過(guò)敏性紫癜患者血清IL-34水平的變化及意義

王 娟 夏海龍

(安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院血液科,合肥230022)

過(guò)敏性紫癜患者血清IL-34水平的變化及意義

王 娟 夏海龍

(安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院血液科,合肥230022)

目的：探討過(guò)敏性紫癜(Henoch-Schoenlein purpura,HSP)患者急性期血清中IL-34的表達(dá)及意義。方法：選取HSP患者38例，同期匹配的健康人21例作為對(duì)照組，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)及化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清中IL-34、IL-6、TNF-α表達(dá)水平；采用相關(guān)分析法分析IL-34與患者臨床資料指標(biāo)的關(guān)系以及與IL-6、TNF-α表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果：HSP患者急性期血清IL-34、IL-6、TNF-α水平均較正常對(duì)照組增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)；血清IL-34和超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、IL-6水平之間呈正相關(guān)(分別是r=0.453,P=0.004；r=0.469,P=0.003)。結(jié)論：IL-34可能參與過(guò)敏性紫癜的致病過(guò)程；可能與過(guò)敏性紫癜促炎因子的異常表達(dá)有關(guān)，促進(jìn)血管炎癥的發(fā)生發(fā)展。

紫癜，過(guò)敏性;白細(xì)胞介素-34;細(xì)胞因子類(lèi)

過(guò)敏性紫癜(Henoch-Schoenlein purpura,HSP)是一種較常見(jiàn)的以小血管壞死性炎癥為主要特征的疾病，常累及皮膚、胃腸道、關(guān)節(jié)、腎臟，病程可呈自限性，易反復(fù)發(fā)作[1]。近年來(lái)發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，確切病因及發(fā)病機(jī)制仍不清楚[2]。Yang等[3]研究提示HSP患者急性期的血清可刺激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分泌合成IL-8、TNF-α等炎癥因子，另有研究發(fā)現(xiàn)HSP患者急性期IL-6、TNF-α、IL-17等促炎因子及趨化因子表達(dá)異常[4,5]；以上提示細(xì)胞因子和白介素炎癥介質(zhì)在HSP發(fā)病中發(fā)揮重要作用。

IL-34是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子，其生物學(xué)功能主要是刺激單核細(xì)胞-巨噬細(xì)胞的增殖與分化、誘導(dǎo)多種細(xì)胞因子和趨化因子生成和釋放，具有促炎、促進(jìn)破骨細(xì)胞形成的作用[6,7]；同時(shí)還具有誘導(dǎo)免疫耐受的潛能[8,9]?？梢?jiàn)，IL-34是一種多功能性細(xì)胞因子。IL-34是否參與HSP血管損傷過(guò)程、在HSP疾病發(fā)病中的作用以及與其他炎癥因子在HSP發(fā)病中的相互關(guān)系，目前尚無(wú)定論。本研究通過(guò)檢測(cè)HSP患者急性期血清IL-34、IL-6、TNF-α水平，并分析IL-34與患者臨床資料指標(biāo)、IL-6、TNF-α的關(guān)系，旨在探討IL-34在HSP發(fā)病中的作用。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選取2015年11月至2016年3月我院兒科及血液科收治的過(guò)敏性紫癜急性期患者38例(包括單純型16例、腹型7例、關(guān)節(jié)型4例、腎型11例)，其中男18例，女20例，年齡4～19歲，平均(10.66±4.04)歲；所有病例組均符合2006 年歐洲抗風(fēng)濕聯(lián)盟及美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)共同制定的HSP診斷標(biāo)準(zhǔn)，急性期為發(fā)病2 周內(nèi)未使用糖皮質(zhì)激素、抗組胺藥及其他免疫抑制劑。隨機(jī)選擇同期在本院健康體檢者(均排除過(guò)敏及自身免疫性疾病、近期感染病史)21例作為對(duì)照組，其中男11例，女10例，年齡5～19歲，平均(10.33±3.86)歲。納入的受試對(duì)象在性別、年齡一般資料方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.136，P=0.712；F=0.058，P= 0.765)，具有可比性。本研究獲得本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有入選實(shí)驗(yàn)對(duì)象及家屬均已簽訂知情同意書(shū)。

