黃芪總苷對TGF-β1誘導(dǎo)下足細(xì)胞TRPC6表達(dá)的影響①

黃海庭 吳好好 覃幼玲 林 栩 尤燕舞 郭鵬威 湯春榮

(右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腎內(nèi)科，百色533000)

·中醫(yī)中藥與免疫·

黃芪總苷對TGF-β1誘導(dǎo)下足細(xì)胞TRPC6表達(dá)的影響①

黃海庭 吳好好 覃幼玲 林 栩 尤燕舞 郭鵬威 湯春榮

(右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腎內(nèi)科，百色533000)

目的：通過觀察黃芪總苷對TGF-β1誘導(dǎo)足細(xì)胞TRPC6表達(dá)的影響，探討黃芪總苷對足細(xì)胞保護(hù)作用。方法：體外培養(yǎng)小鼠腎小球足細(xì)胞，將成熟的足細(xì)胞分為5組：正常對照組、TGF-β1干預(yù)組、TGF-β1干預(yù)+低劑量黃芪總苷組、TGF-β1干預(yù)+中劑量黃芪總苷組、TGF-β1干預(yù)+高劑量黃芪總苷組，48 h后MTT檢測各組細(xì)胞增殖抑制率，Western blot及RT-PCR檢測TRPC6蛋白及mRNA表達(dá)水平。結(jié)果：TGF-β1干預(yù)使足細(xì)胞足突回縮、甚至消失，抑制足細(xì)胞的增殖(P<0.05),提高TRPC6 mRNA和蛋白表達(dá)(P<0.05)，黃芪總苷能逆轉(zhuǎn)上述變化，對足細(xì)胞具有保護(hù)作用并且存在一定的量效關(guān)系。結(jié)論：TPRC6在TGF-β1干預(yù)下足細(xì)胞損傷作用中起重要作用，黃芪總苷可能通過下調(diào)足細(xì)胞TRPC6的表達(dá)實現(xiàn)對足細(xì)胞的保護(hù)作用。

足細(xì)胞；轉(zhuǎn)化生長因子-β1；TRPC6；黃芪總苷

黃芪總苷(Astragalosides，AST)是黃芪的主要有效成分，以往的體外及動物實驗顯示，黃芪組方或黃芪甲苷對腎病綜合征、糖尿病腎病等具有良好保護(hù)作用，其機(jī)制可能與減少足細(xì)胞凋亡、維持足細(xì)胞裂孔隔膜完整性有關(guān)[1-3]，提示黃芪總苷對足細(xì)胞可能具有保護(hù)作用，但至今未見關(guān)于其對足細(xì)胞損傷保護(hù)作用機(jī)制的相關(guān)研究。

TRPC6是足細(xì)胞裂孔隔膜重要組成成分之一，眾多研究表明TRPC6表達(dá)升高是足細(xì)胞損傷的重要因素。黃芪總苷對足細(xì)胞具有保護(hù)作用，其機(jī)制是否與調(diào)節(jié)TRPC6表達(dá)有關(guān)，至今未見報道。本研究采用TGF-β1誘導(dǎo)足細(xì)胞損傷模型，檢測黃芪總苷干預(yù)后對TGF-β1誘導(dǎo)足細(xì)胞增殖抑制和TRPC6表達(dá)的影響，探討黃芪總苷對足細(xì)胞的可能保護(hù)作用機(jī)制，為尋找足細(xì)胞特異性保護(hù)作用藥物提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 腎小球足細(xì)胞株(MPC5)購于上海復(fù)旦大學(xué)細(xì)胞中心；RNA提取試劑盒(愛思進(jìn) AxyPrep)；RPMI1640培養(yǎng)液(Gibco)、MTT(武漢博士德)；胎牛血清(?？寺?；重組人TGF-β1和黃芪總苷標(biāo)準(zhǔn)品(ProSpec-Tany)、SuperQuickRT MasterMix、UltraSYBR MixturePCR(康為世紀(jì))；TRPC6和內(nèi)參(GAPDH)一抗及HRP標(biāo)記的二抗(美國Abcam)。

