硬核油對瘤胃體外發(fā)酵及脂肪酸組成的影響

孫玲玲 馬 露 卜登攀,2,3* 許建初 劉士杰 何美瑩

(1．中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，動物營養(yǎng)學(xué)國家重點實驗室，北京100193；2．中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院與世界農(nóng)用林業(yè)中心，農(nóng)用林業(yè)與可持續(xù)畜牧業(yè)聯(lián)合實驗室，北京100193；3．湖南畜產(chǎn)品質(zhì)量安全協(xié)同創(chuàng)新中心，長沙410128；4．中國科學(xué)院昆明植物研究所，昆明650201；5．中國飼料工業(yè)協(xié)會，北京100125；6．云南省熱帶作物科學(xué)研究所，景洪666100)

硬核油對瘤胃體外發(fā)酵及脂肪酸組成的影響

孫玲玲1馬 露1卜登攀1,2,3*許建初4劉士杰5何美瑩6

(1．中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，動物營養(yǎng)學(xué)國家重點實驗室，北京100193；2．中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院與世界農(nóng)用林業(yè)中心，農(nóng)用林業(yè)與可持續(xù)畜牧業(yè)聯(lián)合實驗室，北京100193；3．湖南畜產(chǎn)品質(zhì)量安全協(xié)同創(chuàng)新中心，長沙410128；4．中國科學(xué)院昆明植物研究所，昆明650201；5．中國飼料工業(yè)協(xié)會，北京100125；6．云南省熱帶作物科學(xué)研究所，景洪666100)

本研究利用體外產(chǎn)氣法，探究飼糧中分別添加1%、2%、3%及4%(干物質(zhì)基礎(chǔ))的硬核油對瘤胃體外發(fā)酵24 h產(chǎn)氣參數(shù)、發(fā)酵參數(shù)及脂肪酸組成的影響，旨在確定硬核油在瘤胃發(fā)酵中的最適添加水平。結(jié)果表明：1)飼糧中添加硬核油對24 h產(chǎn)氣量、理論最大產(chǎn)氣量及產(chǎn)氣速率無顯著影響(P>0.05)。2)氨氮(P=0.044)、總揮發(fā)性脂肪酸(P<0.001)、乙酸(P<0.001)、丙酸(P=0.047)及丁酸濃度(P=0.017)隨硬核油添加水平的增加呈二次曲線升高，且總揮發(fā)性脂肪酸及乙酸濃度在1%、2%及3%組顯著高于對照組及4%組(P<0.05)；pH、微生物蛋白濃度、干物質(zhì)降解率、中性洗滌纖維降解率及酸性洗滌纖維降解率未受硬核油添加的影響(P>0.05)。3)飽和脂肪酸的含量隨硬核油添加水平的增加呈線性(P=0.008)及二次(P=0.028)降低，其中C18∶0的含量也呈線性降低(P=0.030)；不飽和脂肪酸的含量隨硬核油添加水平的增加呈線性(P=0.008)及二次(P=0.028)升高，其中t9-C18∶1含量呈線性(P=0.002)、t11-C18∶1含量呈二次(P<0.001)、c9-C18∶1含量呈線性(P=0.028)和二次(P=0.005)升高，且t9-C18∶1及c9-C18∶1含量均在3%添加水平下出現(xiàn)最大值。在本試驗條件下，1%、2%及3%添加水平的硬核油可提高瘤胃體外發(fā)酵不飽和脂肪酸含量，同時增加揮發(fā)性脂肪酸的濃度，3%添加水平效果最佳。

硬核油；產(chǎn)氣參數(shù)；發(fā)酵參數(shù)；脂肪酸組成

瘤胃是一個天然的厭氧發(fā)酵罐，在其發(fā)酵過程中伴隨著能量的損失[1]，為提高飼料的利用效率及反芻動物生產(chǎn)性能，一些研究致力于開發(fā)調(diào)控劑來調(diào)控反芻動物的瘤胃發(fā)酵過程。植物油含有調(diào)控瘤胃發(fā)酵的活性成分且天然無毒副作用，近年來已被廣泛應(yīng)用在調(diào)控瘤胃發(fā)酵的過程中。植物油種類繁多且添加水平不同，其調(diào)控瘤胃發(fā)酵的作用效果亦不同，因此確定不同種類植物油調(diào)控瘤胃發(fā)酵的最適添加水平對其在反芻動物生產(chǎn)中的應(yīng)用具有重要意義。

