血清ADA水平和T—spot.TB聯(lián)合檢測在肺結(jié)核診斷中的應(yīng)用

張兵+陸彩虹+施美新

[摘要] 目的 探討分析肺結(jié)核診斷中聯(lián)合應(yīng)用血清腺苷脫氨酶（ADA）以及結(jié)核感染T細胞斑點試驗（T-spot.TB）檢測的臨床價值。 方法 隨機選取該院2015年1月—2016年10月收治的140例擬診為肺結(jié)核患者分為治療組（肺結(jié)核患者，70例）和對照組（非肺結(jié)核健康者，70例），對比兩組ADA水平以及T- spot.TB陽性率以及聯(lián)合檢測的靈敏度、特異性等情況。結(jié)果 治療組患者ADA水平顯著高于對照組（P<0.05），治療組患者ADA檢測陽性率（55.7%）、T-spot.TB陽性率（88.6%）顯著高于對照組（15.7%、17.1%）。血清ADA、T-spot.TB平行聯(lián)合檢測可提高對肺結(jié)核診斷靈敏度（91.6%）及陰性預(yù)測值（93.6%），但陽性預(yù)測值、特異性明顯下降，系列聯(lián)合檢測可提高對肺結(jié)核診斷的特異性（94.9%）、陽性預(yù)測值（86.2%），但是靈敏度、陰性預(yù)測值較低。 結(jié)論 肺結(jié)核患者采用血清ADA水平以及T-spot.TB斑點數(shù)聯(lián)合檢測的臨床價值較高，值得推薦。

[關(guān)鍵詞] 肺結(jié)核；血清ADA；T-spot.TB；臨床診斷

[中圖分類號] R52 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-0742（2017）02（a）-0038-03

[Abstract] Objective To discuss the clinical value of combined test of serum ADA level and T-spot.TB in the diagnosis of pulmonary tuberculosis. Methods 140 cases of patients with pulmonary tuberculosis admitted and treated in our hospital from January 2015 to October 2016 were randomly selected and divided into the treatment group （patients with pulmonary tuberculosis， 70 cases） and the control group （patients with non- pulmonary tuberculosis， 70 cases）， and the ADA level， T- spot.TB positive rate and sensitivity and specificity of the combined test were compared between the two groups. Results The ADA level in the treatment group was obviously higher than that in the control group（P<0.05）， the ADA test positive rate and T-spot.TB positive rate in the treatment group were obviously higher than those in the control group（55.7%， 88.6% vs 15.7%， 17.1%）， and the parallel combined test of serum ADA and T-spot.TB could improve the diagnosis sensitivity（91.6%） and negative predictive value（93.6%） of patients， but the positive predictive value and specificity obviously decreased， and the serial combined test can improve the specificity（94.9%） and positive predictive value（86.2%）， but the value was lower. Conclusion The clinical value of combined test of serum ADA level and T-spot.TB spot number for patients with pulmonary tuberculosis is higher， which is worth recommendation.

[Key words] Pulmonary tuberculosis ； Serum ADA； T-spot.TB； Clinical diagnosis

肺結(jié)核是一種感染率、死亡率都非常高的疾病，及早診斷及治療是降低患者死亡率的關(guān)鍵，當(dāng)前臨床主要采用痰培養(yǎng)結(jié)核分枝桿菌陽性的方式診斷肺結(jié)核，但是需要較長時間，不利于早期診斷[1]。痰聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）、痰涂片檢菌、影像學(xué)檢查等手段檢出率低，靈敏度低，很難滿足臨床要求[2]。腺苷脫氨酶（ADA）是一種嘌呤核苷酸代謝產(chǎn)生的水解酶，胸腹水良惡性診斷鑒別中也常應(yīng)用到胸水ADA檢測，結(jié)核感染T 細胞斑點試驗（T-spot.TB）是一種新的肺結(jié)核診斷方法。臨床有學(xué)者研究提出[3]，肺結(jié)核患者聯(lián)合采用ADA、T-spot.TB檢測的效果良好，為此該文回顧性分析了隨機選取該院2015年1月—2016年10月收治的140例擬診為肺結(jié)核患者臨床診斷的相關(guān)資料，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選取該院2015年1月—2016年10月收治的140例擬診為肺結(jié)核患者，現(xiàn)將140例患者分為治療組（70例，肺結(jié)核患者）和對照組（70例，非肺結(jié)核患者），治療組中男41例，女29例；患者年齡20～85歲，平均（40.3±2.1）歲；對照組中男39例，女31例；患者年齡20～85歲，平均（40.2±2.2）歲，兩組患者性別、年齡等一般資料通過統(tǒng)計學(xué)軟件處理分析差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 方法

抽取兩組患者3 mL靜脈血作為標(biāo)本檢測血清ADA水平，抽取6 mL靜脈血（加入肝素抗凝劑）作為標(biāo)本進行T-spot.TB試驗。該次檢測儀器采用日立7180生化分析儀，腺苷脫氨酶檢測試劑盒，4～24 U/L為正常參考值范圍。

