慢性乙肝患者血清補體C3、C4與肝炎分級程度以及肝纖維化程度的關系研究

郭飛波

(天門市第一人民醫(yī)院檢驗科，天門431700)

慢性乙肝患者血清補體C3、C4與肝炎分級程度以及肝纖維化程度的關系研究

郭飛波

(天門市第一人民醫(yī)院檢驗科，天門431700)

目的：研究血清補體C3及C4水平與慢性乙肝(CHB)患者肝炎分級程度及肝纖維化程度的關系。方法：收集2014年3月～2016年3月期間，我院收治的CHB患者185例作為CHB組，同期體檢健康者60例作為對照組，檢測并比較兩組的血清補體C3、C4水平，并分析C3、C4與CHB肝炎G分級、肝纖維化S分級的關系。結(jié)果：CHB組的血清C3、C4水平顯著低于對照組(t=10.476、9.172，P<0.05)；血清C3、C4水平在不同肝炎活動度之間比較差異顯著(F=4.321、3.495，P<0.05)，在不同肝纖維化分級之間比較差異顯著(F=3.861、4.541，P<0.05)；血清C3、C4水平與肝炎活動度G分級呈顯著負相關性(r=-0.575、-0.542，P<0.05)，與肝纖維化S分級(≥S1)顯著負相關性(r=-0.512、-0.636，P<0.05)。結(jié)論：血清補體C3、C4水平與CHB患者肝炎程度及肝纖維化程度密切相關，可作為CHB患者肝病理學狀態(tài)的輔助預測指標。

慢性乙型肝炎；肝纖維化；肝炎炎癥分級；補體

乙型肝炎病毒(HBV)感染所致肝炎是世界范圍內(nèi)最為常見的肝病類型之一，HBV感染后免疫逃逸，導致HBV持續(xù)存在而發(fā)生肝炎慢性化，還可進一步誘發(fā)肝硬化、肝衰竭甚至肝癌等，嚴重威脅患者的健康[1]。既往主要依靠肝組織病理學檢查評價CHB患者的肝炎活動度及肝纖維化程度，但因肝活檢創(chuàng)傷較大，且不便重復檢查，臨床應用具有一定的局限性。近年來，越來越多的學者致力于CHB肝炎活動度與肝纖維化程度的生物學標志物研究，發(fā)現(xiàn)血清補體C3、C4在不同肝損傷階段具有特征性變化，可能對CHB病理學狀態(tài)評估具有指導意義[2]。本研究檢測分析了185例CHB患者不同肝炎分級與肝纖維化程度的血清補體C3、C4水平變化，旨在評估血清補體C3及C4檢測對CHB患者肝炎分級程度及肝纖維化程度的預測及評估價值，為臨床評價肝組織病理學狀態(tài)提供無創(chuàng)性診斷指標。

1 資料與方法

1.1 資料 研究對象為2014年3月～2016年3月期間我院收治的CHB患者185例為CHB組，同期體檢健康者60例對照組。CHB組中，男131例，女54例，年齡20～68歲，平均(40.32±5.43)歲。對照組中，男43例，女17例，年齡20～70歲，平均(37.89±4.98)歲。兩組年齡、性別構(gòu)成等經(jīng)比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 病例選擇

1.2.1.1 納入標準 CHB組符合《慢性乙型肝炎防治指南》[3]中診斷標準；血清檢查顯示乙肝表面抗原(HBsAg)呈陽性，且持續(xù)時間>6個月；經(jīng)超聲或CT檢查提示肝組織炎癥性病變，經(jīng)血生化檢查顯示血清白蛋白(ALB)降低、總膽紅素(TBIL)升高、凝血酶原時間(PT)延長等；患者自愿參與本次研究，病例資料完整；具有完整的肝炎活動度評估與肝纖維化分級資料。

1.2.1.2 排除標準 甲型及丙型等其他類型肝炎病毒感染者；藥物性肝炎、酒精性肝炎、自身免疫性肝炎、脂肪肝以及肝癌患者；合并嚴重心肺功能不全、腎臟及血液系統(tǒng)疾病、大量腹腔內(nèi)腹水、肝前腹水及過度肥胖者；妊娠期、哺乳期女性。