關(guān)于植物油對瘤胃發(fā)酵調(diào)控效果的研究報道主要集中在產(chǎn)氣、瘤胃發(fā)酵參數(shù)及瘤胃液脂肪酸組成等幾方面。鄭會超等[2]利用體外產(chǎn)氣法研究表明，在飼糧干物質(zhì)(DM)基礎(chǔ)上添加2%和4%的棉籽油、豆油、菜籽油、玉米油及葵花油，顯著降低了瘤胃體外發(fā)酵過程中的產(chǎn)氣量；Nanon等[3]利用批次培養(yǎng)法研究發(fā)現(xiàn)，向精粗比為1∶1的飼糧中添加桂皮油、丁香油、大蒜油、生姜油及香茅油(200 mg/kg,DM基礎(chǔ))提高了總揮發(fā)性脂肪酸(TVFA)濃度，對乙酸/丙酸沒有顯著影響；史浩亭等[4]利用人工瘤胃技術(shù)探究1%、2%、3%及4%(DM基礎(chǔ))添加水平的蘇子油對瘤胃體外發(fā)酵參數(shù)等的影響，結(jié)果表明，添加蘇子油對pH和氨氮(NH3-N)濃度沒有顯著影響，但顯著降低了飼糧干物質(zhì)降解率(DMD)、中性洗滌纖維降解率(NDFD)及酸性洗滌纖維降解率(ADFD)；王喜樂等[5]、梁賢威等[6]及Zhu等[7]研究發(fā)現(xiàn)，向飼糧中分別添加葵花籽油(7 mL/d)、茶油(4%，DM基礎(chǔ))及大蒜油(0.8 g/d)均提高了瘤胃液中C18∶1及C18∶2等不飽和脂肪酸的含量。

硬核(Scleropyrumwallichianum)為檀香科(Santalaceae)硬核屬(Scleropyrum)的一種帶刺小喬木，是云南西雙版納地區(qū)的本土野生植物，其種仁含油率67%左右[8]，包括C16∶0、C12∶0、C10∶0、C20∶0、C18∶1、C18∶2等11種脂肪酸及植物中非常見的炔酸成分，有研究證明其含有的炔酸成分具有抗分枝桿菌和抗瘧原蟲的作用[9]。硬核的生長適應(yīng)力強(qiáng)，在西雙版納地區(qū)分布較廣，資源量大，硬核油的生產(chǎn)成本相對低廉，具有良好的開發(fā)價值和應(yīng)用前景。本研究利用體外產(chǎn)氣法，探究不同添加水平的硬核油對瘤胃產(chǎn)氣參數(shù)、發(fā)酵參數(shù)及脂肪酸組成的影響，初步確定硬核油在飼糧中的最適添加水平，為硬核油在反芻動物生產(chǎn)中的實際應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 硬核油及飼糧樣品

試驗所用硬核油由云南省熱帶作物科學(xué)研究所提供，由硬核種仁經(jīng)冷鏈壓榨工藝制得，呈金黃色，澄清透明，純度為99.8%。利用有機(jī)溶劑提取粗脂肪后定量測定硬核油的脂肪酸組成比例，結(jié)果見下表1。體外發(fā)酵所用飼糧與供體動物日常飼喂飼糧完全一致，飼糧風(fēng)干后粉碎過2 mm篩作為發(fā)酵底物待用。飼糧組成及營養(yǎng)水平見表2。

表1 硬核油主要脂肪酸組成比例

表2 飼糧組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

續(xù)表2項目Items含量Content粗脂肪EE2．24粗灰分Ash6．79中性洗滌纖維NDF43．34酸性洗滌纖維ADF23．28泌乳凈能NEL/(MJ/kg)3．43

1)每千克預(yù)混料含 One kilogram of premix contained the following：VA 250 000 IU，VD 65 000 IU，VE 2 100 IU，F(xiàn)e 400 mg,Cu 540 mg，Zn 2 100 mg，Mn 560 mg，Se 15 mg，I 35 mg，Co 68 mg。

2)泌乳凈能為計算值，由CPM-Dairy 3.8.0.1(美國康奈爾大學(xué)、賓夕法尼亞大學(xué)、邁納農(nóng)業(yè)研究所共同研發(fā))計算得出，其他為實測值。NELwas a calculated value, and was calculated by CPM-Dairy 3.8.0.1 researched and developed by Cornell University， University of Pennsylvania， William H. Miner Agricultural Research Institute, while the others were measured values.

