免疫抑制法和免疫熒光定量法在肌酸激酶同工酶活性測(cè)定中的應(yīng)用價(jià)值

陳偉君+++葉昌遠(yuǎn)+++程曉玲

[摘要]目的 探討免疫抑制法和免疫熒光定量法在肌酸激酶同工酶活性測(cè)定中應(yīng)用價(jià)值。方法 選取我院2014年1月～2015年12月收治的70例患者，根據(jù)疾病類型分為甲組及乙組，各35例。甲組為急性心肌梗死患者且發(fā)病時(shí)間在4～8 h，乙組為非心源性疾病且肌酸激酶同工酶（CK-MB）活性升高的患者，分別使用速率法及免疫抑制法測(cè)定兩組患者的肌酸激酶（CK）活性及CK-MB活性，用免疫熒光定量法測(cè)試CK-MB質(zhì)量濃度。結(jié)果 甲組CK活性[（585.0±102.0）U/L]、CK-MB活性[（85.0±22.0）U/L]與CK-MB質(zhì)量濃度[（18.5±2.2）ng/ml]均升高；乙組CK活性正常，CK-MB活性升高，但CK-MB質(zhì)量濃度不升高，結(jié)果不一致。結(jié)論 CK-MB的活性測(cè)定方法一般均為免疫抑制法，但由于方法學(xué)的局限性，可引起測(cè)定結(jié)果假性升高，出現(xiàn)異常升高時(shí)，及時(shí)和臨床取得聯(lián)系，可結(jié)合患者的病情，進(jìn)一步用免疫熒光定量測(cè)定CK-MB的質(zhì)量濃度，為患者提供更準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果。

[關(guān)鍵詞]免疫抑制法；免疫熒光定量法；肌酸激酶同工酶

[中圖分類號(hào)] R446.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2017）02（c）-0118-03

Application value of immunosuppression and immune fluorescence quantitative method in the determination of creatine kinase isoenzyme

CHEN Wei-jun YE Chang-yuan CHENG Xiao-ling

Department of Laboratory，Heyuan Triditional Chinese Hospital in Guangdong Province，Heyuan 517000，China

[Abstract]Objective To explore the application value of immunesuppression and immune fluorescence quantitative method in the determination of creatine kinase isozyme activity.Methods 70 patients in our hospital from January 2014 to December 2015 were selected and divided into two groups according to the disease type，with 35 cases in each group.The A group was acute myocardial infarction （AMI） and the duration was in 4-8 h；the B group was non-cardiac disease and high CK-MB activity.The CK activity and CK-MB activity of patients in two groups were respectively determinated using the velocity method and immunesuppression method，and the quality of CK-MB was determined using immune fluorescence quantitative method.Results The CK activity [（585.0±102.0）U/L]，CK-MB activity [（85.0±22.0） U/L] and quality of CK-MB [（18.5±2.2） ng/ml] of patients in group A were all raised；the CK activity of patients in group B was normal，the CK-MB activity was raised with a inconsistent results that the quality of CK-MB was not raised.Conclusion The method to determinate the CK-MB activity in general is immunesuppression method.But because of the limitation of the methodology，the activity of CK-MB may falsely raise.On this occasion，doctors should combine the clinic and patients′conditions，using the immune fluorescence quantitative method to make further determination of the quality of CK-MB，in order to provide more accurate test results for the patients.

[Key words]Immunesuppression method；Immune fluorescence quantitative method；Creatine kinase isoenzyme臨床上，一般用天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST），乳酸脫氫酶（LDH），α-羥丁酸脫氫酶（α-HBDH），肌酸激酶（CK）和肌酸激酶同工酶（CK-MB）的活性作為心肌酶譜，主要用于確定心肌缺血壞死或細(xì)胞膜的通透性，是衡量心肌受損的指標(biāo)。CK主要存在于骨骼肌、心肌和腦組織中，CK-MB大量存在于心肌組織中，其他組織和器官中含量很少，所以CK-MB是目前診斷急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）的一個(gè)極其可靠的生化指標(biāo)，特異性可達(dá)95%乃至更高[1]。正常情況下，CK-MB/CK應(yīng)<5%，CK-MB升高，≥正常高值的6%，被認(rèn)為是提示心肌損傷的指標(biāo)[2] 。臨床一般用免疫抑制法測(cè)定CK-MB的活性，在心肌酶譜中，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)CK-MB升高，而CK不升高的檢測(cè)結(jié)果，但用免疫熒光定量法測(cè)定CK-MB質(zhì)量濃度時(shí)卻不會(huì)升高。為了探明用免疫抑制法測(cè)定CK-MB活性是否假性增高，特分別采用免疫抑制法和免疫熒光定量法測(cè)定我院收治的患者血清中的CK-MB活性與CK-MB質(zhì)量濃度，進(jìn)行回顧性分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取我院2014年1月～2015年12月收治的70例患者，按照患者疾病類型分組：甲組為AMI患者35例，符合WHO制定的AMI診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]，發(fā)病4～8 h入院，年齡45～72歲。乙組為非心源性疾病患者35例，年齡2～72歲，其中腦外傷5例，兒科患者（年齡為 2～6 歲，所選患兒排除心源性疾?。?0例，惡性腫瘤20例。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者或家屬知情同意。

