丁苯酞對(duì)Aβ1-42誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用及機(jī)制研究Δ

黃江，姜鮮，宋大強(qiáng)，劉明華，章卓#（.西南醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥理教研室，四川 瀘州 646000；2.西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)院藥劑科，四川 瀘州 646000；.西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院麻醉科，四川 瀘州 646000）

丁苯酞對(duì)Aβ1-42誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用及機(jī)制研究Δ

黃江1，2＊，姜鮮3，宋大強(qiáng)1，劉明華1，章卓1#（1.西南醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥理教研室，四川 瀘州 646000；2.西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)院藥劑科，四川 瀘州 646000；3.西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院麻醉科，四川 瀘州 646000）

目的：研究丁苯酞對(duì)β-淀粉樣蛋白1-42（Aβ1-42）誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）凋亡的保護(hù)作用及其機(jī)制。方法：將HUVEC分為正常對(duì)照組、Aβ1-42組、TAK242組（10 nmol/L）、二甲基亞砜（DMSO）組（1‰DMSO）和丁苯酞低、中、高濃度組（40、80、160 μg/L），除正常對(duì)照組和DMSO組外，其余各組細(xì)胞均加入50μmol/LAβ1-42培養(yǎng)HUVEC 24 h，同時(shí)TAK242組、DMSO組和丁苯酞低、中、高濃度組細(xì)胞還加入相應(yīng)濃度的藥物作用30 min，每個(gè)濃度3個(gè)復(fù)孔。CCK-8法測(cè)定細(xì)胞活力，Hochest 33342/PI雙染法觀察細(xì)胞凋亡情況，膜聯(lián)蛋白（Annexin）Ⅴ-異硫氰酸熒光素（FITC）流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，Western blot法檢測(cè)細(xì)胞中果蠅樣受體4（TLR4）、環(huán)氧合酶2（COX-2）蛋白表達(dá)，ELISA法檢測(cè)細(xì)胞中白細(xì)胞介素1（IL-1）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）含量。結(jié)果：與正常對(duì)照組比較，Aβ1-42組細(xì)胞活力減少、凋亡率增加，TLR4、COX-2蛋白表達(dá)和IL-1、TNF-α含量增加；與Aβ1-42組比較，TAK242組和丁苯酞低、中、高濃度組細(xì)胞活力增加、凋亡率減少，TLR4、COX-2蛋白表達(dá)和IL-1、TNF-α含量減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論：丁苯酞可改善Aβ1-42所致的HUVEC凋亡，其機(jī)制可能與抑制TLR4、COX-2和炎癥因子表達(dá)有關(guān)。

β-淀粉樣蛋白1-42；人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞；細(xì)胞凋亡；機(jī)制

β-淀粉樣蛋白（β-amyloid protein，Aβ）的沉積導(dǎo)致腦血管內(nèi)皮損傷可能是阿爾茨海默?。ˋlzheimer's disease，AD）發(fā)病機(jī)制之一，可能與Aβ致血管內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞凋亡，產(chǎn)生炎癥反應(yīng)以及內(nèi)皮功能障礙等有關(guān)[1]。人體內(nèi)最常見的亞型是Aβ1-40和Aβ1-42。果蠅樣受體4（Toll-like receptor-4，TLR4）是機(jī)體參與炎癥信號(hào)的重要受體之一，特異性配體可以激活TLR4信號(hào)通路，激活環(huán)氧合酶2（Cyclooxygenase-2，COX-2），釋放炎癥因子白細(xì)胞介素1（Interleukin 1，IL-1）、腫瘤壞死因子α（Tumor necrosis factor α，TNF-α）[2]。Aβ誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡也可能與TNF-α、IL-1的釋放及COX-2等基因改變有關(guān)[3]。丁苯酞（Butylphthalide）具有神經(jīng)功能保護(hù)作用，能抑制TLR4表達(dá)及炎癥介質(zhì)釋放[4]。據(jù)此筆者通過(guò)體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（Human umbilical vein endothelial cells，HUVEC）研究丁苯酞是否能減輕Aβ1-42誘導(dǎo)的HUVEC凋亡，探討其保護(hù)效應(yīng)與TLR4/COX-2表達(dá)的關(guān)系，為了解丁苯酞保護(hù)Aβ所致血管內(nèi)皮損傷的機(jī)制提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