1.1.2 瘤胃液的采集及緩沖液的配制

試驗所用緩沖液按照Menke等[10]的方法配制而成，配制后持續(xù)通入CO2并于39 ℃水浴中保存?zhèn)溆谩?/p>

在中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所昌平基地選取3頭體重(550±50) kg、泌乳日齡(136±37) d、產(chǎn)奶量(25.3±2.79) kg且裝有永久瘺管的3胎健康荷斯坦奶牛。試驗當(dāng)天于晨飼前1 h通過瘤胃瘺管采集瘤胃液并裝于事先預(yù)熱(39 ℃)且充滿CO2的保溫瓶，迅速帶回實驗室，經(jīng)4層醫(yī)用紗布過濾后(過濾同時持續(xù)通入CO2)馬上用于試驗。

1.2 試驗設(shè)計

采用完全隨機(jī)試驗設(shè)計，設(shè)無添加對照組和試驗組，試驗組硬核油的添加水平分別為底物DM的1%、2%、3%及4%，每個處理5個重復(fù)，發(fā)酵24 h后終止，收集發(fā)酵液及剩余發(fā)酵底物用以測定pH、NH3-N濃度、微生物蛋白(MCP)濃度、揮發(fā)性脂肪酸(VFA)濃度、干物質(zhì)降解率(DMD)、NDFD、ADFD及脂肪酸含量。

1.3 試驗方法

采用中國農(nóng)業(yè)大學(xué)研制的AGRS-Ⅲ型64通路微生物發(fā)酵微量產(chǎn)氣全自動記錄裝置與軟件系統(tǒng)作為體外發(fā)酵裝置。用天平稱取約0.5 g發(fā)酵底物于150 mL厭氧發(fā)酵瓶中。由于油具有黏附性且添加水平很少，若直接稱取相應(yīng)質(zhì)量的硬核油易導(dǎo)致較大的試驗誤差，故將要添加的比例換算成體積并用移液槍吸取，加入發(fā)酵瓶中。每個裝有50 mL緩沖液的發(fā)酵瓶中迅速加入經(jīng)過濾的瘤胃液25 mL，并持續(xù)向瓶中通入5 s CO2，蓋好瓶塞，將每個發(fā)酵瓶與產(chǎn)氣裝置的傳感器相連接，于39 ℃下持續(xù)發(fā)酵24 h。

1.4 樣品收集及制備

培養(yǎng)24 h后終止發(fā)酵，立即從發(fā)酵瓶中收集發(fā)酵液。用2個10 mL離心管中各收集5 mL發(fā)酵液后分別加入1 mL偏磷酸溶液，用于測定VFA及NH3-N濃度。另取2個10 mL離心管各收集8 mL發(fā)酵液，150×g離心15 min，取上清，用于測定MCP濃度及脂肪酸含量。所有發(fā)酵液樣品于-20 ℃下冷凍保存。充分混勻剩余發(fā)酵液的液相和固相，4 000×g離心10 min，棄上清，收集全部固相殘渣，用于測定DMD、NDFD及ADFD。

要突破鄉(xiāng)村成校和社區(qū)文化禮堂的整合瓶頸，讓成人學(xué)校更好的完成使命，同時讓農(nóng)村文化禮堂真正“活起來”“用起來”，興盛社區(qū)文化，需要做好以下幾方面的文章。

1.5 樣品分析及計算

發(fā)酵結(jié)束后立即用Seven GoTM型精密pH計測定發(fā)酵液的pH；發(fā)酵液中NH3-N濃度采用靛酚比色法[11]測定，取已添加偏磷酸的發(fā)酵液5 mL，3 000×g離心10 min，取上清液進(jìn)行前處理，用氯化銨作為標(biāo)準(zhǔn)品配制標(biāo)準(zhǔn)液，使用酶標(biāo)儀(Thermo Electron Varioskan Flash，美國Thermo)在700 nm條件下測定標(biāo)準(zhǔn)液及發(fā)酵液的吸光度值，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和吸光度值計算出NH3-N濃度；MCP濃度采用嘌呤法[12]測定，利用酵母RNA制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，取8 mL發(fā)酵液在20 000×g條件下離心20 min，進(jìn)行前處理后利用酶標(biāo)儀在260 nm波長下進(jìn)行比色，根據(jù)吸光度值和標(biāo)準(zhǔn)曲線計算RNA測定值，按以下公式計算MCP濃度：