1.2方法

護(hù)士采集肘靜脈血后立即送我院檢驗(yàn)科，排除溶血、脂血、黃疸的影響。采用速率法測(cè)定CK活性，免疫抑制法測(cè)定CK-MB活性，兩者均使用西門(mén)子全自動(dòng)生化分析儀（型號(hào)ADVIA 1800），試劑、定標(biāo)液及質(zhì)控品均是北京恩劑和生物技術(shù)股份有限公司提供。CK-MB質(zhì)量濃度測(cè)定采用免疫熒光定量法，儀器為南京基蛋生物技術(shù)股份有限公司的免疫熒光定量分析儀（型號(hào)FIA 8000），試劑及校準(zhǔn)品為其配套試劑。對(duì)甲、乙兩組患者進(jìn)行CK活性、CK-MB活性及CK-MB質(zhì)量濃度測(cè)定。CK活性及CK-MB活性分別用速率法及免疫抑制法在全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定，CK-MB質(zhì)量濃度測(cè)定是根據(jù)抗原抗體特異性結(jié)合這一特性，采用免疫熒光定量法測(cè)定。CK活性正常參考區(qū)間為5～200 U/L，CK-MB活性正常參考區(qū)間為0～25 U/L，質(zhì)量濃度正常參考區(qū)間為2.5～5.0 ng/ml。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

甲組35例AMI患者CK活性、CK-MB活性、CK-MB質(zhì)量濃度均升高，其中CK為（585.0±102.0）U/L，CK-MB活性為（85.0±22.0）U/L，CK-MB質(zhì)量濃度為（18.5±2.2）ng/ml，符合AMI的發(fā)病特征，達(dá)到預(yù)期水平；乙組35例患者CK活性在正常范圍，CK-MB活性升高，但CK-MB質(zhì)量濃度在正常范圍。在非心源性疾病患者中，尤其是腦外傷、兒科疾病及惡性腫瘤患者均出現(xiàn)CK-MB活性升高，但CK活性及CK-MB質(zhì)量濃度無(wú)升高現(xiàn)象（表1）。

3討論

作為急性心肌梗死疾病的標(biāo)志物之一的CK-MB，無(wú)論測(cè)定其活性還是質(zhì)量濃度，在診斷AMI中的作用毋庸置疑，所以一直延用至今。本研究反映出采用免疫抑制法測(cè)定CK-MB活性的局限性，在某些疾病上，它可能會(huì)出現(xiàn)假性增高，而用熒光定量法測(cè)定的CK-MB則未出現(xiàn)此現(xiàn)象。其原因分析如下。

CK是由兩種不同亞基（M和B）組成的二聚體，正常人體組織中通常含3種同工酶：CK-BB、CK-MB和CK-MM。其中CK-MB主要存在于心肌中，占15%～40%[4]，在其他組織中幾乎不存在，這在人體中是絕無(wú)僅有的。CK-BB則主要存在于平滑肌、神經(jīng)與腦組織中，其他主要組織器官中含量很低[5]。臨床上大多用免疫抑制法測(cè)定CK-MB活性，其原理為抗M亞單位的抗血清，可以和CK-MM及CK-MB中的M亞單位形成抗原抗體復(fù)合物，從而完全抑制M亞單位的酶活性，因?yàn)檎Ｑ逯袔缀鯚o(wú)CK-BB，故將此值乘以2可以認(rèn)為大致代表CK-MB的活性。由于方法學(xué)的局限并受諸多因素干擾易導(dǎo)致假陽(yáng)性值，甚至出現(xiàn)CK-MB活性假性增高情況。從結(jié)果可知，腦外傷、兒科疾病及惡性腫瘤患者的CK-MB活性都有不同程度的假性升高，究其原因：①腦損傷時(shí)，腦組織中的CK-BB大量釋放入血，此時(shí)采用免疫抑制法測(cè)定CK-MB時(shí)，是測(cè)定的B亞基結(jié)果乘以2得到的，因而出現(xiàn)CK-MB假性升。②由于CK-MT與CK-M亞基抗原性不同，使抗M亞基的抗體不能抑制其活性，因而測(cè)定是總CK活性，后結(jié)果乘以2，因而出現(xiàn)CK-MB假性增高。湯冬玲等[6]報(bào)道，惡性腫瘤患者存在巨CK2，其是線粒體CK（CK-MT）相互聚合成的大分子寡聚體復(fù)合物，存在于膜上，線粒體崩解釋放入血。另有研究表明，當(dāng)腫瘤患者出現(xiàn)CK-BB/總CK>15%時(shí)，是潛在的致命危險(xiǎn)信號(hào)[7]。③由于生理因素的原因，血清中的CK-BB含量與年齡存在一定的關(guān)系，兒童血清中的CK-BB的含量高于成人，成守金等[8]在37℃測(cè)定500名正常兒童，參考值取單側(cè)上限為（X+1.96S）=47.6 U/L。建議臨床對(duì)兒童血清CK-MB活性的測(cè)定，不要直接引用成人標(biāo)準(zhǔn)，以免造成誤診。臨床上引起CK-MB活性假性升高的原因多由于患者血清中存在較多的CK-BB、巨CK、巨CK2的干擾所致[9-11]，另有研究表明，溶血標(biāo)本亦可使CK-MB活性假性升高，而且溶血程度越重CK-MB活性假性升高程度越大[12-13]，這與紅細(xì)胞中含有腺苷酸激酶有關(guān)，此酶可以直接參與CK-MB酶促反應(yīng)，從而引起CK-MB活性假性升高。