PAC300型垂直型電泳槽和濕式電轉(zhuǎn)膜槽轉(zhuǎn)膜儀（美國(guó)Bio-Rad公司）；SW-CJ-1F型超凈工作臺(tái)（蘇州凈化設(shè)備有限公司）；CKX41型倒置相差顯微鏡（日本Olympus公司）；SpectraMaxM3型酶標(biāo)儀（美國(guó)MDS公司）；TCS SP5型激光共聚焦掃描顯微鏡（德國(guó)Leica公司）；SBK-YLQX-003552型流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD公司）；MR23i型超低溫離心機(jī)（美國(guó)Thermo Fisher公司）。

1.2 藥品與試劑

丁苯酞軟膠囊（石藥集團(tuán)恩必普藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20151011，規(guī)格：每粒100 mg）；兔TLR4多克隆抗體、兔COX-2多克隆抗體（美國(guó)Abcam公司）；辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記山羊抗兔免疫球蛋白G（IgG）、CCK-8試劑盒（碧云天生物技術(shù)研究所）；Aβ1-42多肽（北京奧普森有限公司）；TLR4阻滯劑TAK242（美國(guó)MCE公司，批號(hào)：20151112，純度：98.10%）；IL-1、TNF-α試劑盒（武漢優(yōu)爾生科技股份有限公司）；Hochest 33342、碘化丙啶（PI）、膜聯(lián)蛋白（Annexin）Ⅴ-異硫氰酸熒光素（FITC）（碧云天生物技術(shù)有限公司）。

1.3 細(xì)胞

HUVEC購(gòu)自上海拜力生物試劑有限公司。

2 方法

2.1 CCK-8法檢測(cè)HUVEC細(xì)胞活力

Aβ1-42在37℃下孵育1周使其變?yōu)榫奂癄顟B(tài)備用。HUVEC常規(guī)培養(yǎng)。將HUVEC分為正常對(duì)照組、Aβ1-42組、TAK242組（10 nmol/L）、二甲基亞砜（DMSO）組（1‰DMSO）和丁苯酞低、中、高濃度組（40、80、160 μg/L）。除正常對(duì)照組和DMSO組外，其余各組細(xì)胞均加入50 μmol/L Aβ1-42培養(yǎng)24 h，同時(shí)TAK242組、DMSO組和丁苯酞低、中、高濃度組細(xì)胞還加入相應(yīng)濃度的藥物作用30 min，每個(gè)濃度3個(gè)復(fù)孔。24 h后每孔細(xì)胞加入CCK-8 10 μL繼續(xù)培養(yǎng)1 h。酶標(biāo)儀450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定光密度（OD），以O(shè)D值的大小評(píng)價(jià)細(xì)胞活力。TAK242用 DMSO溶解，DMSO終濃度小于1‰。

2.2 Hochest 33342/PI雙染法觀察HUVEC凋亡情況

將HUVEC分為正常對(duì)照組、Aβ1-42組、TAK242組和丁苯酞低、中、高濃度組（40、80、160 μg/L），同“2.1”項(xiàng)下方法加藥培養(yǎng)24 h后，Hochest 33342/PI雙染檢測(cè)HUVEC凋亡情況。具體方法：收集培養(yǎng)24 h后的細(xì)胞懸浮于1 mL培養(yǎng)基中，加入10 μL Hochest 33342貯存液（100 mg/L，蒸餾水溶解），染色15 min；冰上冷卻，3 000× g離心5 min，去上清，細(xì)胞重懸于1 mL磷酸鹽緩沖液（PBS）中，加5 μL PI液（1 g/L，蒸餾水溶解），混勻；顯微鏡下觀察細(xì)胞核，藍(lán)色為正常細(xì)胞，亮藍(lán)色為凋亡細(xì)胞，紅色為死亡細(xì)胞。