微生物蛋白氮(mg/mL)=RNA測定值×

RNA含氮量(17.83%)/細(xì)菌氮中

RNA含氮量(10%)×稀釋倍數(shù)；

MCP(mg/mL)=微生物蛋白氮(mg/mL)×

6.25×發(fā)酵液體積。

VFA濃度及脂肪酸含量利用氣相色譜法測定，取發(fā)酵液2 mL，150 000×g離心10 min，用微量注射器取上清液1 μL，注入氣相色譜儀(Agilent 6890N GC system,美國Agilent)，得到氣相色譜圖，采用峰面積外標(biāo)法計算發(fā)酵液中VFA及脂肪酸含量。底物和發(fā)酵殘渣中DM、NDF及ADF含量分別參照GB 6435—86、GB/T 20806—2006及NY/T 1459—2007測定，再根據(jù)發(fā)酵前后的質(zhì)量關(guān)系計算其相應(yīng)的降解率。

根據(jù)以下動態(tài)發(fā)酵模型，采用SAS 9.3軟件非線性(non-linear)方法計算動態(tài)發(fā)酵參數(shù)。

GPt=B×(1-e-ct)。

式中：GP為t時間點0.5 g發(fā)酵底物的產(chǎn)氣量(mL)；B為0.5 g發(fā)酵底物24 h理論最大產(chǎn)氣量(mL)；c為產(chǎn)氣速率(h-1)；t為體外發(fā)酵時間(h)。

1.6 統(tǒng)計分析

采用SAS 9.3軟件MIXED模塊進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)檢驗，統(tǒng)計模型中包含發(fā)酵瓶的隨機(jī)因素和試驗處理的固定因素。對處理用多項式矩陣(polynomial contrast)檢驗了線性、二次區(qū)間的顯著性。變量的統(tǒng)計結(jié)果均以最小二乘平均值形式列表，顯著水平為P<0.05，有顯著趨勢水平為0.05≤P<0.10。

2 結(jié)果與分析

飼糧中添加不同水平的硬核油對瘤胃體外發(fā)酵24 h產(chǎn)氣參數(shù)的影響見表3。產(chǎn)氣量、理論最大產(chǎn)氣量及產(chǎn)氣速率均未受硬核油添加的影響(P>0.05)，且不呈線性和二次變化(P>0.05)。1%、2%及3%組產(chǎn)氣量及理論最大產(chǎn)氣量有高于對照組及4%組的趨勢(0.05≤P<0.10)。

表3 硬核油對瘤胃體外發(fā)酵24 h產(chǎn)氣參數(shù)的影響

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同字母表示差異顯著(P<0.05)，相同或無字母表示差異不顯著(P>0.05)。下表同。

In the same row, values with different letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below．

2.2 硬核油對瘤胃體外發(fā)酵24 h發(fā)酵參數(shù)的影響

飼糧中添加不同水平的硬核油對瘤胃體外發(fā)酵24 h發(fā)酵參數(shù)的影響見表4。發(fā)酵液的pH未受硬核油添加的影響(P>0.05)；NH3-N濃度隨硬核油添加水平的增加呈二次曲線升高(P=0.044)；TVFA(P<0.001)、乙酸(P<0.001)、丙酸(P=0.047)及丁酸濃度(P=0.017)隨硬核油添加水平的增加均呈二次曲線升高，各試驗組TVFA、乙酸及丙酸濃度均顯著高于對照組(P<0.05)，且1%、2%及3%組TVFA、乙酸濃度均顯著高于4%組(P<0.05)；MCP濃度、DMD、NDFD及ADFD均未受硬核油添加的影響(P>0.05)。