1.2 方法

1.2.1 足細(xì)胞培養(yǎng)及實驗分組 用含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，在5%CO2、37℃培養(yǎng)箱中傳代培養(yǎng)。本課題組的前期研究已經(jīng)證實該細(xì)胞株具有分化成熟足細(xì)胞的典型特征[4]，且經(jīng)過預(yù)實驗我們得出TGF-β1對足細(xì)胞的半抑制率(IC50)為12 ng/ml，干預(yù)48 h，因此本實驗中我們將選擇這個濃度和干預(yù)時間進(jìn)行實驗。實驗將細(xì)胞分為5組：正常對照組、TGF-β1干預(yù)組(TGF-β1終濃度為12 ng/ml)、TGF-β1干預(yù)+低劑量黃芪總苷組(黃芪總苷終濃度為40 mg/ml)、TGF-β1干預(yù)+中劑量黃芪總苷組(黃芪總苷終濃度為80 mg/ml)、TGF-β1干預(yù)+高劑量黃芪總苷組(黃芪總苷終濃度為120 mg/ml)。

1.2.2 2,5-二苯基四氮唑溴鹽法(MTT法)檢測細(xì)胞增殖 將細(xì)胞按1×104個/孔接種于96孔板,每孔終體積為200 μl；培養(yǎng)4 h，待細(xì)胞貼壁后分別加入不同濃度的TGF-β1和黃芪總苷(使TGF-β1終濃度均為12 ng/ml，黃芪總苷終濃度分別為40、80、120 mg/ml)處理足細(xì)胞，每一濃度設(shè)置4個副孔，并設(shè)空白對照孔(只加培養(yǎng)基)，繼續(xù)培養(yǎng)48 h；干預(yù)48 h 后，每孔加入15 μl MTT溶液(濃度為5 mg/ml)，37℃ 5%CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4 h；小心吸去每孔全部培養(yǎng)基，加入150 μl二甲基亞颯，37℃搖床孵育15 min；在酶標(biāo)儀上測定570nm的吸亮度值，吸亮度值的強(qiáng)弱與活細(xì)胞數(shù)量成正比，代入公式：抑制率=(1-實驗組OD值)/對照組OD值×100%計算各組增殖率。

1.2.3 Real-time RT-PCR檢測腎小球足細(xì)胞TRPC6 mRNA表達(dá) TRPC6 mRNA表達(dá)模型建立后按 RNA提取試劑盒提取各組細(xì)胞總RNA，檢測其濃度和純度后，取1 μg RNA放入PTC-200中進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA。引物序列采用Primer Premier3.0程序設(shè)計，引物序列見表1。反應(yīng)總體系20 μl，反應(yīng)條件:95℃預(yù)變性10 min，95℃變性15 s，60℃退火/延伸60 s，循環(huán)40次，同時設(shè)熔解曲線55～95℃ 10 s 共81個循環(huán)。目標(biāo)基因相對于內(nèi)參基因進(jìn)行相對定量，采用2-ΔΔCt法進(jìn)行mRNA相對表達(dá)量的比較。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測基因特異性。為減少誤差，每個樣品均設(shè)3個復(fù)孔，每組重復(fù) 3次。

1.2.4 Western blot法檢測腎小球足細(xì)胞TRPC6蛋白表達(dá) TRPC6蛋白表達(dá)模型建立后各組細(xì)胞用4℃預(yù)冷的PBS洗2次，加入150 μl預(yù)冷PI裂解液，冰浴5 min，用刮勺收集細(xì)胞至1.5 ml EP管中，4℃ 12 000 r/min離心10 min，取上清，以二喹琳甲酸(BCA)法測定各組蛋白質(zhì)濃度。每個樣本取30 μg蛋白加入5×SDS上樣緩沖液煮沸變性后進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳，濕式電印跡法300 mA恒流、80 min轉(zhuǎn)至PVDF膜，3%BSA室溫封閉0.5 h，用1×TBST洗滌3次，10 min/次，加入一抗(兔抗TRPC6多克隆抗體，稀釋度1∶200；兔抗GAPDH，稀釋度1∶500)，4℃冰箱搖床孵育過夜。1×TBST洗膜3次，10 min/次，加入羊抗兔多克隆二抗(稀釋度1∶5 000)，室溫孵育1 h，1× TBST洗膜3次，20 min/次，ECL化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行顯影。利用SensiAnsys圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行灰度值分析，以目的蛋白條帶與GAPDH蛋白條帶的灰度值的比值表示其相對含量。

