急性冠脈綜合征患者血清miRNA-208與血小板功能的關系*

李 恩，汪 濤，張麗華，簡立國，孫利強，牛少輝#

1)鄭州大學第二附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科 鄭州 450014 2)鄭州大學第二附屬醫(yī)院干部病房 鄭州 450014

急性冠脈綜合征患者血清miRNA-208與血小板功能的關系*

李 恩1)，汪 濤2)，張麗華1)，簡立國1)，孫利強1)，牛少輝1)#

1)鄭州大學第二附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科 鄭州 450014 2)鄭州大學第二附屬醫(yī)院干部病房 鄭州 450014

#通信作者，男，1977年11月生，碩士，副主任醫(yī)師，研究方向：冠心病的預防與治療，E-mail:ln1025asdfgh@sohu.com

急性冠脈綜合征；miRNA-208；血小板分布寬度；平均血小板體積

目的：探討急性冠脈綜合征(ACS)患者血清miRNA-208與血小板功能的關系。 方法：選取2014年1月至2015年9月鄭州大學第二附屬醫(yī)院收治的ACS患者60例(ACS組)和非ACS患者20例(對照組)，根據(jù)診斷結(jié)果將ACS組進一步分為心肌梗死組(n=32)和不穩(wěn)定心絞痛組(n=28)。入院即刻對3組患者進行靜脈血液采集，測定血小板計數(shù)(PLT)、血小板分布寬度(PDW)及平均血小板體積(MPV)；利用實時熒光定量PCR法測定血清miRNA-208。結(jié)果：與對照組比較，心肌梗死組和不穩(wěn)定心絞痛組血清miRNA-208、PDW、MPV升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與不穩(wěn)定心絞痛組比較，心肌梗死組血清miRNA-208、PDW、MPV升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。ACS患者血清miRNA-208與PDW和MPV呈正相關(r=0.828、0.766,P<0.05)。結(jié)論：ACS患者血清miRNA-208與血小板活化密切相關， miRNA-208參與了血小板活化的調(diào)控。

miRNA是一類生物進化過程中高度保守的非編碼小分子RNA，其并不編碼蛋白質(zhì)，但通過對基因表達、蛋白質(zhì)翻譯及靶RNA的穩(wěn)定性進行調(diào)控從而發(fā)揮作用。近年來，miRNA在心血管疾病領域的研究成為熱點，研究[1]證實miRNA-208屬于心臟特異性的miRNA，它可以調(diào)控心血管系統(tǒng)細胞的生成、發(fā)育、損傷修復等生理和病理過程。急性冠脈綜合征(acute coronary syndrome，ACS)的病理基礎是繼發(fā)完全或不完全閉塞性血栓形成，該類患者伴隨血小板的激活、聚集。該研究檢測了ACS患者血清中miRNA-208的表達情況以及血小板計數(shù)(PLT)、血小板分布寬度(platelet distribution width，PDW)、平均血小板體積(mean platelet volume，MPV)，以探討ACS患者miRNA-208與血小板功能的關系。

1 對象與方法

1.1 研究對象及分組 選取2014年1月至2015年9月鄭州大學第二附屬醫(yī)院收治的ACS患者60例作為ACS組，其中男37例，女23例，年齡50～72歲；不穩(wěn)定心絞痛28例，心肌梗死32例(ST段抬高型心肌梗死26例，非ST段抬高型心肌梗死6例)。另選取同期收治的非ACS住院患者20例作為對照組，其中男12例，女8例，年齡48～70歲；穩(wěn)定型心絞痛患者15例，X綜合征患者3例，心血管神經(jīng)官能癥2例。根據(jù)診斷結(jié)果將ACS組進一步分為心肌梗死組(n=32)和不穩(wěn)定心絞痛組(n=28)。入選標準:根據(jù)WHO規(guī)定的ACS診斷標準進行診斷，患者均常規(guī)行冠狀動脈造影、ECG、動態(tài)心電圖檢查，均接受正規(guī)藥物治療，并根據(jù)冠狀動脈造影結(jié)果行PCI術。排除標準：合并腦血管意外史，凝血疾病和血小板減少癥病史，血液免疫系統(tǒng)疾病，嚴重心律失常，嚴重感染性疾病，肝、腎功能衰竭，惡性腫瘤。所有研究資料的獲取均取得患者同意，并通過鄭州大學第二附屬醫(yī)院倫理委員會審查。