表4 硬核油對瘤胃體外發(fā)酵24 h發(fā)酵參數(shù)的影響

2.3 硬核油對瘤胃體外發(fā)酵24 h脂肪酸含量的影響

飼糧中添加不同水平的硬核油對瘤胃體外發(fā)酵24 h脂肪酸含量的影響見表5。中長鏈飽和脂肪酸C12∶0～C17∶0及長鏈飽和脂肪酸，包括C20∶0、C22∶0及C24∶0的含量未受硬核油添加的影響(P>0.05)。飽和脂肪酸含量隨硬核油添加水平的增加呈線性(P=0.008)及二次(P=0.028)降低，3%、4%組顯著低于對照組及1%、2%組(P<0.05)；其中長鏈飽和脂肪酸C18∶0的含量呈線性降低(P=0.030)，3%組顯著低于其他各組(P<0.05)。不飽和脂肪酸含量隨硬核油添加水平的增加呈線性(P=0.008)及二次(P=0.028)增加，3%組顯著高于其他各組(P<0.05)；其中t9-C18∶1含量呈線性(P=0.002)、t11-C18∶1含量呈二次(P<0.001)、c9-C18∶1含量呈線性(P=0.028)和二次(P=0.005)升高，且t9-C18∶1及c9-C18∶1含量均在3%添加水平下出現(xiàn)極大值。多不飽和脂肪酸C18∶2的含量未受硬核油添加的影響(P>0.05)。

表5 硬核油對瘤胃體外發(fā)酵24 h脂肪酸含量的影響

3 討 論

3.1 硬核油對瘤胃體外發(fā)酵24 h產(chǎn)氣參數(shù)的影響

本研究中，添加不同水平的硬核油對瘤胃體外發(fā)酵24 h產(chǎn)氣量、理論最大產(chǎn)氣量及產(chǎn)氣速率均無顯著影響，當(dāng)添加水平分別為1%、2%及3%時，24 h產(chǎn)氣量、理論最大產(chǎn)氣量在數(shù)值上逐漸升高，且均高于對照組，而添加水平增加到4%時，則出現(xiàn)了降低的趨勢且低于對照組。產(chǎn)氣量作為綜合反映飼糧可降解程度的指標(biāo)，不僅能夠表現(xiàn)瘤胃微生物活動的總體情況，還可以反映飼糧可消化性的大小。瘤胃微生物的活性越強(qiáng)，飼糧可降解程度越高，產(chǎn)氣量就越高。本研究中產(chǎn)氣量的變化與DMD的變化體現(xiàn)了這種相關(guān)性。這種變化趨勢可能與添加硬核油影響瘤胃微生物的活性有關(guān)。

3.2 硬核油對瘤胃體外發(fā)酵24 h發(fā)酵參數(shù)的影響

瘤胃液pH是反映瘤胃發(fā)酵程度及模式的重要指標(biāo)[13]，受唾液分泌及VFA組成等多種因素的影響[14]，一般情況下，瘤胃液pH為6.0～7.0。本研究中，所有添加水平下的pH均在正常范圍內(nèi)且沒有顯著差異，表明本研究中的硬核油添加水平未引起發(fā)酵液pH失衡。瘤胃液NH3-N濃度是反映瘤胃氮代謝的重要指標(biāo)，主要受瘤胃微生物對飼糧粗蛋白質(zhì)的降解情況及MCP合成的綜合影響[15]，且其濃度的最適范圍為8.5～30.0 mg/dL。本研究中，對照組和試驗組的NH3-N濃度均超過該范圍，可能是由于體外培養(yǎng)體系不能真正模擬活體瘤胃發(fā)酵，不具備吸收和外排的功能，導(dǎo)致發(fā)酵產(chǎn)生的一部分NH3-N直接溶于發(fā)酵液中，從而使得NH3-N濃度高于正常值[16]。隨硬核油添加水平的增加，NH3-N濃度呈二次曲線變化，這可能是由于添加脂肪為瘤胃細(xì)菌提供了一定的能量而導(dǎo)致其活性增強(qiáng)[17]，從而提高了其對粗蛋白質(zhì)等成分的降解能力。然而White等[18]及?rskov等[19]的研究指出，飼糧中添加過多的脂肪會抑制瘤胃微生物的代謝活力；且有研究表明，這種抑制作用與脂肪酸的不飽和度以及含量呈正相關(guān)[17]。硬核油含有較高的C18∶2(53.42%)，可能當(dāng)硬核油添加水平達(dá)到4%時，對瘤胃微生物起到了抑制作用。以上原因可能導(dǎo)致了隨著硬核油添加水平的增加，NH3-N濃度呈現(xiàn)先升高后降低的變化趨勢。但在此基礎(chǔ)上MCP的濃度卻沒有發(fā)生顯著變化，可能是因為在原有NH3-N濃度的基礎(chǔ)上MCP的合成可能已達(dá)到飽和，因而MCP的濃度沒有發(fā)生顯著變化。

