

龍劍文，皮先明，涂亞庭

(1.湖北中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院皮膚性病學(xué)教研室，武漢 430061; 2.湖北省中醫(yī)院皮膚科，武漢 430061;3.華中科技大學(xué)協(xié)和醫(yī)院皮膚科，武漢 430000)

銀屑病不同證候血清細(xì)胞因子的表達(dá)差異研究?

龍劍文1，2，皮先明2，涂亞庭3

(1.湖北中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院皮膚性病學(xué)教研室，武漢 430061; 2.湖北省中醫(yī)院皮膚科，武漢 430061;3.華中科技大學(xué)協(xié)和醫(yī)院皮膚科，武漢 430000)

目的:觀察銀屑病不同證候(血熱證、血瘀證、血虛證)患者及健康人群血清中TNF－α、IFN－γ、CRP、IL－17 A、IL－6、IL－8、VEGF含量的變化，探討其與銀屑病不同證候的關(guān)系。方法:入選尋常型銀屑病患者共90例，其中血熱證、血瘀證、血虛證各30例，另取健康人30名作為對(duì)照。ELISA法檢測(cè)不同證候銀屑病患者血清中主要細(xì)胞因子TNF－α、IFN－γ、CRP、IL－17 A、IL－6、IL－8、VEGF水平，并對(duì)銀屑病患者皮損面積和嚴(yán)重程度指數(shù)(PASI)評(píng)分。結(jié)果:血熱證組銀屑病患者血清中TNF－α、IFN－γ、IL－6、IL－8、CRP含量較正常組明顯升高，血瘀證組TNF－α、IFN－γ、IL－6血清含量較正常組明顯升高，血虛證組TNF－α血清含量較正常組明顯升高差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，血熱證組血清TNF－α、IFN－γ含量與其PASI值正相關(guān)。結(jié)論:銀屑病不同證候患者血清中細(xì)胞因子的表達(dá)存在差異，某種或某幾種細(xì)胞因子可被用于判斷銀屑病的證候。

銀屑病;證候;血清;細(xì)胞因子

銀屑病是一種常見(jiàn)的慢性炎癥性皮膚病，特征性皮損為銀白色鱗屑和邊界清楚的紅色斑塊。在病理上表現(xiàn)為炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)和角質(zhì)形成細(xì)胞過(guò)度增殖。免疫學(xué)認(rèn)為本病是通過(guò)T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)，以角質(zhì)形成細(xì)胞異常增殖和血管重構(gòu)為特征的自身免疫性疾病［1］。在以往體外實(shí)驗(yàn)中，已揭示了許多細(xì)胞因子在銀屑病發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用［2］。尋常性銀屑病屬于中醫(yī)學(xué)“白庀”范疇，臨床辨證認(rèn)為本病屬血分，常分為血熱型、血瘀型、血燥型［3］。目前尚未見(jiàn)不同證候銀屑病患者血清細(xì)胞因子表達(dá)的相關(guān)報(bào)道。所以，本文觀察了幾種有重要意義的細(xì)胞因子腫瘤壞死因子－α(TNF－α)、干擾素－γ(IFN－γ)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、白介素－17A(IL－17A)、白介素－6 (IL－6)、白介素－8(IL－8)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)在不同證候銀屑病患者血清中的含量，并研究與臨床參數(shù)銀屑病皮損面積和嚴(yán)重程度指數(shù)(PASI)之間的聯(lián)系，以期發(fā)現(xiàn)其中的聯(lián)系和差異。

1 臨床資料

1.1 一般資料

選取2014年3月至2015年3月湖北省中醫(yī)院皮膚科門(mén)診或住院的銀屑病患者，按中醫(yī)辨證分為血熱證組30例(男13例，女17例)，血瘀證組30例(男14例，女16例)，血燥證組30例(男10例，女20例)。血熱證組年齡20～65歲，平均年齡(43.8 ±13.12)歲，病程1個(gè)月～5年，平均年齡(2.93± 1.36)年;血瘀證組年齡 20～62歲，平均年齡(43.03±12.96)歲，病程1～10年，平均年齡(3.67 ±1.91)年;血燥證組年齡20～65歲，平均年齡(42.9±13.51)歲，病程1～8年，平均病理(3.80± 2.18)年。3組年齡、性別和病程比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。所有患者均進(jìn)行銀屑病皮損面積和嚴(yán)重程度指數(shù)評(píng)分(PASI評(píng)分)，血熱證組PASI評(píng)分(18.94±5.60)分，血瘀證組PASI評(píng)分(10.45 ±2.98)分，血燥證組PASI評(píng)分(8.02±3.05)分。正常對(duì)照組來(lái)自湖北省中醫(yī)院健康體檢中心體檢正常人員30例(男15例，女15例)，年齡20～65歲，平均年齡(42.6±13.41)歲。與前3組性別、年齡上比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，患者和正常對(duì)照組均簽署知情同意書(shū)。