1.2.2 檢查方法

1.2.2.1 病理學檢查 CHB組患者在彩色多普勒超聲引導下實施1 s快速經(jīng)皮肝穿刺。采集≥1.5 cm長肝組織，標本包含至少3個匯管區(qū)。常規(guī)以10%甲醛液進行標本固定，石蠟包埋并連續(xù)切片，以HE以及網(wǎng)織纖維染色處理。由經(jīng)驗豐富的高年資病理學醫(yī)師1名獨立完成標本觀察分析。參照《病毒性肝炎防治方案》[4]對肝炎活動度與肝纖維化程度進行分級，肝炎活動度包括G1-G4級，肝纖維化程度包括S0-S4級。

1.2.2.2 血清補體檢測 所有受試者均在隔夜空腹>8 h后采集于次日清晨8:00～9:00采集空腹肘靜脈血5 ml，3 000 r/min轉(zhuǎn)速下離心10 min，分離血清，在1 h內(nèi)完成檢測。應用Beckman Coulter公司生產(chǎn)的Immage 800型免疫化學系統(tǒng)及其配套試劑，采用免疫比濁法進行血清補體C3、C4檢測，正常參考值范圍：C3為0.79～1.52 g/L，C4為0.16～0.38 g/L。

2 結(jié)果

2.1 CHB組與對照組的血清C3、C4水平比較 CHB組的血清C3、C4水平均較對照組顯著降低(P<0.05)，見表1。

2.2 不同肝炎分級的血清C3、C4水平比較 不同肝炎分級的C3、C4水平比較差異顯著，且隨著分級升高呈現(xiàn)顯著降低趨勢(P<0.05)。C3與C4在相鄰G分級之間比較，C3在G1與G2、G2與G3、G3與G4之間比較差異有統(tǒng)計學意義(t=2.057、2.330、2.682，P=0.042、0.021、0.010<0.05)，C4在G1與G2、G2與G3之間比較差異有統(tǒng)計學意義(t=4.334、3.587，P=0.000、0.000<0.05)，但在G3與G4之間比較差異無統(tǒng)計學意義(t=1.682，P=0.098>0.05)。見表2。

2.3 不同肝纖維化程度血清C3、C4水平比較 不同肝纖維化程度血清C3、C4水平比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。C3與C4在相鄰G分級之間比較，C3在S0與S1、S1與S2、S0與S2之間比較差異無統(tǒng)計學意義(t=1.679、0.756、1.179，P=0.098、0.470、0.243)，在S1與S3、S1與S4之間比較差異有統(tǒng)計學意義(t=2.705、3.369，P=0.008、0.001>0.05)；C4在S1與S2之間比較差異無統(tǒng)計學意義(t=0.606，P=0.546>0.05)，在S0與S1、S0與S2、S1與S3、S4與S3之間比較差異有統(tǒng)計學意義(t=3.130、3.427、4.663、6.783，P=0.027、0.001、0.000、0.000<0.05)。見表3。

2.4 血清C3、C4與肝炎分級及肝纖維化程度的相關性 C3、C4與肝炎G分級和肝纖維化分級呈顯著相關性(P<0.05)，見表4。

GroupsnC3C4CHBgroup1850.87±0.150.18±0.05Controlgroup601.12±0.190.26±0.08t10.4769.172P0.0000.000

InflammatorygroupnC3C4G1600.91±0.310.26±0.07G2670.82±0.170.21±0.06G3510.75±0.150.17±0.06G470.59±0.130.13±0.05F4.3213.495P0.0120.017

InflammatorygradingnC3C4S0240.80±0.230.18±0.06S1360.91±0.260.24±0.08S2470.87±0.240.23±0.07S3410.77±0.220.17±0.05S4370.73±0.220.14±0.04F3.8614.541P0.0150.009