2 結(jié)果

2.1 足細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察 正常足細(xì)胞呈不規(guī)則形或多邊形，自胞體伸出少量偽足，核清晰，呈橢圓形(圖1A)，12 ng/ml TGF-β1干預(yù)48 h時部分足細(xì)胞萎縮，足突融合、回縮或消失(圖1B)。當(dāng)予黃芪總苷干預(yù)后隨著藥物濃度的增加足細(xì)胞形態(tài)逐漸趨向正常(圖1C、D、E)。

2.2 黃芪總苷對TGF-β1干預(yù)足細(xì)胞增殖的影響 從表2可以看出，與正常對照組相比，TGF-β1干預(yù)組對足細(xì)胞增殖抑制率明顯升高(P<0.05)，給予黃芪總苷干預(yù)后，足細(xì)胞增殖抑制率有所下降，黃芪總苷中劑量組的抑制率明顯比黃芪總苷低、高劑量組低(P<0.05)。

表1 熒光定量PCR引物序列

Tab.1 Primers of Real-time RT-PCR

NameForwardprimer(5'-3')Reverseprimer(5'-3')GAPHD5'-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3'5'-TGGTGAAGACGCCAGTGGA-3'TRPC65'-ACATCGGCTACGTTCTGTATGGTG-3'5'-CAATTTGGCCCTTGCAAACTTC-3'

圖1 足細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察Fig.1 Morphological appearance of podocytesNote: A.Control group;B.Group of 12 ng/ml TGF-β1;C.Group of TNF-β1 and 40 μg/ml ATS;D.Group of TGF-β1 and 40 μg/ml AST;E.Group of TGF-β1 and 40 μg/ml AST.

GroupsODvalueInhibitionrate(%)Controlgroup0.48±0.070.00±0.00TGF-β1treatmentgroup0.26±0.011)48.4±0.121)TGF-β1+low-doseASTgroup0.29±0.0239.8±0.12TGF-β1+medial-doseASTgroup0.43±0.032)10.9±0.082)TGF-β1+high-doseASTgroup0.36±0.033)33.2±0.073)

Note：1)P<0.01,comparing with the control group;2)P<0.01，3)P<0.05,comparing with TGF-β1 treatment group.

圖2 黃芪總苷對TGF-β1干預(yù)下足細(xì)胞TRPC6 mRNA表達(dá)的影響Fig.2 Effects of AST on TRPC6 mRNA expression induced by TGF-β1Note: #.P<0.01,comparing with the control group;△.P<0.01，*.P<0.05,comparing with TGF-β1 treatment group.A.control group;B.TGF-β1 treatment group;C.TGF-β1+ low-dose AST group;D.TGF-β1+ medial-dose AST group;E.TGF-β1+ high-dose AST group.

2.3 黃芪總苷對TGF-β1干預(yù)足細(xì)胞TRPC6 mRNA表達(dá)的影響 與正常對照組相比，TGF-β1干預(yù)48 h后足細(xì)胞TRPC6 mRNA表達(dá)水平明顯升高(P<0.05)，黃芪總苷干預(yù)則可以逆轉(zhuǎn)上述變化，使足細(xì)胞TRPC6 mRNA表達(dá)量減少，并且存在量效關(guān)系，黃芪總苷中劑量組TRPC6 mRNA減少量比低、高劑量組明顯，見圖2。

GroupsTRPC6/GAPDHgrayvalueControlgroup0.16±0.02TGF-β1treatmentgroup0.49±0.031)TGF-β1+low-doseASTgroup0.34±0.052)TGF-β1+medial-doseASTgroup0.18±0.023)TGF-β1+high-doseASTgroup0.29±0.032)

Note：1)P<0.01,comparing with the control group;2)P<0.05,3)<0.01，comparing with TGF-β1 treatment group.