1.2 標(biāo)本采集和實(shí)驗(yàn)方法 采集受試對(duì)象晨起空腹靜脈血5 ml,其中3 ml立刻置枸櫞酸鈉抗凝試管中混勻，以3 000 r/min，離心15 min，分離后收集血漿，于EP管分裝后置于-80℃冰箱待檢；另2 ml置于普通生化管。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)定血漿IL-34、TNF-α表達(dá)水平，ELISA試劑盒購(gòu)于武漢Elabscience公司，操作步驟嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。血漿IL-6水平檢測(cè)采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)，試劑盒由德國(guó)西門(mén)子公司提供，血清hs-CRP水平檢測(cè)采用顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁法，試劑盒由德國(guó)德賽公司提供。血清IgA、IgG、IgE、IgM水平檢測(cè)均采用免疫散射比濁法測(cè)定，試劑盒由德國(guó)羅氏公司提供。檢測(cè)儀器為羅氏Modular全自動(dòng)化生化儀。

2 結(jié)果

2.1 IL-34、TNF-α、IL-6的水平測(cè)定結(jié)果及比較 IL-34 、TNF-α、IL-6三種細(xì)胞因子在過(guò)敏性紫癜患者急性期血清中表達(dá)較正常對(duì)照組顯著增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)見(jiàn)表1；同時(shí)，按照臨床表現(xiàn)將HSP病例組進(jìn)行分組比較，發(fā)現(xiàn)不同組間IL-34水平的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.105,表中未列出)。

2.2 HSP患者急性期IL-34水平和臨床各指標(biāo)相關(guān)性分析 將HSP患者急性期血清IL-34水平和臨床病例資料進(jìn)行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)IL-34和炎癥參數(shù)超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)存在顯著的相關(guān)性(r=0.453,P=0.004)，與血沉ESR未見(jiàn)明顯相關(guān)性見(jiàn)圖1、表2；與年齡、補(bǔ)體及4種免疫球蛋白未見(jiàn)明顯相關(guān)性(見(jiàn)表2)；同時(shí)將HSP病例組按照性別將其分成2組，2組患者外周血清IL-34表達(dá)水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.231，表中未列出)。

2.3 HSP患者急性期IL-34水平與TNF-α、IL-6相關(guān)性分析 HSP患者急性期血清IL-34水平與TNF-α、IL-6相關(guān)性分析，我們發(fā)現(xiàn)IL-34與IL-6表達(dá)水平具有一定的相關(guān)性(r=0.469,P=0.003)，見(jiàn)圖1與TNF-α水平均無(wú)顯著相關(guān)性(r=0.123，P>0.05)未列出。

圖1 IL-34表達(dá)水平與hs-CRP、IL-6的相關(guān)性Fig.1 Correlation between expression level of IL-34 and hs-CRP,IL-6 in acute HSP

表1 HSP病例組和對(duì)照組血清中IL-34、IL-6、TNF-α表達(dá)水平的比較

Tab.1 Detection of serum levels of IL-34,IL-6 and TNF-α in patients with acute HSP and in healthy controls

GroupsnIL-34(pg/ml)IL-6(pg/ml)TNF-α(pg/ml)HSPgroup38174.96(84.01-416.70)1)16.70(7.93-23.35)1)248.84(157.32-360.25)1)Controlgroup2159.11(42.79-104.45)3.41(3.11-5.54)103.76(60.95-161.15)Zvalue-4.195-5.763-2.713Pvalue<0.001<0.0010.007

Note：1)vs control group.

表2 HSP病例組中IL-34表達(dá)與臨床病例資料的相關(guān)性

Tab.2 Correlation analysis for serum IL-34 and clinical data in patients with acute HSP

CharacteristicValueCorrelationwithIL-34Correlationcoefficient(r)PAge10.66±4.04-0.0800.635Gender(F/M)20/18--hs-CRP(mg/L)3.31(1.33-7.18)0.4530.004ESR(mm/h)14(10-25)0.2550.209C31.26(1.12-1.48)0.0310.891C40.24(0.21-0.33)-0.1000.649IgA(g/L)3.28±0.230.1150.553IgM(g/L)1.49±0.49-0.2930.138IgE(mU/ml)18(8-221)-0.2460.216IgG(g/L)10.32±2.250.0860.668

Note：C3 means complement 3;C4 means complement 4.