VFA是飼糧中碳水化合物在瘤胃中發(fā)酵的主要產(chǎn)物，是反芻動物能量的主要來源，其濃度和組成反映了瘤胃的消化代謝情況[4]。飼糧中添加植物油對瘤胃發(fā)酵產(chǎn)生VFA濃度的影響比較復(fù)雜，與植物油的種類和添加水平等有關(guān)。Clinquart等[20]研究指出，當(dāng)飼糧中的脂肪添加水平低于3.3%(DM基礎(chǔ))時，瘤胃發(fā)酵產(chǎn)生的VFA的濃度會增加，但當(dāng)添加水平高于5.0%(DM基礎(chǔ))時將會降低VFA的濃度。本研究中，硬核油的添加水平低于3%時，VFA的濃度增加，當(dāng)添加水平增至4%時，其濃度有降低的趨勢，與上述報道的結(jié)果基本一致。有研究表明，飼糧中添加植物油會降低乙酸和丁酸的濃度而增加丙酸的濃度，使乙酸/丙酸下降。Uedal等[21]向不同精粗比的飼糧中添加3%(DM基礎(chǔ))的亞麻油，結(jié)果表明，乙酸和丁酸的濃度顯著降低，而丙酸的濃度顯著升高；Jenkins[22]研究表明，在閹羊飼糧中添加10%的豆油可使乙酸濃度降低，丙酸濃度升高。本研究中，丙酸的濃度顯著升高，與上述報道一致，一般認(rèn)為丙酸濃度升高是由于補(bǔ)充的脂肪經(jīng)脂肪酶分解為長鏈脂肪酸和甘油，甘油進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為丙酸[23]。本研究中乙酸和丁酸濃度的變化與上述報道不一致，這可能與不同植物油含有不同含量的不飽和脂肪酸有關(guān)。

3.3 硬核油對瘤胃體外發(fā)酵24 h脂肪酸含量的影響

瘤胃是一個高度還原的環(huán)境，飼糧中的脂肪在被瘤胃微生物降解為甘油和脂肪酸的同時，其中的不飽和脂肪酸(C18∶1、C18∶2及C18∶3)會發(fā)生生物氫化反應(yīng)，且氫化過程會生成一些中間產(chǎn)物如C18∶1及共軛亞油酸(CLA)等[24]。吳端欽等[25]利用體外產(chǎn)氣法研究發(fā)現(xiàn)，向飼糧中添加底物DM 5%及10%的亞麻籽油提高了發(fā)酵液中CLA及其他不飽和脂肪酸的含量。Gunal等[24]利用批次培養(yǎng)法研究發(fā)現(xiàn)，向發(fā)酵液中添加125、250及500 mg/L的桉樹油提高了不飽和脂肪酸的含量，降低了氫化產(chǎn)物C18∶0的含量。本研究中，隨硬核油添加水平的增加，所有單不飽和脂肪酸(c9-C18∶1、t11-C18∶1及t9-C18∶1)的含量呈二次曲線升高，可能因為硬核油含有大量的不飽和脂肪酸，不飽和脂肪酸氫化產(chǎn)生c9-C18∶1、t11-C18∶1及t9-C18∶1等中間產(chǎn)物，從而導(dǎo)致它們的含量增加。楊舒黎[17]在奶牛飼糧中分別添加4%豆油和胡麻油，并利用熒光定量PCR技術(shù)測定其對瘤胃微生物氫化菌的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)添加植物油顯著降低了溶纖維丁酸弧菌(B.fibrisolven)及瘤胃白色球菌(R.albus)的數(shù)量。本研究中c9-C18∶1及t9-C18∶1的含量在3%添加水平時出現(xiàn)極大值，當(dāng)添加水平增至4%時其含量有所下降，可能是過高的脂肪減少了氫化菌的數(shù)量，導(dǎo)致不飽和脂肪酸的氫化程度降低，氫化的中間產(chǎn)物減少，從而c9-C18∶1、t11-C18∶1及t9-C18∶1的含量相應(yīng)降低。C18∶0的含量隨硬核油添加水平的增加呈線性降低，可能是由于飼糧中較高含量的C18∶2抑制了t11-C18∶1向C18∶0的氫化過程[26]，導(dǎo)致含量降低。