2.3 AnnexinⅤ-FITC流式細(xì)胞儀檢測(cè)HUVEC凋亡率

同“2.2”項(xiàng)下分組加藥培養(yǎng)HUVEC 24 h，消化收集細(xì)胞，冷PBS洗2次，懸浮于AnnexinⅤ混合緩沖液（1× 106mL－1）中。取100 μL細(xì)胞懸液加5 μL AnnexinⅤ-FITC和5 μL PI，輕搖細(xì)胞，室溫下暗處放置15 min，1 h內(nèi)流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡率。

2.4 Western blot法檢測(cè)HUVEC中TLR4、COX-2蛋白表達(dá)

采用Western blot法檢測(cè)HUVEC中TLR4、COX-2蛋白表達(dá)。同“2.2”項(xiàng)下分組加藥培養(yǎng)HUVEC 24 h，冰上裂解10 min，4℃下12 000×g離心10 min，取上清備用。采用二喹啉甲酸（BCA）法測(cè)定蛋白濃度，采用8%分離膠和4%的濃縮膠，加蛋白樣后十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）電泳，電轉(zhuǎn)120 min，與兔TLR4多克隆抗體、兔COX-2多克隆抗體4℃孵育過(guò)夜，TBST緩沖液洗膜3次，加入HRP標(biāo)記山羊抗兔IgG（1∶2 000），孵育，洗膜，顯影。以β-肌動(dòng)蛋白（β-actin）為內(nèi)參，用圖像分析儀掃描，Image Pro-plus軟件測(cè)定蛋白條帶OD，以相應(yīng)蛋白與內(nèi)參OD值的比值評(píng)價(jià)蛋白表達(dá)。

2.5 ELISA法檢測(cè)HUVEC中IL-1、TNF-α含量

同“2.2”項(xiàng)下分組加藥培養(yǎng)HUVEC 24 h，收集細(xì)胞上清，4℃下1 500×g離心10 min，按ELISA法，以IL-1、TNF-α試劑盒說(shuō)明書操作，酶標(biāo)儀于450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定IL-1、TNF-α含量。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 細(xì)胞活力

正常對(duì)照組、Aβ1-42組、TAK242組、DMSO組和丁苯酞低、中、高濃度組細(xì)胞的OD值分別為0.99±0.12、0.79±0.07、0.94±0.11、1.02±0.09、0.92±0.04、0.97± 0.03、0.99±0.07。與正常對(duì)照組比較，Aβ1-42組細(xì)胞OD值明顯降低；與Aβ1-42組比較，TAK242組和丁苯酞低、中、高濃度組細(xì)胞的OD值均明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。正常對(duì)照組與DMSO組比較細(xì)胞的OD值無(wú)明顯變化（P＞0.05）。

3.2 細(xì)胞凋亡情況

Hochest 33342/PI雙染顯示，正常對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)呈圓形，細(xì)胞核呈淡藍(lán)色，幾乎無(wú)凋亡細(xì)胞；Aβ1-42組多數(shù)細(xì)胞細(xì)胞核呈亮藍(lán)色，凋亡細(xì)胞較多，還可見紅色細(xì)胞核的死亡細(xì)胞；丁苯酞高濃度組凋亡細(xì)胞較少，丁苯酞中、低濃度組和TAK242組可見少量凋亡細(xì)胞。各組細(xì)胞凋亡染色圖見圖1。

圖1 各組細(xì)胞凋亡染色圖（Hochest 33342/PI，×200）Fig 1 Cell apoptosis staining in each group（Hochest 33342/PI，×200）

3.3 細(xì)胞凋亡率

正常對(duì)照組、Aβ1-42組、TAK242組和丁苯酞低、中、高濃度組細(xì)胞的凋亡率分別為0.89%、21.89%、1.81%、11.12%、5.32%、2.31%。與正常對(duì)照組比較，Aβ1-42組細(xì)胞的凋亡率明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與Aβ1-42組比較，TAK242組和丁苯酞低、中、高濃度組細(xì)胞的凋亡率均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

3.4 細(xì)胞中TLR4、COX-2蛋白表達(dá)

與正常對(duì)照組比較，Aβ1-42組細(xì)胞中TLR4、COX-2蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與Aβ1-42組比較，TAK242組和丁苯酞低、中、高濃度組細(xì)胞中TLR4、COX-2蛋白表達(dá)均明顯減弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。各組細(xì)胞中TLR4、COX-2蛋白表達(dá)的電泳圖見圖2，測(cè)定結(jié)果見表1。

