母兔球海綿體括約肌反射波形及其在急性骶髓缺血后的變化

楊汶川，劉學(xué)鍵，邰茂眾，武宜雷，陳香利

(臨沂市第三人民醫(yī)院，山東臨沂276001)

母兔球海綿體括約肌反射波形及其在急性骶髓缺血后的變化

楊汶川，劉學(xué)鍵，邰茂眾，武宜雷，陳香利

(臨沂市第三人民醫(yī)院，山東臨沂276001)

目的 觀察母兔球海綿體括約肌反射(BCR)的波形，并分析其在急性骶髓缺血后的變化特點(diǎn)。方法 18只母兔隨機(jī)分為3組，預(yù)實(shí)驗(yàn)組(n=6)用于確定最佳刺激強(qiáng)度及排除麻醉和手術(shù)對(duì)BCR的影響；對(duì)照組手術(shù)分離腰動(dòng)脈而不結(jié)扎腰動(dòng)脈，實(shí)驗(yàn)組(n=6)結(jié)扎左腎動(dòng)脈和動(dòng)脈分叉間5條腰動(dòng)脈建立骶髓缺血損傷動(dòng)物模型，腰動(dòng)脈結(jié)扎后連續(xù)記錄BCR波形2 h,觀察BCR波在急性骶髓缺血后的變化特點(diǎn)，分別記錄腰動(dòng)脈結(jié)扎后2 h和2 d的BCR波形，2 d后取骶髓HE染色鏡下觀察。結(jié)果 對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組手術(shù)前均記錄到穩(wěn)定的BCR波，潛伏期(11.5±1.5)ms，波幅(261.2±275.3)μV；實(shí)驗(yàn)組骶髓缺血后可見(jiàn)波幅即刻開(kāi)始降低、潛伏期即刻開(kāi)始延長(zhǎng)，經(jīng)(0.67±0.40)min后波幅完全消失，實(shí)驗(yàn)組手術(shù)后2 d波幅與基線的比值是0，低于對(duì)照組(99.2%±3.8%)(P<0.05)。結(jié)論 母兔可以記錄到穩(wěn)定的BCR波形，急性骶髓缺血后BCR波幅降低、潛伏期延長(zhǎng)。

骶髓缺血；球海綿體括約肌反射；母兔

女性球海綿體括約肌反射(BCR)由脊髓骶段和骶神經(jīng)傳入和傳出神經(jīng)支持[1]，可以通過(guò)臨床體檢或電生理方法引出。臨床體檢女性BCR指通過(guò)刺激膀胱三角區(qū)(刺激女性陰蒂或牽拉導(dǎo)尿管)引起肛門(mén)括約肌收縮。電生理方法是通過(guò)電刺激陰蒂的游離神經(jīng)末稍，在肛門(mén)外約肌、球海綿體肌等盆底肌群上記錄電活動(dòng)。女性BCR可以用于診斷骶髓、骶神經(jīng)根部病變[2]。近期研究表明，BCR對(duì)于女性神經(jīng)源性的性功能障礙有診斷價(jià)值[3]。2016年1～7月，本課題研究了母兔正常BCR及在急性骶髓缺血性損傷后的變化，為臨床研究女性骶髓和骶神經(jīng)的功能提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、試劑及儀器 健康新西蘭大白兔18只，均為雌性，體質(zhì)量3.0～3.5 kg，購(gòu)自上海市松江區(qū)松聯(lián)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物場(chǎng)，合格證編號(hào)：2007001102985。EOCHXP神經(jīng)電生理監(jiān)測(cè)設(shè)備購(gòu)自美國(guó)Axon sytem公司；3%的戊巴比妥鈉購(gòu)自中國(guó)醫(yī)藥上?；瘜W(xué)試劑公司，批號(hào)F200220915。