T-spot.TB試劑盒，利用Ficoll淋巴細胞分離液、RPMI1640培養(yǎng)液獲取單個血漿核細胞（PBMCs），加入AIM-V培養(yǎng)液配置2.5×105 mL濃度PBMCs備用。在T-spot.TB試劑盒微孔板上分別添加50 uL植物血凝素（PHA）為陽性對照孔，添加50 uL AIM-V培養(yǎng)液為陰性對照孔，A檢測孔為50 uL結(jié)核分枝桿菌特異抗原ESAT-6，B檢測孔為50 uL抗原CFP-10，然后再將100 uL標(biāo)準(zhǔn)溶液加入微孔內(nèi)。將微孔板放置于5%CO2培養(yǎng)箱、37℃條件下孵育15～20 h左右。然后再添加堿性磷酸酶標(biāo)記二抗放置在3～8℃條件下孵育1 h。最后添加底物顯色溶液放置于室溫下孵育5～7 min。利用離子水、蒸餾水將終止反應(yīng)充分洗滌干凈，通過放大鏡觀察并記錄每個孔的顏色斑點。

1.3 評價方式

T-spot.TB檢測陽性：檢測孔抗原A或B斑點數(shù)減去陰性對照孔斑點數(shù)（0～5）在6個以上。陰性：檢測孔抗原A或B斑點數(shù)高于陰性對照孔斑點數(shù)2倍。平行試驗聯(lián)合檢測指血清ADA水平、T-spot.TB試驗中有一項陽性就算聯(lián)合檢測陽性；系列試驗檢測：兩項試驗都是陽性算聯(lián)合檢測陽性。

1.4 統(tǒng)計方法

選用SPSS 21.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，用（x±s）表示血清ADA水平，采用t檢驗，利用χ2檢驗組間率，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者ADA水平檢測對比

治療組患者ADA水平（22.09±6.58）U/L顯著高于對照組（16.89±6.32）U/L，兩組患者ADA檢測水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

2.2 兩組患者血清ADA水平及T-spot.TB檢測陽性率對比

治療組患者ADA檢測陽性率（55.7%）、T-spot.TB陽性率（88.6%）顯著高于對照組（15.7%、17.1%），兩組組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.3 不同檢測方法診斷肺結(jié)核的臨床價值

V 血清ADA檢測診斷肺結(jié)核的特異性較高，高達88.8%，T-spot.TB診斷肺結(jié)核的靈敏度（88.6%）、特異性（83.7%）均比較高。平行聯(lián)合檢測可提高對肺結(jié)核診斷靈敏度（91.6%）及陰性預(yù)測值（93.6%），但陽性預(yù)測值、特異性明顯下降，系列聯(lián)合檢測可提高對肺結(jié)核診斷的特異性（94.9%）、陽性預(yù)測值（86.2%），但是靈敏度、陰性預(yù)測值較低，見表2。

3 討論

人體各組織、細胞中都廣泛存在ADA，而血液ADA集中在淋巴細胞、粒細胞及紅細胞等地方。根據(jù)相關(guān)報道表明[4]，人體淋巴細胞中ADA水平和數(shù)量并沒有很大聯(lián)系，和淋巴細胞激活、分化過程密切相關(guān)，而且T淋巴細胞內(nèi)ADA水平相對于B淋巴細胞高出很多。從發(fā)病機制分析，肺結(jié)核是T淋巴細胞介導(dǎo)產(chǎn)生的一系列細胞免疫。該次研究表明，肺結(jié)核患者血清ADA水平顯著高于非肺結(jié)核患者（P<0.05），這和童學(xué)成等[5]研究報道基本相符。T-spot.TB是一種新的肺結(jié)核診斷手段，實際上屬于γ干擾素釋放試驗（IGRA）檢測技術(shù)，其原理是感染結(jié)核桿菌刺激機體后會生成記憶T淋巴細胞，若結(jié)核桿菌特異抗原再次刺激機體，之前的記憶T淋巴細胞會在短時間內(nèi)快速增殖變成效應(yīng)T淋巴細胞，并且會分泌INF-γ等細胞因子將巨噬細胞激活，促進T淋巴細胞增殖[6-9]。T-spot.TB試驗主要是熒光標(biāo)記T淋巴細胞（釋放INF-γ）判斷結(jié)核桿菌感染。該次實驗表明，T-spot.TB診斷肺結(jié)核的靈敏度（88.6%）、特異性（83.7%）均比較高，這和楊斌等[10]研究報道基本一致。采用平行聯(lián)合檢測靈敏度提高至91.6%，系列聯(lián)合檢測特異性提高至94.6%。僅僅采用T-spot.TB檢測陽性患者因為體內(nèi)長期存在記憶T細胞，并不能診斷患者是不是活動性肺結(jié)核，與血清ADA聯(lián)合檢測可有效提高檢出率。

綜上所述，肺結(jié)核患者采用血清ADA水平以及T-spot.TB斑點數(shù)聯(lián)合檢測的臨床價值較高，值得推薦。

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（收稿日期：2016-11-06）

[作者簡介] 張兵（1973.12-），男，江蘇啟東人，本科，副主任技師，研究方向：從事臨床檢驗工作。