3.5 細(xì)胞中IL-1、TNF-α含量

與正常對(duì)照組比較，Aβ1-42組細(xì)胞中IL-1、TNF-α含量明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與Aβ1-42組比較，TAK242組和丁苯酞低、中、高濃度組細(xì)胞中IL-1、TNF-α含量均明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。各組細(xì)胞中IL-1、TNF-α含量的測(cè)定結(jié)果見表2。

4 討論

圖2 各組細(xì)胞中TLR4、COX-2蛋白表達(dá)的電泳圖Fig 2 Electrophoresis of protein expression of TLR4 and COX-2 in HUVECs of each group

表1 各組細(xì)胞中TLR4、COX-2蛋白表達(dá)的測(cè)定結(jié)果（±s，n＝3）Tab 1 Determination results of protein expression of TLR4 and COX-2 in HUVECs of each group（±s，n＝3）

表1 各組細(xì)胞中TLR4、COX-2蛋白表達(dá)的測(cè)定結(jié)果（±s，n＝3）Tab 1 Determination results of protein expression of TLR4 and COX-2 in HUVECs of each group（±s，n＝3）

注：與正常對(duì)照組比較，＊P＜0.01；與Aβ1-42組比較，#P＜0.05，##P＜0.01Note：vs.normal control group，＊P＜0.01；vs.Aβ1-42group，#P＜0.05，##P＜0.01

?

表2 各組細(xì)胞中IL-1、TNF-α含量的測(cè)定結(jié)果（±s，n＝3，pg/mL）Tab 2 Determination results of the contents of IL-1 and TNF-α in HUVECs of each group（±s，n＝3，pg/mL）

表2 各組細(xì)胞中IL-1、TNF-α含量的測(cè)定結(jié)果（±s，n＝3，pg/mL）Tab 2 Determination results of the contents of IL-1 and TNF-α in HUVECs of each group（±s，n＝3，pg/mL）

注：與正常對(duì)照組比較，＊P＜0.01；與Aβ1-42組比較，##P＜0.01Note：vs.normal control group，＊P＜0.01；vs.Aβ1-42group，##P＜0.01

?

盡管血管因素在AD的發(fā)生和進(jìn)展中的作用越來(lái)越引起人們的重視，但Aβ致血管內(nèi)皮損傷機(jī)制目前并未完全清楚。AD血管的異常包括不規(guī)則血管形成、微血管密度降低、小動(dòng)脈和毛細(xì)血管萎縮、血管內(nèi)皮功能退化、腦血管結(jié)構(gòu)改變等[3]。Toll樣受體是機(jī)體最重要的模式識(shí)別受體之一，其通過(guò)啟動(dòng)不同的信號(hào)途徑參與了機(jī)體的天然與獲得性免疫調(diào)節(jié)，目前發(fā)現(xiàn)約有12種Toll樣受體[5]。其中TLR4是識(shí)別特異性配體LPS的主要受體，是機(jī)體參與炎癥信號(hào)的重要受體之一，TLR4激活后，會(huì)啟動(dòng)Myd88依賴和非Myd88依賴的信號(hào)通路，激活下游COX-2釋放，激發(fā)炎癥因子，從而參與炎癥反應(yīng)[6]。TLR4可能參與了AD的血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡[7]。有資料顯示，LPS啟動(dòng)的TLR4通路參與了AD的發(fā)生，比如利用LPS腹腔注射和腦內(nèi)注射，均發(fā)現(xiàn)大鼠海馬tau蛋白不同位點(diǎn)出現(xiàn)了過(guò)度磷酸化的改變[8]。如果敲除掉與LPS連接的CD14，則可減少由Aβ誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞的激活[9]。另有研究也發(fā)現(xiàn)，Aβ能夠刺激TLR4野生型小鼠大腦分泌更多的炎癥因子，如TNF-α、IL-1、IL-10和IL-17。同TLR4野生型小鼠比較，TLR4缺乏或者突變的小鼠更容易發(fā)生淀粉樣沉積和彌散[10]。由此可知，TLR4可能與AD發(fā)生過(guò)程中內(nèi)皮細(xì)胞損傷存在一定聯(lián)系。