3 討論

研究表明細(xì)胞因子異常表達(dá)、補(bǔ)體異常激活、IgA1分子異常糖基化、遺傳易感性因素、外界環(huán)境因素等參與了HSP血管炎的發(fā)病過(guò)程，多種細(xì)胞因子表達(dá)異常在HSP血管壁損傷機(jī)制中起重要作用[10]。

IL-34是一種新型的細(xì)胞因子，由241個(gè)氨基酸組成二聚體蛋白，巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、神經(jīng)、肝臟、上皮細(xì)胞及Treg細(xì)胞在特定的條件下均可分泌IL-34。在心、肝、腦、脾等多種組織中均可表達(dá)，尤其在脾臟中呈高表達(dá)[6,9]。IL-34與巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)相似，通過(guò)與集落刺激因子1受體(CSF-1R)結(jié)合，使細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶-1及激酶-2磷酸化，刺激單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)增殖與分化，但二者無(wú)氨基酸序列同源性，信號(hào)激活途徑和生物活性也不盡相同[11]。近年來(lái)研究表明IL-34和多種自身免疫性疾病以及炎癥性疾病密切相關(guān)，如類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、潰瘍性結(jié)腸炎、干燥綜合征、冠狀動(dòng)脈炎等[12-15]。尤其在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中研究較為深入。Tian等[12]研究表明在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清IL-34的表達(dá)水平明顯增高；且和類(lèi)風(fēng)濕因子以及自身抗體—抗環(huán)狀瓜氨酸(CCP)抗體表達(dá)量呈正相關(guān)，提示IL-34可能類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中自身抗體生成有關(guān)。過(guò)敏性紫癜是常見(jiàn)的微血管炎之一，本研究結(jié)果顯示HSP患者急性期血清IL-34水平明顯高于健康對(duì)照組(P<0.001)，故推測(cè)IL-34可能參與過(guò)敏性紫癜的致病過(guò)程。我們推測(cè)IL-34在HSP中可能通過(guò)誘導(dǎo)單核巨噬細(xì)胞增殖與分化；同時(shí)促進(jìn)多種細(xì)胞因子如IL-6、IL-8和單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1)等的生成和分泌[16]，參與HSP微血管炎癥反應(yīng)的發(fā)生發(fā)展。值得注意的是，既往研究表明在HSP急性期調(diào)節(jié)性CD4+CD25+T 細(xì)胞亞群(Treg細(xì)胞)比例明顯降低[5]。IL-34具有誘導(dǎo)人巨噬細(xì)胞向調(diào)節(jié)T細(xì)胞分化的潛能[9]，IL-34是否與HSP急性期CD4+T細(xì)胞亞群失調(diào)有關(guān)，還有待于進(jìn)一步研究。