1.2 診斷及辨證標(biāo)準(zhǔn)

銀屑病診斷標(biāo)準(zhǔn)符合《皮膚病學(xué)》［1］尋常性銀屑病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，中醫(yī)證候分型符合《中醫(yī)皮膚病學(xué)》［3］診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 納入和排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn):符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn);年齡18～60歲;病程0.1～20年;所選病例均為初發(fā)或最近2個(gè)月未作任何治療且無(wú)其他疾病史者。排除標(biāo)準(zhǔn):近2個(gè)月內(nèi)曾采用系統(tǒng)治療;合并有心、腦血管、消化、泌尿和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)性疾病;精神病患者;哺乳期、妊娠或擬妊娠婦女。

1.4 主要試劑和儀器

分光光度儀為芬蘭雷勃公司產(chǎn)品(Multiskan MS，LabsystemsOy，Helsinki，F(xiàn)inland);羅 氏MODULAR P－800全自動(dòng)生化分析儀。細(xì)胞因子試劑盒采購(gòu)于U－Cytech公司:血清TNF－α(U－CyTech－CT209A)、IFN－γ(U－CyTech－CT201A)、IL－17A(UCyTech－CT516A)、IL－8(U－CyTech－CT212A)、IL－6 (U－CyTech－CT205A)、VEGF(Biovision－K5363－100)。

2 方法

2.1 樣本的采集與預(yù)處理

取患者及健康人外周靜脈血5 ml，1000 r/min離心10 min后取血清，－20℃冰箱凍存?zhèn)錅y(cè)，ELISA檢測(cè)血清中細(xì)胞因子TNF－α、IFN－γ、IL－17A、IL－6、IL－8、VEGF水平。具體實(shí)驗(yàn)步驟根據(jù)相關(guān)試劑盒操作說(shuō)明進(jìn)行，分光光度儀450 nm讀值。CRP檢測(cè)方法按羅氏MODULARP－800全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)規(guī)程進(jìn)行。

2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，成組比較符合正態(tài)分布采用t檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布采用Mann－Whitney U非參數(shù)檢驗(yàn)，相關(guān)性比較采用Spearman相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 銀屑病患者與正常對(duì)照組血清中相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的比較

表1顯示，銀屑病患者血清 TNF－α、IFN－γ、CRP、IL－8、IL－6含量與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，血清IL－17 A、VEGF含量與正常對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

表1 銀屑病患者與對(duì)照組血清TNF-α、IFN-γ、CRP、IL-17 A、IL-8、IL-6、VEGF含量比較(±s)

3.2 3組銀屑病患者與正常對(duì)照組血清中相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)比較

表2顯示，血熱證、血瘀證、血燥證銀屑病患者與對(duì)照組血清TNF－α含量較正常對(duì)照組均有顯著性提高，且血熱證組TNF－α含量高于血燥證組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);血熱證組、血瘀證組IFN－γ血清含量較正常對(duì)照組有顯著性提高，且血熱證組IFN－γ含量高于血瘀證組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);血熱證組血清CRP、IL－8含量較正常對(duì)照組有顯著性提高(P＜0.05);血熱證組、血瘀證組血清IL－6含量較正常對(duì)照組有顯著性提高，且血熱證組IL－6含量高于血瘀證組(P＜0.05)。血熱證、血瘀證、血燥證銀屑病患者與對(duì)照組血清IL－17 A、VEGF和正常對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。

3.3 3組銀屑病患者血清相關(guān)細(xì)胞因子含量與其PASI評(píng)分的相關(guān)性

表3顯示，血熱證銀屑病患者血清TNF－α、IFN－γ含量與其PASI值呈正相關(guān)(P＜0.05)，其余各組PASI及血清細(xì)胞因子之間無(wú)明顯相關(guān)性。

