酶聯(lián)免疫法檢測(cè)配方奶粉乳鐵蛋白含量研究

麥巧冰+陳杰+李枘枝

摘 要：購(gòu)買進(jìn)口嬰幼兒奶粉是國(guó)人的習(xí)慣，但對(duì)進(jìn)口奶粉的質(zhì)量缺乏正確的認(rèn)識(shí)。為此，采用酶聯(lián)免疫方法對(duì)超市等地銷售的進(jìn)口奶粉中的乳蛋白含量進(jìn)行測(cè)試，乳鐵蛋白是奶粉的主要營(yíng)養(yǎng)成分。我國(guó)相關(guān)法律將乳鐵蛋白定義為嬰兒營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑，具有提高嬰兒免疫力、抗病毒并且促進(jìn)吸收的作用。乳鐵蛋白的特征以及酶聯(lián)免疫法的具體檢測(cè)方法。

關(guān)鍵詞：酶聯(lián)免疫法；嬰幼兒配方奶粉；乳鐵蛋白；進(jìn)口奶粉；研究

中圖分類號(hào)：TB

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

doi：10.19311/j.cnki.16723198.2016.31.090

母乳是嬰兒獲取營(yíng)養(yǎng)最好的方式，母乳中含有一定量的乳鐵蛋白可以確保嬰幼兒健康。但就現(xiàn)狀而言，母乳匱乏。因此奶粉喂養(yǎng)就成為主流，嬰幼兒奶粉的市場(chǎng)巨大。但由于國(guó)內(nèi)奶粉頻頻出現(xiàn)問(wèn)題，國(guó)人購(gòu)買進(jìn)口奶粉的欲望強(qiáng)烈。但進(jìn)口奶粉是否真的安全，還需要數(shù)據(jù)來(lái)證明。以母乳為標(biāo)準(zhǔn)，嬰幼兒奶粉的主要成為應(yīng)為乳鐵蛋白。調(diào)查顯示，很多進(jìn)口奶粉中的乳鐵蛋白含量較低，無(wú)法滿足嬰兒的營(yíng)養(yǎng)的需求。酶聯(lián)免疫法是檢測(cè)奶粉中營(yíng)養(yǎng)成分的主要方法，因此文章采用這一方法對(duì)一定數(shù)量的奶粉進(jìn)行了檢查，并公布了乳鐵蛋白含量。

1 乳鐵蛋白的特征以及酶聯(lián)免疫法

乳鐵蛋白是嬰幼兒哺乳中不可缺少的一種元素，主要成分為非血紅素和天然蛋白糖。人類第一次用固相和液相色譜法分離乳鐵蛋白是在1959年，乳鐵蛋白對(duì)嬰兒的免疫系統(tǒng)強(qiáng)化具體積極意義，同時(shí)能夠抗病毒和促進(jìn)嬰兒吸收。母乳中乳鐵蛋白的含量豐富，用于賴以生存的營(yíng)養(yǎng)元素。但是隨著母乳哺乳水平的降低，奶粉應(yīng)運(yùn)而生。檢驗(yàn)?zāi)谭壑腥殍F蛋白含量是十分重要的，一般要求，乳鐵蛋白的含量要在1-7ml以上才符合要求。隨著社會(huì)對(duì)于乳鐵蛋白的認(rèn)可，在奶粉中添加乳鐵蛋白已經(jīng)成為一種趨勢(shì)，食品中添加乳鐵蛋白也得到法律的支持。我國(guó)在法律上也將乳鐵蛋白定位為奶粉等食物中營(yíng)養(yǎng)的強(qiáng)化劑，并對(duì)含量做出基本要求。我國(guó)主要奶粉進(jìn)口國(guó)包括澳大利亞、新西蘭、荷蘭和瑞士等，這些國(guó)家的奶制品質(zhì)量較高，但由于對(duì)乳鐵蛋白的含量要求不同，因此對(duì)進(jìn)口乳鐵蛋白的檢測(cè)是必要的。目前，我國(guó)應(yīng)用較為廣泛的乳鐵蛋白檢測(cè)方法為免疫擴(kuò)散檢測(cè)法或者酶聯(lián)免疫法。我國(guó)對(duì)于國(guó)外奶粉的檢測(cè)較為嚴(yán)格，對(duì)由于缺乏對(duì)數(shù)量合理性的認(rèn)定，檢測(cè)結(jié)果還存在一定的疑問(wèn)。至2012年起，我國(guó)相關(guān)部門就開(kāi)始對(duì)嬰幼兒奶粉質(zhì)量上提高可關(guān)注，通過(guò)定期試驗(yàn)的方法來(lái)檢測(cè)進(jìn)口嬰幼兒奶粉中的乳鐵蛋白含量，并形成報(bào)告，但唯一的缺陷是，雖然民眾對(duì)于乳鐵蛋白的作用以及進(jìn)口奶粉中乳鐵蛋白含量的要求尚不明確，因此我們以文獻(xiàn)的形式研究檢測(cè)結(jié)果。