表4 血清C3、C4與肝炎分級及肝纖維化程度的相關性

Tab.4 Correlation of serum C3 and C4 with hepatic grading and degree of hepatic fibrosis

ComplementGclassficationrPSclassfication(≥S1)rPC3-0.5750.011-0.5120.017C4-0.5420.015-0.6360.004

3 討論

CHB患者的肝損傷與病毒變異及宿主免疫應答水平密切相關，尤其是與補體系統(tǒng)及細胞免疫狀態(tài)關系密切。臨床研究表明，HBV感染后所致肝炎、肝硬化等并非病毒直接損傷肝細胞所致，而是由于感染HBV后引起機體免疫功能紊亂而致病[2]。因此，免疫功能在CHB的發(fā)生及發(fā)展中具有重要作用，評價免疫功能狀態(tài)對于CHB的防治及病情評估具有重要價值。

補體是一組存在于組織液及血清中的具有酶活性的球蛋白，在機體免疫調(diào)節(jié)、內(nèi)環(huán)境維護及抗病原菌等生理過程中中具有重要作用，同時也具有免疫性病理損傷介導作用。補體系統(tǒng)主要包括30多種膜結(jié)合蛋白及可溶性蛋白，其中，以C3、C4最為重要，因其變化多與補體總水平呈平行狀態(tài)，可直接反映機體補體系統(tǒng)功能狀態(tài)，從而較為客觀、準確地反映機體體液免疫功能[5]。臨床研究表明，人體的免疫因子有超過90%源于肝臟，肝細胞是血液中大部分蛋白質(zhì)的主要合成場所[6]。因此，在發(fā)生CHB后肝細胞損傷，勢必影響補體C3、C4的合成，從而導致血清C3、C4水平降低。同時，HBV持續(xù)感染可引起機體免疫功能紊亂，導致補體系統(tǒng)激活，增加機體的C3、C4消耗量，也可導致血清C3、C4降低[7]。本研究結(jié)果顯示，CHB組的血清補體C3、C4水平均較健康對照組顯著降低(P<0.05)，與既往研究報道一致[8,9]，證實CHB患者具有補體合成紊亂，主要表現(xiàn)為血清C3、C4水平降低。

C3、C4是反應機體體液免疫的敏感指標，同時也是反映肝細胞損傷的主要指標之一，血清C3、C4水平降低多提示體液免疫異常及肝細胞受損[10]。何濤君等[11]研究表明，血清補體C3、C4與CHB嚴重程度及HBV-DNA呈密切相關，C3、C4水平越低，CHB病情越嚴重，HBV-DNA復制活躍性越高。本研究發(fā)現(xiàn)，隨著肝炎分級程度的升高，血清C3、C4水平呈現(xiàn)顯著降低趨勢，C3與C4在相鄰G分級之間比較，C3在G1與G2、G2與G3、G3與G4之間比較差異顯著(P<0.05)，而C4在G1與G2、G2與G3之間比較差異顯著(P<0.05)，且Spearman分析顯示血清C3、C4與肝炎分級均呈顯著負相關性(r=-0.542、-0.575，P<0.05)，C3與G分級的相關性高于C4，這與劉興暉等[12]報道相似，證實血清補體C3、C4降低可能參與了HBV感染的慢性化過程及病理進展。Vasel等[13]研究顯示，CHB肝硬化患者的血清補體C3、C4水平與Child分級呈顯著負相關性，Child分級越高則血清C3、C4水平越低。國外研究報道顯示，在肝硬化發(fā)生前，患者的血清C3、C4水平有輕度升高，發(fā)生肝硬化后顯著降低，而進展至肝癌后呈顯著升高趨勢[14]。由此可見，血清補體C3、C4水平可隨著HBV感染患者肝臟病理變化而波動。本研究中，肝纖維化S1期患者的C3、C4水平最高，而在S0期及S2-S4期均降低，但在S2時降低不明顯，在S3、S4期時降低明顯，可能是由于肝臟具有強大的儲備功能，在發(fā)生肝纖維化后可代償性地生成C3、C4，或肝炎活動可誘導肝細胞合成C3、C4，從而出現(xiàn)短暫性C3、C4水平升高。此外，C4僅在S1與S2中差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，其余分級兩兩比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；而C3僅在S1與S3、S1與S4之間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，相關性分析亦顯示，≥S1與血清C3、C4水平呈顯著負相關性，且C4與S分級的相關性高于C3，認為C4在S分級評估中更具價值。張占卿等[15]研究發(fā)現(xiàn)，CHB患者的血清補體C3、C4水平在肝炎活動度G1和肝纖維化S1期時最高，而此后均隨著分期升高呈降低趨勢，這與本研究基本一致。且其采用Wilks′ λ法逐步判別分析顯示，CHB患者血清補體C3水平≥0.84 g/L時多提示肝炎程度為G1級，而當補體C3水平≤0.65 g/L時多提示G4級肝炎；血清補體C4水平 ≥0.18 g/L時多提示肝纖維化程度為S1期，而當補體C4水平≤0.14 g/L時多提示S4期肝纖維化。本研究中，G1級CHB患者的C3平均為(0.91±0.33) g/L，超過0.84g/L；G4時C3為(0.59±0.15) g/L；S1患者的C4水平(0.24±0.08) g/L，≥0.18 g/L，而S4患者的C4水平(0.14±0.05) g/L，≤0.14 g/L，與上述報道基本吻合。提示HBV感染后在發(fā)生顯著肝炎活動期(G1)及肝纖維化初期(S1～S2)之前有一定程度的升高，而隨著病情進展又將再度降低，C3、C4水平檢測對中、重度肝臟炎癥及肝纖維化具有較大的預測價值。