1.2 血清PLT、PDW、MPV和miRNA-208的檢測

入院即刻對各組患者進行靜脈血液采集，分離血清，測定PLT、PDW及MPV。利用實時熒光定量PCR法測定血清miRNA-208，用Trizol試劑提取血液中的總RNA，取2 μL總RNA用隨機引物反轉(zhuǎn)錄成15 μL cDNA，取標準樣品2 μL，加試劑SYBR Premix Ex TaqTM，在GeneAmp 5700 Sequence Detector 儀進行擴增，其產(chǎn)物用于標準曲線的制作。用目的基因的定量結(jié)果除以管家基因(GAPDH)的定量結(jié)果就可以得到目的基因的相對表達量。引物序列如下：miRNA-208上游引物5’-CTTTTGGCCCGGGTTATAC-3’，下游引物5’-CTGACATCCTCTAGGCTGG-3’；GAPDH上游引物5’-GCTGATGCCCCCATGTTTG-3’，下游引物 5’-GGGTGGTGGACCTCATGGC-3’。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 11.5進行統(tǒng)計學處理。3組間miRNA-208、PLT、PDW、MPV的比較采用單因素方差分析和LSD-t檢驗；ACS組和對照組一般情況的比較采用兩獨立樣本的t檢驗或χ2檢驗；ACS患者miRNA-208與PLT、PDW、MPV的相關性采用直線相關進行分析。檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 ACS組與對照組一般情況的比較 結(jié)果見表1。由表1可知，2組的年齡、性別構(gòu)成、吸煙史、高血壓病史、糖尿病病史、體重指數(shù)(BMI)、總膽固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、肌酐(Scr)比較，差異均無統(tǒng)計學意義。

表1 ACS組與對照組一般情況的比較

2.2 各組血清miRNA-208、PLT、PDW、MPV的比較 與對照組比較，心肌梗死組和不穩(wěn)定心絞痛組血清miRNA-208、PDW、MPV升高，差異有統(tǒng)計學意義；與不穩(wěn)定心絞痛組比較，心肌梗死組血清miRNA-208、PDW、MPV升高，差異有統(tǒng)計學意義；各組血清PLT比較，差異無統(tǒng)計學意義(表2)。

2.3 ACS患者miRNA-208與PLT、PDW、MPV的相關性分析 ACS患者miRNA-208與PLT無關(r=-0.223,P=0.086);miRNA-208與PDW和MPV呈正相關(r=0.828、0.766,P<0.05)。

表2 各組血清miRNA-208、PLT、PDW、MPV的比較

*：與對照組比較，P<0.05；#：與心肌梗死組比較，P<0.05。

3 討論

ACS是冠心病患者冠狀動脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定破裂所致的一系列臨床綜合征，分為心肌梗死和不穩(wěn)定型心絞痛，嚴重危害人類健康[2-3]。ACS的病理基礎是繼發(fā)完全或不完全閉塞性血栓形成，血栓在形成過程中伴隨著血小板的激活、黏附、聚集。血栓形成的過程消耗大量血小板，從而使血小板數(shù)量減少，進而刺激骨髓巨核細胞加快血小板生成[4]。血小板在ACS發(fā)展過程中發(fā)揮了關鍵作用，血小板既能促進斑塊的形成和破裂，在斑塊破裂后又迅速聚集，促進血栓形成。血小板的體積大小反映了其功能和活化狀態(tài)[5]，活化狀態(tài)的血小板體積增大。MPV是血小板活化的一個重要指標，MPV的大小反映了骨髓中巨核細胞增生與血小板生成的情況，其與血循環(huán)中血小板的壽命、超微結(jié)構(gòu)及功能密切相關。年輕血小板的MPV大，富含蛋白、酶及血小板顆粒，其活性、聚集性強，隨著血小板存活時間的延長，顆粒物質(zhì)不斷脫出，MPV逐漸變小，活性減弱[6]。有研究[7]發(fā)現(xiàn)，冠心病患者MPV變大，血小板活化增強，參與冠狀動脈血栓形成。還有文獻[8]指出，MPV與血小板活性呈正相關，伴隨著MPV的升高，血小板活性增強。PDW 是反映血液內(nèi)血小板容積變異的參數(shù)，以測得的血小板體積大小的變異系數(shù)表示。ACS發(fā)生時，血小板大量活化，大體積血小板增多，血小板體積差異程度增大，導致PDW 增大[9]。