丁苯酞在臨床上可用于AD的防治[11]，對(duì)Aβ1-42誘導(dǎo)的HUVEC凋亡可能具有保護(hù)效應(yīng)。HUVEC的優(yōu)點(diǎn)在于較為穩(wěn)定、易于實(shí)驗(yàn)操作，故本研究選擇了HUVEC作為研究對(duì)象。結(jié)果顯示，Aβ1-42刺激HUVEC后，細(xì)胞凋亡明顯增加，細(xì)胞活力下降；與Aβ1-42組比較，丁苯酞作用后減少了Aβ1-42誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率，提高了細(xì)胞活力，因此其具有一定的保護(hù)效應(yīng)。

進(jìn)一步研究丁苯酞保護(hù)效應(yīng)是否與抑制TLR4表達(dá)和炎癥因子釋放有關(guān)。研究結(jié)果顯示，與Aβ1-42刺激后的HUVEC比較，給予TLR4阻滯劑的細(xì)胞凋亡明顯減少，細(xì)胞活力提高，提示TLR4的激活可能參與了Aβ1-42刺激后的HUVEC細(xì)胞凋亡。同時(shí)，給予TLR4阻滯劑后，炎癥因子IL-1和TNF-α明顯減少，COX-2表達(dá)減少，提示Aβ1-42刺激后的HUVEC細(xì)胞凋亡與炎癥因子IL-1、TNF-α、COX-2表達(dá)減少有關(guān)。丁苯酞作用后減少了Aβ1-42誘導(dǎo)的HUVEC中TLR4、COX-2蛋白表達(dá)，也明顯減少了炎癥因子IL-1、TNF-α表達(dá)，推測(cè)其保護(hù)效應(yīng)與抑制TLR4表達(dá)和炎癥因子表達(dá)有關(guān)。

綜上所述，TLR4參與了Aβ1-42刺激后的HUVEC細(xì)胞凋亡；丁苯酞對(duì)Aβ1-42誘導(dǎo)的HUVEC細(xì)胞凋亡具有明顯的保護(hù)效應(yīng)，其保護(hù)效應(yīng)可能與抑制TLR4啟動(dòng)的信號(hào)通路中COX-2與炎癥因子表達(dá)有關(guān)。其他的Toll受體亞型是否也參與了丁苯酞的保護(hù)作用值得進(jìn)一步研究。

[1] Karch CM，Jeng AT，Nowotny P，et al.Expression of novel Alzheimer's disease risk genes in control and Alzheimer's disease brains[J].PLoS One，2012，7（11）：e50976.

[2] Hwang EH，Kim TH，Oh SM，et al.Toll/IL-1 domaincontaining adaptor inducing IFN-β（TRIF）mediates innate immune responses in murine peritoneal mesothelial cells through TLR3 and TLR4 stimulation[J].Cytokine，2016，doi：10.1016/j.cyto.2015.11.010.

[3] Yu H，Yang M，Wang Y，et al.p75NTR is mainly responsible for Aβ toxicity but not for its internalization：a primary study[J].Neurol Sci，2012，33（5）：1043-1050.

[4] 張曉璇，邱海鵬，趙淑敏.丁苯酞對(duì)腦缺血再灌注大鼠HSP70及TLR4的影響研究[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志，2014，30（10）：1401-1403.

[5] Ma JF，Wang HM，Li QY，et al.Starvation triggers Abeta42 generation from human umbilical vascular endothelial cells[J].FEBS Lett，2010，584（14）：3101-3106.

[6] Zhang W，Wang LZ，Yu JT，et al.Increased expressions of TLR2 and TLR4 on peripheral blood mononuclear cells from patients with Alzheimer's disease[J].J Neurol Sci，2012，315（1/2）：67-71.

[7] Gambuzza ME，Sofo V，Salmeri FM，Soraci L，et al.Tolllike receptors in Alzheimer's disease：a therapeutic perspective[J].CNS Neurol Disord Drug Targets，2014，13（9）：1542-1558.