1.2 分組及處理 采用隨機(jī)區(qū)組法將大白兔隨機(jī)分為預(yù)實(shí)驗(yàn)組、實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各6例。預(yù)實(shí)驗(yàn)組給予1～20 mA不同強(qiáng)度的刺激,明確最適刺激強(qiáng)度；麻醉后的3 h內(nèi)每30 min記錄一組BCR,連續(xù)刺激記錄3 h，排除麻醉對(duì)BCR的影響；按照文獻(xiàn)[4]步驟行手術(shù)操作，分離出腰動(dòng)脈而不結(jié)扎腰動(dòng)脈，在手術(shù)前和手術(shù)后不同時(shí)間內(nèi)記錄BCR以排除手術(shù)對(duì)誘發(fā)電位的影響。實(shí)驗(yàn)組：按照文獻(xiàn)[4]步驟沿尾頭方向順序結(jié)扎左腎動(dòng)脈和動(dòng)脈分叉間的5條腰動(dòng)脈，腰動(dòng)脈結(jié)扎后連續(xù)記錄BCR，觀察急性骶髓缺血后BCR的變化特點(diǎn)，并記錄BCR穩(wěn)定后的波形與基線比值，術(shù)后2 d復(fù)查BCR，2 d后取骶髓He染色鏡下觀察。對(duì)照組麻醉后行手術(shù)分離腰動(dòng)脈后連續(xù)記錄BCR，術(shù)后2 d復(fù)查BCR，2 d后取骶髓He染色鏡下觀察。

1.3 母兔BCR的刺激和記錄方法 刺激電極陰極為刺激端固定兔陰蒂，陽(yáng)極為參考電極，固定在兔一側(cè)大陰唇。記錄電極的安放：記錄電極陰性端固定肛門(mén)外括約肌，參考電極固定在同側(cè)肛門(mén)外括約肌，其間距離約5 mm，中間接地。參數(shù)設(shè)置：刺激強(qiáng)度6～12 mA，單或雙脈沖自動(dòng)刺激，刺激頻率 1 Hz，刺激間期 0.3 ms。記錄參數(shù)：顯示靈敏度10～1 000 μV/div，時(shí)間基線5 ms/div，帶通濾波范圍1～4 000 Hz；每次平均10個(gè)信號(hào)，信號(hào)分析時(shí)間50 ms；陷波濾波器50 Hz關(guān)閉。

2 結(jié)果

2.1 預(yù)實(shí)驗(yàn)組不同時(shí)間波幅和潛伏期比較 在預(yù)實(shí)驗(yàn)組給予從小到大逐漸遞增的刺激,可見(jiàn)BCR的潛伏期逐漸縮短,波幅逐漸增高,當(dāng)刺激強(qiáng)度到達(dá)6～12 mA時(shí)潛伏期和波幅不再變化，為最佳刺激強(qiáng)度；預(yù)實(shí)驗(yàn)組麻醉后30、60、90、120、150、180 min BCR波幅分別為 (109.5±80.9)、(107.9±79.4)、(92.6±49.7)、(110.3±80.9)、(110.3±82.4)、(109.2±79.5)μV，潛伏期分別為(11.2±1.9)、(11.2±2.0)、(11.3±1.8)、(11.4±2.0)、(11.1±1.9)、(11.2±1.8)ms。不同時(shí)間比較，P均>0.05。手術(shù)結(jié)扎前、手術(shù)后30 min 、手術(shù)后2 d BCR波幅分別為 (109.5±80.9)、(108.8±80.6)、(110.2±82.7)μV，潛伏期分別為(11.2±1.9)、(11.3±1.9)、(11.3±1.9)ms。不同時(shí)間比較，P均>0.05。

2.2 麻醉后各組誘發(fā)電位的波形及其測(cè)量正常值 動(dòng)物麻醉后均獲得了理想的波形，典型的BCR波形為二相波或多相波。手術(shù)結(jié)扎前對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組BCR的潛伏期為(11.5±1.5)ms，波幅為(261.2±275.3)μV。

2.3 兩組BCR波幅和潛伏期的變化 實(shí)驗(yàn)組血管結(jié)扎后可見(jiàn)BCR波幅即刻開(kāi)始降低，潛伏期即刻開(kāi)始延長(zhǎng)，經(jīng)(0.67±0.4)min后波幅完全消失。對(duì)照組手術(shù)前、手術(shù)后2 d波幅與基線波幅比值分別為 100.0%、99.2%±3.8 %，實(shí)驗(yàn)組分別為100.0%。兩組手術(shù)后比較，P<0.05。

2.4 骶髓病理切片組織形態(tài)學(xué)結(jié)果 光鏡可見(jiàn)對(duì)照組正常脊髓組織結(jié)構(gòu)完整,神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)正常，實(shí)驗(yàn)組脊髓正常結(jié)構(gòu)基本消失,脊髓廣泛充血腫脹,出現(xiàn)大量的空泡變性,正常神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量較少,大多數(shù)神經(jīng)細(xì)胞核萎縮或溶解,胞質(zhì)呈嗜伊紅染色,胞質(zhì)中尼氏體消失。