miRNA是一類生物進化過程中高度保守的非編碼小分子RNA，其并不編碼蛋白質(zhì)，但通過對基因表達、蛋白質(zhì)翻譯及靶RNA的穩(wěn)定性的調(diào)控，參與到許多重要的生物過程中。miRNA-208是心臟特異性的miRNA，它可以調(diào)控心血管系統(tǒng)細胞的生成、發(fā)育、損傷修復等生理和病理過程，并且在血液中含量穩(wěn)定[1]。有研究[10]發(fā)現(xiàn)，急性心肌梗死后miRNA-208在心臟中明顯升高，且升高的時間變化規(guī)律與cTnI相似。還有研究[11]發(fā)現(xiàn)，相較miRNA-1、133、499，miRNA-208具有更高的心臟特異性，其在正常心肌中無表達。

該研究旨在探討ACS患者血清miRNA-208表達情況與血小板功能之間的關系。結(jié)果顯示，與對照組比較，心肌梗死組和不穩(wěn)定心絞痛組血清miRNA-208、PDW、MPV明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義；與不穩(wěn)定心絞痛組比較，心肌梗死組血清miRNA-208、PDW、MPV升高，差異有統(tǒng)計學意義；各組血清PLT比較，差異無統(tǒng)計學意義。另外，ACS患者miRNA-208與PDW和MPV呈正相關。該研究中作者發(fā)現(xiàn)，隨著miRNA-208的升高，PDW和MPV均升高。PDW、MPV是反映血小板活化的重要指標，因此作者認為， miRNA-208參與了血小板活化的調(diào)控，為ACS患者抗血小板治療提供了新的靶點。

綜上所述，作者認為在ACS患者中，miRNA-208與血小板活化密切相關，參與了血小板活化的調(diào)控，其具體機制需進一步研究探討。

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(2016-08-19收稿 責任編輯姜春霞)

Relationship between serum miRNA-208 and platelet function in patients with acute coronary syndrome

LIEn1)，WANGTao2)，ZHANGLihua1)，JIANLiguo1)，SUNLiqiang1)，NIUShaohui1)

1)DepartmentofCardiovascularInternalMedicine,theSecondAffiliatedHospital,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450014 2)CadreWard,theSecondAffiliatedHospital,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450014

acute coronary syndrome;miRNA-208;platelet distribution width;mean platelet volume

Aim: To investigate the relationship between serum miRNA-208 and platelet function in patients with acute coronary syndrome(ACS). Methods: A total of 60 cases of ACS(ACS group) and 20 cases of non-ACS(control group) were collected,and the ACS group was further allocated into myocardial infarction group(AMI group,n=32) and unstable angina pectoris group(UA group,n=28). Platelet(PLT), platelet distribution width(PDW) and mean platelet volume(MPV) were measured. The serum miRNA-208 was measured by real-time fluorescence quantitative PCR method.Results: Compared with control group, the serum level of miRNA-208, PDW and MPV were significantly higher in the AMI group and the UA group(P<0.05).Compared with the UA group, the serum level of miRNA-208, PDW, MPV were significantly higher in the AMI group(P<0.05). In patients with ACS, the serum level of miRNA-208 was correlated with PDW and MPV(r=0.828,0.766,P<0.05).Conclusion: miRNA-208 is closely related to platelet activation and involves in the regulation of platelet activation in patients with ACS.

10.13705/j.issn.1671-6825.2017.02.020

*鄭州市普通科技攻關計劃項目 141PPTGG453；河南省高等學校重點科研項目 15A320019

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