2.4 黃芪總苷對TGF-β1干預(yù)足細(xì)胞TRPC6蛋白表達(dá)的影響 與正常對照組相比，TGF-β1干預(yù)48 h后足細(xì)胞TRPC6蛋白表達(dá)水平明顯升高(P<0.01)，黃芪總苷干預(yù)則可以逆轉(zhuǎn)上述變化，使足細(xì)胞TRPC6蛋白表達(dá)量減少，且呈量效關(guān)系，即黃芪總苷中劑量組TRPC6蛋白減少量比低、高劑量組明顯，見表3。

3 討論

足細(xì)胞是腎臟高度終末分化期腎小球上皮細(xì)胞，增殖能力極差，一旦損傷或丟失就很難再生。在多種遺傳性和獲得性腎小球疾病中均發(fā)現(xiàn)足細(xì)胞有不同程度的損傷，足細(xì)胞損傷是導(dǎo)致蛋白尿和腎小球硬化癥的關(guān)鍵因素，也是腎臟疾病治療的難點[5]。免疫抑制劑如糖皮質(zhì)激素、鈣調(diào)磷酸酶抑制劑(環(huán)抱素、他克莫司)、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑、血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑、維生素D具有保護(hù)和修復(fù)足細(xì)胞損傷的作用[6-9]，但缺乏特異性，且有一定的副作用，因此，積極尋找對足細(xì)胞具有特異性保護(hù)作用的藥物成為研究熱點。

黃芪總苷是中藥黃芪的主要有效成分之一。既往研究發(fā)現(xiàn)，黃芪具有抗應(yīng)激、抗氧化和免疫調(diào)節(jié)等多種藥理作用。關(guān)于黃芪組方或黃芪提取物在泌尿系統(tǒng)[3]、心腦系統(tǒng)系疾病的治療研究報道較多[10,11]，且療效顯著，但尚未見系統(tǒng)研究黃芪總苷對足細(xì)胞是否具有保護(hù)作用及其機(jī)制的研究報道。

Yao等[12]通過研究黃芪總苷對實驗性糖尿病動物腎臟保護(hù)作用及其機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，黃芪總苷對于糖尿病大鼠、高糖培養(yǎng)人腎小球系膜細(xì)胞具有保護(hù)作用，其機(jī)制之一可能與提高系膜細(xì)胞 TRPC6 表達(dá)水平有關(guān)。Yao等[12]發(fā)現(xiàn)黃芪甲苷通過下調(diào)足細(xì)胞TRPC6表達(dá)減少高糖誘導(dǎo)的足細(xì)胞凋亡，這些說明TRPC6可能是黃芪總苷下游的調(diào)控因子之一。因此，我們猜測黃芪總苷對TGF-β1誘導(dǎo)足細(xì)胞損傷的保護(hù)作用可能與調(diào)節(jié)TRPC6表達(dá)有關(guān)。

瞬時受體電位陽離子通道6(Transient receptor potential channel 6，TRPC6)是新近發(fā)現(xiàn)的足細(xì)胞裂孔隔膜蛋白之一，屬于非選擇陽離子通道蛋白家族的一員，與足細(xì)胞其他裂孔隔膜蛋白存在共定位分布并且與它們存在相互作用，其對維持足細(xì)胞裂孔隔膜的完整性和骨架結(jié)構(gòu)、RhoA信號通路的傳導(dǎo)起重要作用[13]。TRPC6基因突變可導(dǎo)致局灶性節(jié)段性腎小球硬化(FSGS)的發(fā)生，在腎病綜合征、糖尿病腎病的發(fā)病過程中，足細(xì)胞上TRPC6均有不同程度的上調(diào)，并且與蛋白尿的發(fā)生密切相關(guān)[14-16]。在STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠模型、血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的足細(xì)胞損傷模型中，也發(fā)現(xiàn)足細(xì)胞TRPC6表達(dá)上調(diào)，且與足細(xì)胞損傷程度呈正相關(guān)[17,18]。TRPC6可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度、影響細(xì)胞骨架蛋白完整性、組成機(jī)械敏感性Ca2+通道等機(jī)制導(dǎo)致足細(xì)胞損傷[19-21]。