[8] Shi S，Liang D，Chen Y，et al.Gx-50 reduces β-amyloid-induced TNF-α，IL-1β，NO，and PGE2 expression and inhibits NF-κB signaling in a mouse model of Alzheimer's disease[J].Eur J Immunol，2016，46（3）：665-676.

[9] Wu D，Zhang X，Zhao M，et al.The role of the TLR4/ NF-κB signaling pathway in Aβ accumulation in primary hippocampal neurons[J].Acta physiologica Sinica，2015，67（3）：319-328.

[10] Chen L，Bai Y，Zhao M，et al.TLR4 inhibitor attenuates amyloid-β-induced angiogenic and inflammatory factors in ARPE-19 cells：Implications for age-related macular degeneration[J].Mol Med Rep，2016，13（4）：3249-3256.

[11] 齊凡星，胡瑩，盧軍棟，等.丁苯酞治療阿爾茨海默病的臨床觀察[J].中國(guó)藥房，2016，27（17）：2412-2414.

Protective Effect of Butylphthalide on Human Umbilical Vein Endothelial Cell Apoptosis Induced by Aβ1-42and Its Mechanism

HUANG Jiang1，2，JIANG Xian3，SONG Daqiang1，LIU Minghua1，ZHANG Zhuo1（1.Pharmacology Teaching and Research Section，School of Pharmacy，Southwest Medical University，Sichuan Luzhou 646000，China；2.Dept. of Pharmacy，the Affiliated TCM Hospital of Southwest Medical University，Sichuan Luzhou 646000，China；3.Dept.of Anesthesiology，the Affiliated Hospital of Southwest Medical University，Sichuan Luzhou 646000，China）

OBJECTIVE：To study the protective effect of butylphthalide on the apoptosis of human umbilical vein endothelial cells（HUVECs）induced by Aβ1-42and its mechanism.METHODS：HUVECs were divided into normal control group，Aβ1-42group，TAK242 group（10 nmol/L），DMSO group（1‰DMSO）and butylphthalide low-concentration，medium-concentration and high-concentration groups（40，80，160 μg/L）.Except for normal control group and DMSO group，other groups were given 50 μmol/L Aβ1-42to culture HUVECs for 24 h.TAK242 group，DMSO group and butylphthalide low-concentration，medium-concentration and high-concentration groups were given relevant concentration of drugs for 30 min，with 3 holes for each concentration.The cell viability was determined by CCK-8 assay；cell apoptosis was observed by Hochest 33342/PI double staining；the cell apoptotic rate was detected by AnnexinⅤ-fluorescein isothiocyanate（FITC）flow cytometry；the protein expression of TLR-4 and COX-2 were determined by Western blot assay；the contents of IL-1 and TNF-α were detected by ELISA.RESULTS：Compared with normal control group，cell viability of HUVECs were decreased in Aβ1-42group；while apoptotic rate，protein expression of TLR4 and COX-2，the contents of IL-1 and TNF-α were increased.Compared with Aβ1-42group，cell viability of HUVECs were increased in TAK242 group and butylphthalide low-concentration，medium-concentration and high-concentration groups；while apoptotic rate，protein expression of TLR4 and COX-2，the contents of IL-1 and TNF-α were decreased，with statistical significance（P＜0.05 or P＜0.01）.CONCLUSIONS：Butylphthalide can reduce HUVECs apoptosis induced by Aβ1-42，which may be related with inhibiting the expression of TLR4，COX-2 and inflammatory factors.

Aβ1-42；Human umbilical vein endothelial cells；Cell apoptosis；Mechanism

R361+.3；R967

A

1001-0408（2017）04-0483-04

2016-09-16

2016-10-27）

（編輯：鄒麗娟）

四川省科技廳一般項(xiàng)目（No.2014S20071）；瀘州市科技局科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（No.2013LZLY-J52）

＊主管藥師，碩士研究生。研究方向：分子藥理學(xué)。電話：0830-3162291。E-mail：354699170@qq.com

#通信作者：副教授，碩士。研究方向：分子藥理學(xué)。電話：0830-3162291。E-mail：zhhuozhang100@163.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.04.14