CK-MB質(zhì)量濃度測(cè)定采用免疫熒光定量法，其原理是在檢測(cè)卡上包被有熒光標(biāo)記的抗體以及捕獲抗體，當(dāng)試樣加入到檢測(cè)卡時(shí)，熒光標(biāo)記的抗體和樣本中的待測(cè)物結(jié)合，形成抗原抗體復(fù)合物，當(dāng)免疫復(fù)合物層析至檢測(cè)區(qū)時(shí)，與抗CK-MB抗體發(fā)生反應(yīng)。血液中的CK-MB越多，測(cè)試帶的復(fù)合物越多，條帶上的光密度值越高，所以其他同工酶對(duì)它無(wú)影響，故無(wú)假性升高現(xiàn)象出現(xiàn)，因此，用免疫熒光定量法測(cè)定血清CK-MB含量，在靈敏度、特異性及抗干擾等方面均優(yōu)于免疫抑制法測(cè)定血清CK-MB活性，更適用于臨床[14-15]。

綜上所述，免疫抑制法測(cè)定CK-MB的活性簡(jiǎn)單迅速、成本低，適合于基層醫(yī)院開(kāi)展，缺點(diǎn)是特異性差，如患者血清中還存在著CK-BB或者異常CK時(shí)，將出現(xiàn)假性增高，故可作為過(guò)篩實(shí)驗(yàn)，而免疫熒光定量測(cè)定CK-MB時(shí)，特異性高，但其成本相對(duì)較高，基層醫(yī)院運(yùn)用較少。

[參考文獻(xiàn)]

[1]康格非，巫向前.臨床生物化學(xué)和生物化學(xué)檢驗(yàn)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1998：152-156.

[2]王虹，劉石，邢艷琳，等.肌酸激酶同工酶質(zhì)量判定肌病心肌損害的局限性[J].中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué)，2011，23（12）：723-726.

[3]馮丹，曹華軍.心肌標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)在急性心肌梗死早期診斷中的應(yīng)用[J].中國(guó)急救醫(yī)學(xué)，2014，21（9）：840-842.

[4]嚴(yán)偉玲，嚴(yán)春玲，賴在真.小兒患者血清CK-MB檢測(cè)結(jié)果分析及其臨床意義[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2014，24（8）：1137-1139.

[5]葉應(yīng)嫵，王硫三，申子瑜，等.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].3版.南京：東南大學(xué)出版社，2006：736-753.

[6]湯冬玲，李棟，田蒿，等.血清CK-MB活性假性增高原因探討及對(duì)策[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，28（4）：89-93.

[7]于彩云，田豫平，周和平，等.肌酸激酶-MB假性升高原因及與疾病的關(guān)系研究[J].軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊，2002，26（2）：119.

[8]成守金，羅云杰，許風(fēng)清，等.正常兒童血清肌酸激酶同工酶活性參考值[J]中國(guó)煤礦工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志，2004，7（7）：638.

[9]陳建蕓，石玉玲，李林海，等.CK-MB質(zhì)量及其活性檢測(cè)結(jié)果對(duì)比分析[J].華南國(guó)防醫(yī)學(xué)雜志，2010，24（6）：455-467.

[10]李曉，徐宗琴，陳建蕓.血清CK-MB活性大于總CK活性的原因初探及處理[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2010，25（6）：78-82.

[11]彭蘭，張娥，萬(wàn)芳，等.“CK-MB”測(cè)定的干擾現(xiàn)象及實(shí)驗(yàn)對(duì)策[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2011，15（12）：2160-2161.

[12]吳鳳麗，馬曉光，孫玉珍，等.血清CK-MB活力假性增高原因分析及臨床意義[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2007，11（8）：1041-1043.

[13]鄭婉君，鄧敏茹，翁麗.影響肌酸激酶同工酶活性檢測(cè)結(jié)果的因素探討[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2006，27（5）：407.

[14]Lo KR，Hurst SM，Atkinson KR，et al.Development and validation of a sensitive immunoassay for the skeletal muscle isoform of creatine kinase[J].J Sci Med Sport，2010，13（1）：117-119.

[15]Hoshino T，Sakai Y，Yamashita K，et al.Development and performance of an enzymeimmunoassay to detect creatine kinase isoenzyme MB activity using anti-mi-tochondrial creatine kinase monoclonal antibodies[J].Scand J Clin Lab Invest，2009，69（6），687-695.

（收稿日期：2017-01-04 本文編輯：任 念）