2 酶聯(lián)免疫法使用的準(zhǔn)備階段

酶聯(lián)免疫法是目前嬰幼兒配方奶粉營(yíng)養(yǎng)成分檢測(cè)的主要手段，具有較好的效果。檢測(cè)中所使用的樣品為16種市面上熱銷的嬰兒奶粉，本次檢測(cè)主要檢測(cè)奶粉中乳鐵蛋白的含量。產(chǎn)品來(lái)自美國(guó)、新西蘭等16個(gè)國(guó)家，其中奶粉的罐體上都有具體的含量標(biāo)識(shí)，范圍在5～100mg/100g之間，我們通過(guò)該方法檢測(cè)其真實(shí)性。所選的檢測(cè)儀器為全自動(dòng)酶儀包被有抗牛乳鐵蛋白（LT）的特異性多克隆抗體96孔微孔板，配合洗滌液和緩沖溶液，乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)品和乳鐵蛋白-過(guò)氧化物酶結(jié)合物，另外還包括1mol/L磷酸終止液，目的就是檢驗(yàn)出進(jìn)口嬰幼兒配方奶粉中乳鐵蛋白的含量。將溶液稀釋后冷藏于2～8℃之間。稀釋溶液的配置選擇1ml濃縮洗液和4ml蒸餾水，同樣冷藏于2～8℃環(huán)境中。取適量實(shí)驗(yàn)所需的元素，包括氯化鈉、氯化鉀、磷酸鈉等。將其溶于蒸餾水中，并將其調(diào)整微堿性，最后配置成1L的該濃度溶液備用。將奶粉樣品稱好后放于準(zhǔn)備好的容器中，本次實(shí)驗(yàn)稱取質(zhì)量為1.00g的奶粉樣本，將其按照標(biāo)準(zhǔn)稀釋之后進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)后將乳蛋白的含量公布，尤其是對(duì)不符合規(guī)定的產(chǎn)品進(jìn)行懲罰。

3 酶聯(lián)免疫法檢測(cè)方法的實(shí)施

在本次檢測(cè)中，我們采用平行檢測(cè)的方法，將各自100升的溶液加入到微孔中，在不接觸兩種樣品的同時(shí)添加100l酶的結(jié)合物，1h避光孵育后，進(jìn)行3次洗板，在每孔中加入底物100lTMB，室溫控制在（21℃±3℃，孵育時(shí)避光進(jìn)行10min，在每孔中加入終止液50l后，采取酶標(biāo)儀在450nm條件下讀取吸光值。取選取的6種進(jìn)口奶粉各1.0g作為樣品。使用PBS溶液300ml稀釋到要求濃度。本次檢驗(yàn)中的結(jié)果采用標(biāo)準(zhǔn)的曲線顯示，顯示結(jié)果中，有近三成進(jìn)口嬰幼兒配方奶粉的乳鐵蛋白的含量不達(dá)標(biāo)，提醒國(guó)民要注意選取。

4 酶聯(lián)免疫法檢測(cè)進(jìn)口嬰幼兒配方奶粉中乳鐵蛋白含量研究

本次研究我們采取標(biāo)準(zhǔn)曲線法對(duì)16種進(jìn)口奶粉中的乳鐵蛋白進(jìn)行研究和報(bào)告。采用方法為液相色譜法與電泳法相結(jié)合。并以4-參數(shù)法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