4 結(jié) 論

① 添加適當(dāng)水平的硬核油可提高瘤胃體外發(fā)酵24 h瘤胃液中NH3-N、TVFA、乙酸、丙酸、丁酸的濃度及不飽和脂肪酸c9-C18∶1、t11-C18∶1及t9-C18∶1的含量，降低飽和脂肪酸C18∶0的含量。

② 在本試驗條件下，硬核油的適宜添加水平為3%。

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*Corresponding author, professor, E-mail： burdenpan@126.com

(責(zé)任編輯 王智航)

Effects ofScleropyrumwallichianumOil oninVitroRumen Fermentation Characteristics and Fatty Acid Composition

SUN Lingling1MA Lu1BU Dengpan1,2,3*XU Jianchu4LIU Shijie5HE Meiying6

(1.StateKeyLaboratoryofAnimalNutrition,InstituteofAnimalScience,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Beijing100193,China; 2.CAAS-ICRAFJointLabonAgroforestryandSustainableAnimalHusbandry,Beijing100193,China; 3.HunanCo-InnovationCenterofAnimalProductionSafety,Changsha410128,China; 4.KunmingInstituteofBotany,ChineseAcademyofSciences,Kunming650201,China; 5.ChinaFeedIndustryAssociation,Beijing100125,China; 6.YunnanInstituteofTropicalCrops,Jinghong666100,China)

In order to find the optimal supplemental level ofScleropyrumwallichianumoil, the effects of adding 1%, 2%, 3% or 4% (dry matter basis) ofScleropyrumwallichianumoil in diet on 24 h rumen fermentation parameters, gas production parameters and composition of fatty acids were investigated usinginvitrogas production method. The results showed as follows: 1) there were no significant effects of addingScleropyrumwallichianumoil in diet on 24 h gas production, theoretical maximum gas production and the rate of gas production (P>0.05). 2) The concentrations of ammonia nitrogen (P=0.044)， total volatile fatty acid (P<0.001), acetate (P<0.001), propionate (P=0.047) and butyrate (P=0.017) quadratically increased as the level ofScleropyrumwallichianumoil increased, besides, the concentrations of total volatile fatty acid and acetate of 1%, 2% and 3% groups were significantly higher than those in control group and 4% group (P<0.05); there were no significant effects of addingScleropyrumwallichianumoil on pH, microbe protein concentration, dry matter degradation rate, neutral detergent fiber degradation rate and acid detergent fiber degradation rate (P>0.05). 3) The content of saturated fatty acid was linearly (P=0.008) and quadratically decreased(P=0.028) as the level ofScleropyrumwallichianumoil increased, and C18∶0 content was linearly decreased (P=0.030), too; the content of unsaturated fatty acid was linearly (P=0.008) and quadratically increased (P=0.028) as the level ofScleropyrumwallichianumoil increased, t9-C18∶1 content was linearly (P=0.002),t11-C18∶1 content was quadratically (P<0.001) andc9-C18∶1 was linearly (P=0.028) and quadratically increased (P=0.005), andt9-C18∶1andc9-C18∶1 reached maximum values under the adding level of 3%. Under the conditions of the present study, the levels of 1%, 2% and 3%Scleropyrumwallichianumoil can increase the contents of unsaturated fatty acids and the concentrations of volatile fatty acids, and the level of 3% has the best effect.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2017, 29(3)：1074-1081]

Scleropyrumwallichianumoil; gas production parameters; fermentation parameters; composition of fatty acids

10.3969/j.issn.1006-267x.2017.03.042

2016-09-01

“十二五”科技支撐(2012BAD12B02-5)；農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管(飼料)項目“反芻動物飼料安全評價”；中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新工程(ASTIP-IAS07)

孫玲玲(1993—)，女，黑龍江哈爾濱人，碩士研究生，研究方向為反芻動物營養(yǎng)與飼料科學(xué)。E-mail： sunlingling114289@163.com

*通信作者：卜登攀，研究員，博士生導(dǎo)師，E-mail： burdenpan@126.com

S816.7

A

1006-267X(2017)03-1074-08