綜上所述，CHB患者具有血清補體C3、C4異常變化，且隨著肝臟炎癥活動度以及肝纖維化程度的不同而變化，除在肝炎活動期(G1)及肝纖維化初期(S1-S2)之前有一定程度升高外，均隨著病情進展具有顯著降低趨勢，血清C3、C4水平檢測可能對中、重度肝炎、肝纖維化具有較高的預測價值，對病情評估、診治決策及預后判斷有所助益。

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[收稿2016-08-08 修回2016-08-25]

(編輯 許四平)

Research on relationship between serum complement C3,C4 and hepatitis grade level and liver fibrosis degree in patients with chronic hepatitis B

GUOFei-Bo.

DepartmentofClinicalLaboratory,TianmenFirstPeople′sHospital,Tianmen431700,China

Objective:To investigate the relationship between serum complement C3,C4 and hepatitis grade level and liver fibrosis degree in patients with chronic hepatitis B(CHB).Methods: 185 cases of patients with CHB admitted in our hospital from March 2014 to 2016 March were collected as CHB group,60 cases who were considered healthy at the same period as the control group.The serum complement C3,C4 of the two groups were detected and compared,and relationship between serum complement C3,C4 and hepatitis grade level and liver fibrosis degree was analyzed.Results: The serum C3,C4 levels in CHB group were significantly lower than the control group (t=10.476,9.172,P<0.05).The differences of serum C3,C4 levels among different levels of hepatitis activity were significant (F=4.321,3.495,P<0.05),and differences among different levels of hepatic fibrosis grading were significant (F=3.861,4.541,P<0.05).The serum C3,C4 levels were negatively associated with G rating of hepatitis activity(r=-0.575,-0.542,P<0.05),and were negatively associated with S rating (≥S1) of liver fibrosis (r=-0.512,-0.636,P<0.05).Conclusion: The serum complement C3,C4 levels is closely related with hepatitis grade level and liver fibrosis degree in patients with CHB,it can be used as secondary predictors of hepatic pathological status in CHB patients.

Chronic hepatitis B;Liver fibrosis;Hepatic inflammation grade;Complement

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.03.023

郭飛波(1980年-)，男，碩士，主管檢驗師，主要從事病毒免疫分子病毒方面的研究，E-mail：guofeibo@126.com。

R575.1

A

1000-484X(2017)03-0426-04