在檢測(cè)過(guò)程中，我們?cè)诒敬螌?shí)驗(yàn)過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)不同品牌的奶粉乳鐵蛋白含量具有較大的區(qū)別，即使在同一種產(chǎn)品中，同樣存在不同的乳鐵蛋白含量，因此國(guó)家要加大對(duì)進(jìn)口奶粉的監(jiān)管，要求奶粉罐體必須進(jìn)行產(chǎn)品的標(biāo)注才能上市銷售，并且含量的標(biāo)注必須要真實(shí)。一般稀釋倍數(shù)為400～600倍，將最終標(biāo)注在產(chǎn)品的曲線范圍內(nèi)，若不在范圍內(nèi)，將其再次調(diào)試后再進(jìn)行測(cè)試。本地實(shí)驗(yàn)所采取的方法使常用的方法，由于酶聯(lián)免疫法具有操作簡(jiǎn)單、敏感性高、測(cè)試效果好等特點(diǎn)，但是對(duì)于操作人員的技術(shù)能力具有較高的要求。另外，在嬰幼兒奶粉的測(cè)試過(guò)程中，由于測(cè)試影響因素較多，要正確測(cè)試奶粉中乳鐵蛋白的含量，還要正確配置濃度，采用相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照，測(cè)試過(guò)程要及時(shí)記錄數(shù)據(jù)，對(duì)進(jìn)口奶粉做出最客觀的評(píng)價(jià)。其主要原理是借助了乳鐵蛋白在非酸性條件下受熱或?qū)е率Щ?，通過(guò)測(cè)試過(guò)程中乳鐵蛋白的變化。當(dāng)然，嬰幼兒對(duì)于乳鐵蛋白的需求會(huì)隨著年齡的增長(zhǎng)而減少，因此要進(jìn)口不同種類的奶粉產(chǎn)品，并且制定有關(guān)的規(guī)定。我國(guó)對(duì)嬰幼兒階段奶粉中營(yíng)養(yǎng)成分的含量規(guī)定為不得低于80%。這要求相關(guān)部門加強(qiáng)對(duì)進(jìn)口奶粉的管理，尤其是對(duì)其中主要成分乳鐵蛋白含量的測(cè)試，營(yíng)養(yǎng)成分符合才能進(jìn)口。乳鐵蛋白是嬰幼兒奶粉中必備的元素，由于民眾信任這一點(diǎn)，因此近年來(lái)成為主要的賣點(diǎn)。一般進(jìn)口奶粉將含有乳鐵蛋白的嬰幼兒奶粉視為高級(jí)產(chǎn)品，價(jià)格較高。但在這一過(guò)程中，很多產(chǎn)品借助這一特征打虛假?gòu)V告。購(gòu)買此類產(chǎn)品不僅浪費(fèi)錢財(cái)，而且對(duì)嬰兒的健康造成影響，對(duì)現(xiàn)代人而言，要正確認(rèn)識(shí)嬰幼兒奶粉的營(yíng)養(yǎng)成分，對(duì)相關(guān)部門而言，要進(jìn)一步的進(jìn)行檢測(cè)。

5 總結(jié)

乳鐵蛋白是奶粉中的主要成分，是奶粉的強(qiáng)化劑之一。在購(gòu)買過(guò)程中，很容易按照乳鐵蛋白來(lái)判斷產(chǎn)品的優(yōu)劣。但在這一過(guò)程中，很多顧客并不能清楚的認(rèn)識(shí)這一點(diǎn)，盲目的購(gòu)買國(guó)外產(chǎn)品。不僅造成經(jīng)濟(jì)損失，所購(gòu)買的產(chǎn)品質(zhì)量較低。因此，筆者通過(guò)具體的實(shí)驗(yàn)方式來(lái)檢驗(yàn)嬰幼兒配方奶粉中乳鐵蛋白的含量，使民眾能夠了解奶粉中乳鐵蛋白的真正含量，從而正確選擇奶粉，確保嬰兒的應(yīng)用安全。正確測(cè)試乳鐵蛋白并將之公之于眾是保證我國(guó)公民權(quán)利和安全的主要手段。因此我們對(duì)16種在銷的并且是購(gòu)買量較大的進(jìn)口嬰兒奶粉進(jìn)行了檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果顯示，部分進(jìn)口奶粉中的乳鐵蛋白含量并不在規(guī)定范圍之內(nèi)，我國(guó)目前對(duì)于進(jìn)口奶粉的檢測(cè)相對(duì)嚴(yán)格，但國(guó)際上對(duì)乳鐵蛋白含量的要求與我國(guó)要求有一定的差別，這就要求我國(guó)進(jìn)一步明確食品中，嬰幼兒奶粉中乳鐵蛋白的含量要求，并且增加科研力量，對(duì)中國(guó)嬰兒營(yíng)養(yǎng)成分需求進(jìn)行試驗(yàn)和剖析，并將其公布，要求進(jìn)口奶粉必須標(biāo)注乳鐵蛋白含量，滿足國(guó)人需求。

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