3 討論

常用女性骶髓和骶神經(jīng)功能的電生理檢查方法包括：①陰部皮層、陰部骶髓體感誘發(fā)電位：通過(guò)刺激女性陰蒂背部感覺(jué)神經(jīng)末梢，神經(jīng)沖動(dòng)經(jīng)脊髓最終傳入感覺(jué)皮層生殖區(qū)，在皮層或骶髓記錄到的波形即陰部皮層、陰部骶髓體感誘發(fā)電位 ，其潛伏期即為神經(jīng)沖動(dòng)傳導(dǎo)時(shí)間，人類來(lái)自陰部的感覺(jué)刺激經(jīng)陰部神經(jīng)感覺(jué)纖維傳入至脊髓(S3～L1)后,主要經(jīng)薄束和脊髓丘腦束傳至丘腦,從丘腦投射到腦間裂內(nèi)側(cè)的陰部感覺(jué)投射區(qū)。該通路功能的正常與否,可以通過(guò)陰部皮層及陰部骶髓誘發(fā)電位來(lái)評(píng)價(jià)，對(duì)陰部神經(jīng)功能障礙作出定位、定性診斷及鑒別診斷有一定意義。②生殖皮層及生殖骶髓運(yùn)動(dòng)誘發(fā)電位：尿生殖運(yùn)動(dòng)皮層位于尿生殖感覺(jué)投射區(qū)附近，由尿生殖運(yùn)動(dòng)皮層發(fā)出纖維，主要經(jīng)椎體束和皮質(zhì)脊髓束下行至骶髓灰質(zhì)前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元,后者發(fā)出的纖維經(jīng)陰部神經(jīng)支配到周圍效應(yīng)器官。該通路的意義在于收縮陰部肌肉，該通路功能的正常與否同樣對(duì)陰部神經(jīng)功能障礙作出的定位、定性診斷和鑒別診斷有一定意義。③BCR：主要由脊髓骶段和骶神經(jīng)傳入和傳出神經(jīng)支持，能夠同時(shí)反映脊髓骶段、骶神經(jīng)傳入和傳出神經(jīng)功能 ，對(duì)于女性陰部神經(jīng)功能障礙作出定位、定性診斷和鑒別診斷有一定意義。以上各檢查指標(biāo)各有特點(diǎn) ，其中陰部皮層、陰部骶髓體感誘發(fā)電位主要反映陰部傳入神經(jīng)到骶髓及骶髓到感覺(jué)皮層生殖區(qū)功能；生殖皮層及生殖骶髓運(yùn)動(dòng)誘發(fā)電位主要反映尿生殖運(yùn)動(dòng)皮層到脊髓及骶髓到骶神經(jīng)傳出段的功能；本實(shí)驗(yàn)所研究的BCR主要反映脊髓骶段、骶神經(jīng)傳入和傳出神經(jīng)功能。

女性BCR感覺(jué)傳入神經(jīng)通路由遠(yuǎn)端向近端傳導(dǎo)，由陰蒂背神經(jīng)、陰部神經(jīng)、骶神經(jīng)叢、骶神經(jīng)根構(gòu)成，軀體運(yùn)動(dòng)傳出通路由近端向遠(yuǎn)端傳導(dǎo)，由骶髓神經(jīng)元細(xì)胞、骶神經(jīng)根、骶神經(jīng)叢、陰部神經(jīng)及效應(yīng)器管構(gòu)成，主要用于評(píng)估較低的骶部神經(jīng)反射的完整性，測(cè)量電生理刺激BCR的潛伏期，最早用于確定是否是神經(jīng)源性的原因?qū)е铝巳祟惏螂啄虻馈⒏啬c功能障礙 ，這種檢查對(duì)于骶部神經(jīng)系統(tǒng)疾病的鑒別診斷及幫助診斷病變的定位、定性、嚴(yán)重程度的評(píng)估有重要價(jià)值 。BCR還可以用于鑒別骶神經(jīng)功能障礙是上運(yùn)動(dòng)神經(jīng)源性損傷還是下運(yùn)動(dòng)神經(jīng)源性損傷，當(dāng)BCR的潛伏期延長(zhǎng)和波形降低或消失意味著下運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元性損傷，患者可出現(xiàn)排尿和排便功能障礙，包括馬尾神經(jīng)神經(jīng)源性損傷；在慢性上運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元損傷患者，可以記錄到更活躍BCR反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)電刺激母兔陰蒂背部感覺(jué)神經(jīng)在兔肛門(mén)外括約肌記錄BCR,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明電刺激母兔陰蒂背部感覺(jué)神經(jīng)在兔肛門(mén)外括約肌上可以記錄到穩(wěn)定的BCR波形，實(shí)驗(yàn)結(jié)果還表明BCR波對(duì)于急性骶髓缺血性損傷非常敏感，可以即刻對(duì)骶髓的缺血性損傷做出反應(yīng)，表現(xiàn)為潛伏期延長(zhǎng)及波幅降低至消失。