4 討論

銀屑病是皮膚科臨床常見(jiàn)的一種炎癥性皮膚疾患，屬于中醫(yī)“干癬”“頑癬”“松皮癬”等范疇。中醫(yī)辨證主要分為血熱證、血瘀證、血虛證3型。尋常性銀屑病初期多為血熱所致，日久必瘀，瘀久耗傷營(yíng)血?jiǎng)t表現(xiàn)為血燥。許多細(xì)胞因子被認(rèn)為在銀屑病的發(fā)生發(fā)展中扮演重要角色，如TNF－α、IFN－γ、IL－17等［4］一直是銀屑病免疫炎癥研究領(lǐng)域中的熱點(diǎn)，還有一些與銀屑病的并發(fā)癥有關(guān)，如CRP［5］。

表2 3組證候銀屑病患者與對(duì)照組血清TNF-α、IFN-γ、CRP、IL-17 A、IL-6、IL-8、VEGF含量比較(±s)

表2 3組證候銀屑病患者與對(duì)照組血清TNF-α、IFN-γ、CRP、IL-17 A、IL-6、IL-8、VEGF含量比較(±s)

注:與正常對(duì)照組比較:▲P＜0.05;與血熱證組比較:△P＜0.05

表3 不同證候銀屑病患者血清TNF-α、IFN-γ、CRP、IL-6、IL-8含量與其PASI評(píng)分的相關(guān)性

之前的研究表明，T輔助細(xì)胞1(Th1細(xì)胞)在介導(dǎo)或維持銀屑病的發(fā)生發(fā)展［6－7］起重要作用。本研究數(shù)據(jù)支持這種觀點(diǎn)。如Th1型細(xì)胞因子(如TNF－α，IFN－γ)和一些促炎細(xì)胞因子(如IL－6，IL－8)在銀屑病患者血清中含量明顯提高，且血熱證組TNF－α、IFN－γ含量與其PASI值呈正相關(guān)。IL－17A是由活化的Th17細(xì)胞產(chǎn)生的，在IFN－γ的協(xié)同作用下，能促進(jìn)人類(lèi)角質(zhì)形成細(xì)胞表達(dá)促炎細(xì)胞因子，如IL－6 和IL－8，從而增強(qiáng)T細(xì)胞向皮膚的遷移［4］。臨床上，IL－17mRNA在銀屑病皮損中可以檢測(cè)到［8］。關(guān)于患者血清中IL－17A的含量，以前的研究結(jié)果并不相同［9］。本次研究并未發(fā)現(xiàn)銀屑病患者血清中 IL－17A含量與正常人有明顯差異，這可能提示IL－17主要來(lái)源于組織而非血液中。血管增生是銀屑病患者皮損的一個(gè)重要變化，VEGF是血管內(nèi)皮細(xì)胞高度特異性分裂原，能誘導(dǎo)皮膚血管生成和重構(gòu)。以前的研究表明，VEGF在銀屑病皮損、血清中高表達(dá)［10］。本研究中，銀屑病患者血清VEGF含量較正常組高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其原因可能與病例的選擇及統(tǒng)計(jì)學(xué)方法有關(guān)。同時(shí)，不同證候銀屑病患者組間血清VEGF含量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這些可能說(shuō)明用血清IL－17、VEGF含量來(lái)區(qū)別銀屑病不同證候意義不大。CRP一直被認(rèn)為是銀屑病患者心血管疾患的一個(gè)危險(xiǎn)因素之一［5］。本次研究發(fā)現(xiàn)，銀屑病組與正常對(duì)照組之間血清CRP含量有明顯差異，與Uysal S［11］等報(bào)道一致，而且血熱證CRP含量高于血瘀證和血虛證，說(shuō)明血熱證銀屑病患者出現(xiàn)心血管疾患的概率較高。

綜上所述，血熱證組TNF－α、IFN－γ、IL－6、IL－8、CRP血清含量明顯升高，血瘀證組TNF－α、IFN－γ、IL－6血清含量明顯升高，血虛證組TNF－α血清含量明顯升高，說(shuō)明不同證候銀屑病患者血清中細(xì)胞因子的表達(dá)是有差異的，這為進(jìn)一步研究銀屑病中醫(yī)證候的實(shí)質(zhì)提供了線索，同時(shí)應(yīng)在不同證候銀屑病患者中進(jìn)行更大樣本和更多細(xì)胞因子的檢測(cè)，以便為銀屑病中醫(yī)證候量化提供依據(jù)。

［1］張學(xué)軍.皮膚性病學(xué)［M］.8版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2013:139.

［2］BONIFATI C，AMEGLIO F.Cytokines in psoriasis［J］.Int J Dermatol，1999，38(4):241－251.

［3］趙炳南，張志禮.簡(jiǎn)明中醫(yī)皮膚病學(xué)［M］.北京:中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2014:200.