促炎性細(xì)胞因子TNF-α和IL-6，在機(jī)體炎癥與免疫應(yīng)答反應(yīng)發(fā)揮重要的作用。既往有研究表明在HSP患者皮膚病損處可見(jiàn)TNF-α、IL-6均呈細(xì)顆粒狀浸潤(rùn)[17]；HSP患者急性期血清中TNF-α、IL-6水平較異常增高的現(xiàn)象[18]，同本研究結(jié)果一致?？梢?jiàn)，二者參與過(guò)敏性紫癜中血管炎的病理?yè)p傷過(guò)程已明確。TNF-α可促進(jìn)IL-1、TGF-β等炎癥因子的生成,促進(jìn)炎癥反應(yīng)，加重組織損傷；可誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞間黏附分子表達(dá)上調(diào),誘導(dǎo)及加重炎癥反應(yīng)；同時(shí)結(jié)合Tian等[12]研究表明類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎行TNF-α抑制劑治療后IL-34表達(dá)水平明顯降低；Eda等[19]研究表明在破骨細(xì)胞中TNF-α通過(guò)JNK和NF-κB信號(hào)通路促進(jìn)IL-34 的表達(dá)，推測(cè)在HSP中IL-34可能是作為T(mén)NF-α的下游效應(yīng)器介導(dǎo)組織炎癥的發(fā)生與發(fā)展。IL-6可促進(jìn)B細(xì)胞增殖分化和分泌抗體，形成免疫復(fù)合物沉積于血管壁，激活補(bǔ)體級(jí)聯(lián)反應(yīng)，破壞血管壁的完整性；促進(jìn)IL-17、IL-8等促炎因子的表達(dá)[20]；刺激肝臟合成一種急性時(shí)相蛋白—hs-CRP，參與血管內(nèi)皮損傷及炎癥反應(yīng)[21]。Eda等[16]研究表明IL-34誘導(dǎo)大量細(xì)胞因子IL-6的生成和釋放，參與炎癥反應(yīng)。這一點(diǎn) Franzè等[22]在潰瘍性結(jié)腸炎疾病中也得出相同結(jié)論。結(jié)合本研究結(jié)果提示HSP急性期血清IL-34與hs-CRP、 IL-6水平均呈直線關(guān)系，并呈正相關(guān)(r分別為0.453、 0.469,P均<0.05)，與TNF-α水平未見(jiàn)明顯相關(guān)性(r=0.123，P=0.510)。我們推測(cè)在HSP急性期IL-34可能通過(guò)體內(nèi)復(fù)雜的體液免疫或細(xì)胞免疫網(wǎng)絡(luò)促進(jìn)促炎因子IL-6、hs-CRP表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)HSP血管炎癥的發(fā)生發(fā)展。目前其確切調(diào)控機(jī)制尚不清楚，有待于進(jìn)一步研究。

綜上所述，HSP患者可能存在IL-34、IL-6、TNF-α的高表達(dá)，且IL-34的表達(dá)水平和IL-6、hs-CRP呈正相關(guān)，提示IL-34在HSP免疫應(yīng)答中發(fā)揮促炎的重要作用；可能是促進(jìn)HSP系統(tǒng)性血管炎發(fā)生的關(guān)鍵性細(xì)胞因子。本研究為尋求治療HSP新策略打下良好的基礎(chǔ)，為臨床治療尋找新的突破點(diǎn)。由于本研究樣本量偏小，未能根據(jù)臨床類(lèi)型分組進(jìn)行組間比較以及尚未研究組織中IL-34表達(dá)情況，有待擴(kuò)大樣本量及進(jìn)行相關(guān)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，以進(jìn)一步研究IL-34在HSP發(fā)病機(jī)制中的作用。

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[收稿2016-06-14 修回2016-10-10]

(編輯 張曉舟)

Expression and significance of interleukin-34 level in patients with Henoch-Schoenlein purpura

WANGJuan,XIAHai-Long.

DepartmentofHematology，theFirstAffiliatedHospitalofAnhuiMedicalUniversity,Hefei230022,China

Objective:To investigate the serum level of IL-34 in patients with acute phase Henoch-Schoenlein purpura (HSP) and its potential significance.Methods: 38 HSP patients were recruited,together with 21 healthy volunteers as control.The serum level of IL-34,IL-6 and TNF-α were determined using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) or chemiluminescence.The correlation analysis was performed to explore the correlation of IL-34 with clinical parameters and the serum level of IL-6,TNF-α.Results: The serum levels of IL-34,IL-6 and TNF-α in HSP patients were significantly higher as compared to the control group (P<0.001).The serum level of IL-34 was positively correlated with that of high sensitive C-reactive protein (hs-CRP) and IL-6 (r=0.453,P=0.004 andr=0.469,P=0.003,respectively).Conclusion: IL-34 might be involved in the pathogenesis of HSP,and the potential mechanisms of action is associated with the aberrant expression of pro-inflammatory factors in HSP,which promote the development of inflammation in the vascular system.

Purpura，Henoch-Schoenlein;Interleukin-34;Cytokines

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.03.025

王 娟(1990年-)，女，碩士，主要從事過(guò)敏性紫癜免疫紊亂發(fā)病機(jī)制的研究，E-mail：879997378@qq.com。

及指導(dǎo)教師：夏海龍(1964年-)，男，博士，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，主要從事過(guò)敏性紫癜發(fā)病機(jī)制的研究，E-mail：xhl1999cn@163.com。

R554.6

A

1000-484X(2017)03-0433-04