本實驗研究采用TGF-β1誘導(dǎo)足細(xì)胞損傷模型，給予黃芪總苷進(jìn)行干預(yù)，觀察黃芪總苷干預(yù)前后及不同劑量黃芪總苷對TGF-β1誘導(dǎo)下足細(xì)胞損傷情況的影響，并試圖證實黃芪總苷可能通過調(diào)節(jié)TRPC6表達(dá)的分子機(jī)制發(fā)揮其保護(hù)作用。結(jié)果顯示黃芪總苷可顯著緩解TGF-β1對足細(xì)胞增殖的抑制作用。TGF-β1干預(yù)下可使足細(xì)胞TRPC6蛋白和mRNA表達(dá)上調(diào)，黃芪總苷作用后可顯著逆轉(zhuǎn)上述變化，并且存在一定的量效關(guān)系。這些結(jié)果證實黃芪總苷通過調(diào)節(jié)足細(xì)胞TRPC6分子表達(dá)發(fā)揮保護(hù)作用。

綜上所述，在TGF-β1誘導(dǎo)的足細(xì)胞損傷中，黃芪總苷通過調(diào)節(jié)足細(xì)胞TRPC6的表達(dá)實現(xiàn)其對足細(xì)胞的保護(hù)作用。但在足細(xì)胞損傷中TRPC6與足細(xì)胞其他特異性分子相互作用，機(jī)制復(fù)雜，治療足細(xì)胞損傷的特異性藥物的開發(fā)及臨床應(yīng)用研究值得繼續(xù)深入開展。

[1] Gui D,Guo Y,Wang F,etal.Astragaloside Ⅳ,a novel antioxidant,prevents glucose-induced podocyte apoptosis in vitro and in vivo[J].PLoS One,2012,7(6):e39824.

[2] Lu WS,Li S,Guo WW,etal.Effects of Astragaloside IV on diabetic nephropathy in rats[J].Genet Mol Res,2015,14(2):5427-5434.

[3] Wang N,Wei RB,Li QP,etal.Protective effects of astragaloside in rats with adriamycin nephropathy and underlying mechanism[J].Chin J Nat Med,2016,14(4):270-277.

[4] 黃海庭,林 栩,尤燕舞,等.TRPC6在TGF-β1誘導(dǎo)的體外培養(yǎng)腎小球足細(xì)胞損傷中的表達(dá)及其高表達(dá)對nephrin、desmin表達(dá)的影響[J].免疫學(xué)雜志,2016,32(7):570-576.

[5] Mallipattu SK,He JC .The podocyte as a direct target for treatment of glomerular disease?[J].Am J Physiol Renal Physiol,2016,311(1):F46-451.

[6] Lewko B.Treatment of nephrotic syndrome:immuno-or rather podocyte therapy? [J].Postepy Hig Med Dosw (Online),2016,70:459-470.

[7] Qi XM,Wang J,Xu XX,etal.FK506 reduces albuminuria through improving podocyte nephrin and podocin expression in diabetic rats[J]. Inflamm Res,2016,65(2):103-114.

[8] Shimizu A,Zhong J,Miyazaki Y,etal.ARB protects podocytes from HIV-1 nephropathy independently of podocyte AT1[J].Nephrol Dial Transplant,2012,27(8):3169-3175.

[9] Zhang XL,Guo YF,Song ZX,etal.Vitamin D prevents podocyte injury via regulation of macrophage M1/M2 phenotype in diabetic nephropathy rats[J].Endocrinology,2014 ,155(12):4939-4950.

[10] Xu C,Tang F,Lu M,etal.Astragaloside IV improves the isoproterenol-induced vascular dysfunction via attenuating eNOS uncoupling-mediated oxidative stress and inhibiting ROS-NF-κB pathways[J].Int Immunopharmacol,2016,33:119-127.

[11] Haiyan H,Rensong Y,Guoqin J,etal.Effect of astragaloside IV on neural stem cell transplantation in alzheimer′s disease rat models[J].Evid Based Complement Alternat Med,2016,2016:3106980.

[12] Yao XM,Liu YJ,Wang YM,etal.Astragaloside IV prevents high glucose-induced podocyte apoptosis via downregulation of TRPC6[J].Mol Med Rep,2016,13(6):5149-5156.