總之，目前，醫(yī)學(xué)上對(duì)女性神經(jīng)源性性功能障礙、女性盆底括約肌功能障礙的神經(jīng)系統(tǒng)定位診斷等方面的研究仍然存在空白。選用一種既敏感又具特異性的檢測(cè)方法用于女性盆底括約肌功能障礙定性、定位診斷,尤其是周圍神經(jīng)和中樞神經(jīng)的鑒別診斷及器質(zhì)性和功能性疾病的鑒別診斷是當(dāng)今神經(jīng)科學(xué)臨床亟待解決的問(wèn)題。而女性骶髓和骶神經(jīng)功能電生理研究對(duì)解決上述問(wèn)題具有較大的幫助。

[1] Skinner SA, Vodu?ek DB. Intraoperative recording of the bulbocavernosus reflex[J]. J Clin Neurophysiol, 2014,31(4):313-322.

[2] Vodu?ek DB. The role of clinical neurophysiology in urogynecology[J]. Int Urogynecol J, 2011,22(12):1473-1437.

[3] Pelliccioni G, Piloni V, Sabbatini D, et al. Sex differences in pudendal somatosensory evoked potentials[J]. Tech Coloproctol, 2014,18(6):565-569.

[5]宋啟民,費(fèi)昶，楊衛(wèi)忠，等.不完全性脊髓缺血損傷動(dòng)物模型的建立及價(jià)值[J].中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志,2011,10(10):989-992.

[6] Rapidi CA. Re: pudendal somatosensory evoked potentials in normal women[J]. Int Braz J Urol, 2008,34(1):98.

[7] Niu X, Shao B, Ni P, et al. Bulbocavernosus reflex and pudendal nerve somatosensory-evoked potentials responses in female patients with nerve system diseases[J]. J Clin Neurophysiol, 2010,27(3):207-211.

[8] de Aguiar Cavalcanti G, Manzano GM, Nunes KF, et al. Electrophysiological evaluation of the pudendal nerve and urethral innervation in female stress urinary incontinence[J]. Int Urogynecol J, 2013,24(5):801-807.

[9] Rao SS, Coss-Adame E, Tantiphlachiva K, et al. Translumbar and transsacral magnetic neurostimulation for the assessment of neuropathy in fecal incontinence[J]. Dis Colon Rectum, 2014,57(5):645-652.

[10] Tantiphlachiva K, Attaluri A, Valestin J, et al. Translumbar and transsacral motor-evoked potentials: a novel test for spino-anorectal neuropathy in spinal cord injury[J]. Am J Gastroenterol, 2011,106(5):907-914.

[11] Granata G, Padua L, Rossi F,et al. Electrophysiological study of the bulbocavernosus reflex: normative data[J]. Funct Neurol,2013,28(4):293-295.

[12] 朱廣友,鄭崇達(dá),沈彥,等.陰部神經(jīng)誘發(fā)電位研究[J].法醫(yī)學(xué)雜志,1993,9(3):117-121.

[13] Podnar S. Neurophysiologic studies of the sacral reflex in women with "non-neurogenic" sacral dysfunction[J]. Neurourol Urodyn, 2011,30(8):1603-1608.

[14] Laudano MA, Chughtai B, Lee RK, et al. Use of the Bulbocavernosus Reflex System in assessing voiding dysfunction[J].World J Urol, 2013,31(6):1459-462.

[15] Damphousse M, Jousse M, Verollet D, et al. Evidence of pudendal neuropathy in Proctalgia Fugax: perineal neurophysiological assessment in 55 patients[J]. Prog Urol, 2012,22(4):220-224.

山東醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展計(jì)劃面上項(xiàng)目(2015WS0375)。

劉學(xué)鍵(E-mail:liuxj168@sina.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.29.012

R741

A

1002-266X(2017)29-0038-03

2017-02-03)