［4］ CESARE AD，MEGLIO PD，NESTLE FO.The IL－23/Th17 Axis in the Immunopathogenesis of Psoriasis［J］.J Invest Dermatol，2009，129(6):1339－1350.

［5］ GERKOWICZ A，PIETRZAK A，SZEPIETOWSKI JC，et al. Biochemical markers of psoriasis as a metabolic disease［J］. Folia Histochem Cytobiol，2012，50(2):155－170.

［6］CAI YH，F(xiàn)LEMING C，YAN J，et al.New insights of T cells in the pathogenesis of psoriasis［J］.Cell Mol Immunol，2012，9 (4):302－309.

［7］SZEGEDI A，ALEKSZA M，GONDA A，et al.Elevated rate of Thelper1(T(H)1)lymphocytes and serum IFN－γ levels in psoriatic patients［J］.Immunol Lett，2003，86(3):277－280.

［8］ LEANNE M JH，MAYTE SF，MARY SW，et al.Effective Narrow－Band UVB Radiation Therapy Suppresses the IL－23/IL－17 Axis in Normalized Psoriasis Plaques［J］.J Invest Dermatol，2010，130(11):2654－2663.

［9］ KYRIAKOU A，PATSATSI A，VYZANTIADIS TA，et al.Serum levels of TNF－α，IL－12/23p40，and IL－17 in plaque psoriasis and their correlation with disease severity［J］.J Immunol Res，2014:467541.

［10］龍劍文，皮先明，涂亞庭.進(jìn)行期尋常性銀屑病皮損β－連環(huán)蛋白，VEGF和VEGFR－2的mRNA表達(dá)［J］.中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志，2015，29(1):33－35.

［11］UYSAL S，YILMAZ FM，KARATOPRAK K，et al.The levels of serum pentraxin3，CRP，fetuin－A，and insulin in patients with psoriasis［J］.Eur Rev Med Pharmacol Sci，2014，18(22):3453－3458.

Study on Serum Levels of Cytokines in Patients with Psoriasis Vulgaris of Different Chinese Medicine Syndromes

LONG Jian－wen1，2，PI Xian－ming2，TU Ya－ting3

(1．Department of Dermatovenerology，The first clinical medical college of Hubei University of Chinese Medicine．Wuhan 430061，China;2．Department of dermatology，Hubei Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，Wuhan 430061，China; 3．Department of dermatology，Union hospital of Huazhong University of Science and Technology，Wuhan 430061，China)

Objective:To observe serum levels of cytokines in the healthy individuals and the psoriatic patients diagnosed of blood－stasis syndrome(BSS)，blood－dryness syndrome(BDS)and blood－h(huán)eat syndrome(BHS).Meanwhile，the relationship between cytokine expression and psoriasis of different syndromes was investigated.Methods:A total of 90 psoriatic patients were recruited and assigned to 3 groups according to their CM syndromes，including 30 patients of BSS，30 of BDS and 30 of BHS.Another 30 sex－and age－matched healthy subjects were enrolled into the control group.Serum concentrations of multiple cytokines，including tumor necrosis factor－α(TNF－α)，interferon γ(IFN－γ)，C－reactive protein (CRP)，interleukin－17A(IL－17 A)，interleukin－6(IL－6)，interleukin－8(IL－8)and vascular endothelial growth factor (VEGF)，were measured by a ELISA.The Psoriasis Area and Severity Index(PASI)is used to quantify the extent of the disease.Results:Serum levels of TNF－α，IFN－γ、IL－6、IL－8、CRP were substantially increased in the BHS group compared with the control group;Serum levels of TNF－α，IFN－γ、IL－6 were elevated in the BSS group compared with the control group;Meanwhile，Serum levels of TNF－α were substantially increased in the BDS group compared with the control group. Serum levels of TNF－α and IFN－γ had correlation with PASI scores in the BHS group.Conclusions:The expression profiles of cytokines in serum were different in psoriatic patients with different CM syndromes.The serum concentrations of one or more cytokines could be determined for TCM syndromes of psoriasis.A larger sample of clinical research is necessary.

psoriasis vulgaris;syndromes;serum;cytokines

R758.63

A

1006－3250(2017)02－0234－03

2016－09－15

武漢中青年醫(yī)學(xué)骨干人才培養(yǎng)工程項(xiàng)目

龍劍文(1979－)，男，湖北天門(mén)人，副教授，副主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)博士，從事中西醫(yī)結(jié)合防治皮膚病的臨床與研究。