[13] Wieder N,Greka A.Calcium,TRPC channels,and regulation of the actin cytoskeleton in podocytes:towards a future of targeted therapies[J].Pediatr Nephrol,2016 ,31(7):1047-1054.

[14] Winn MP,Conlon PJ,Lynn KL,etal.A mutation in the TRPC6 cation channel causes familial focal segmental glomerulosclerosis[J].Sci J,2005,308(5729):1801-1804.

[15] Hofstra JM,Coenen MJ,Schijvenaars MM,etal.TRPC6 single nucleotide polymorphisms and progression of idiopathic membranous nephropathy[J].PLoS One,2014,9(7):e102065.

[16] Ilatovskaya DV,Staruschenko A.Podocyte injury in diabetic nephropathy:implications of angiotensin II-dependent activation of TRPC channels[J].Am J Phvsiol Renal Physiol,2015,309(5):F393-397.

[17] Zhang X,Song Z,Guo Y,etal.The novel role of TRPC6 in vitamin D ameliorating podocyte injury in STZ-induced diabetic rats[J].Mol Cell Biochem,2015 ,399(1-2):155-165.

[18] Ilatovskaya DV,Palygin O,Chubinskiy-Nadezhdin V,etal.Angiotensin Ⅱ has acute effects on TRPC6 channels in podocytes of freshly isolated glomeruli[J].Kidney Int,2014,86(3):506-514.

[19] Jiang L,Ding J,Tsai H,etal.Over-expressing transient receptor potential cation channel 6 in podocytes induces cytoskeleton rearrangement through increases of intracellular Ca2+and Rho A activation[J].Exp Biol Med (Maywood),2011,236(2):184-193.

[20] Estacion M,Li S,Sinkins WG,etal.Activation of human TRPC6 channels by receptor stimulation [J].J Biol Chem,2004,279(21):22047-22056.

[21] Gottlieb P,Folgering J,Maroto R,etal.Revisiting TRPC1 and TRPC6 mechanosensitivity[J].Pflugers Arch,2008,455 (6):1097-1103.

[收稿2016-08-16 修回2016-10-17]

(編輯 許四平)

Effects of astragaloside on TRPC6 expression on mouse podocyte induced by TGF-β1

HUANGHai-Ting,WUHao-Hao,QINYou-Ling,LINXu,YOUYan-Wu,GUOPeng-Wei,TANGChun-Rong.

DepartmentofNephrology,theAffiliatedHospitalofYoujiangMedicalUniversityforNationalities,Baise533000,China

Objective:To explore the possible mechanism of astragaloside involved in the mouse podocytes injury induced by TGF-β1 in vitro.Methods: Mouse podocytes were cultured in vitro and then all cell were divided into 5 groups:normal control group,TGF-β1 treatment group ,TGF-β1 treatment +astragaloside low dose group,TGF-β1 treatment +astragaloside middle dose group and TGF-β1 treatment +astragaloside high dose group.The proliferation rate of each group was investigated by MTT assay,the expression of TRPC6 protein and mRNA were measured by Western blot and RT-PCR respectively after 48 hours.Results: TGF-β1 can significantly inhibit the proliferation of podocytes(P<0.05),fusions of foot processes or even effaced of podocytes were observed.TGF-β1 could also increase the expression of TRPC6.Astragaloside could reduce the inhibition of TGF-β1 to the proliferain of podocytes significantly,make the cell shape tend to be normal,and reduce the expression of TRPC6 mRNA and protein with dose-effect relation.Conclusion: TRPC6 play an important role in the TGF-β1 induecd podocytes injury.Astragaloside can alleviate podocytes injury by reduce the expression of TRPC6.

Podocytes;TGF-β1;TRPC6;AST

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.03.011

黃海庭(1987年-)，女，在讀碩士，住院醫(yī)師，主要從事腎病綜合征足細(xì)胞損傷機(jī)制研究，E-mail：hhtwsw123@126.com。

及指導(dǎo)教師：林 栩(1963年-)，男，碩士，教授，主要從事腎小球疾病基礎(chǔ)與臨床研究，E-mail:linyyfyy@163.com。

R329.2+5 R692 R285.5

A

1000-484X(2017)03-0370-04

①本文為廣西自然科學(xué)基金(2014GXNSFAA118269)。