豬瘟疫苗研究進(jìn)展

李春雪，馬忠華

（哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司，哈爾濱 150069）

豬瘟疫苗研究進(jìn)展

李春雪，馬忠華

（哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司，哈爾濱 150069）

豬瘟疾病對(duì)我國(guó)豬養(yǎng)殖業(yè)的危害很大，目前主要通過(guò)接種疫苗的方法來(lái)防控豬瘟疾病，然而我國(guó)常用的豬瘟兔化弱毒疫苗經(jīng)常出現(xiàn)免疫失敗的現(xiàn)象，因此急需研制新型疫苗來(lái)代替。文章對(duì)豬瘟疫苗研究進(jìn)展作以綜述。

豬瘟；疫苗；研究進(jìn)展

豬瘟（CSF）是一種傳染性疾病，由豬瘟病毒引起，流行廣，發(fā)病率及死亡率高，是目前危害我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的主要疫病之一[1]。并且出現(xiàn)了一些非典型的豬瘟癥狀，這類(lèi)豬瘟表現(xiàn)為潛伏期比較長(zhǎng)、臨床癥狀并不典型、發(fā)病率和死亡率相對(duì)也比較低，因此常常被養(yǎng)殖人員忽略，從而造成損失。而且近幾年伴隨著仔豬先天感染、免疫無(wú)效、母豬的持續(xù)性感染等現(xiàn)象，表明我國(guó)豬瘟的流行越來(lái)越復(fù)雜，豬瘟的防控工作也越來(lái)越艱巨[1]。接種疫苗是控制豬瘟的主要途徑，國(guó)內(nèi)外學(xué)者在研制豬瘟疫苗方面都做了大量工作。

1 弱毒疫苗

豬瘟弱毒疫苗能夠較快的產(chǎn)生抗體，且抗體持久，在免疫的過(guò)程中能夠減少外源病毒的污染，使免疫效果相對(duì)穩(wěn)定，因此豬瘟弱毒疫苗是豬瘟防控過(guò)程中最常用的。但是由于在生產(chǎn)過(guò)程中，該毒株被用于接種不同的原代和傳代細(xì)胞，使得不同廠家生產(chǎn)的疫苗在免疫原性上存在一定差異，病毒毒力也發(fā)生了變異。目前，有三大品系的弱毒疫苗株是被主要推廣使用的，依次為我國(guó)的“54-HI系”，就是生產(chǎn)常用的“C株”兔化弱毒疫苗、日本的GPE-細(xì)胞弱毒疫苗和法國(guó)的“Thiveosal”冷變異毒株。周泰沖等在1954年將石門(mén)系豬瘟病毒在家兔上接種，通過(guò)篩選，培養(yǎng)出了一株世界公認(rèn)的免疫原性和安全型都非常好的疫苗株，這株兔化弱毒即保持了HCV的免疫原性，而且對(duì)豬基本沒(méi)有毒力。中國(guó)獸藥監(jiān)察所等單位在2008年研制出了新一代豬瘟弱毒疫苗——豬瘟活疫苗，獲得了農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)生產(chǎn)，該疫苗就是用豬瘟兔化弱毒接種傳代細(xì)胞生產(chǎn)的[3]。

2 滅活疫苗

以滅活結(jié)晶紫疫苗為代表的豬瘟滅活疫苗主要應(yīng)用于20世紀(jì)40～50年代，在早期的豬瘟疾病防控中，滅活疫苗起到了非常積極的作用，因?yàn)槠湎鄬?duì)安全性較高。但由于該類(lèi)疫苗的免疫期短，保護(hù)力不足，而且在組織培養(yǎng)中病毒滴度低，滿足不了制造疫苗過(guò)程中有效抗原的數(shù)量，后期逐漸被其他類(lèi)豬瘟疫苗所替代[4]。

3 新型疫苗

3.1 基因工程亞單位疫苗

是利用DNA重組技術(shù)，將病原體基因與適當(dāng)質(zhì)?；虿《据d體重組后導(dǎo)入受體，使特定的多肽在受體中得到高效表達(dá)，提取這種特定多肽，加入佐劑制成的疫苗。Hulst等在1993年研究出了能夠穩(wěn)定表達(dá)出CSFv E2蛋白的重組病毒，并用20～ 100 μg的表達(dá)蛋白接種體檢豬，結(jié)果免疫組可抵抗100LD50的豬瘟強(qiáng)毒攻擊，并且對(duì)產(chǎn)生的中和抗體水平進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果比由弱毒疫苗免疫產(chǎn)生的抗體水平要高的多。Moormann等對(duì)CSFv E2糖蛋白亞單位疫苗的免疫效果和穩(wěn)定性進(jìn)行了研究，結(jié)果顯示，此種疫苗能夠有效防控CSFv感染。董炳梅等研究發(fā)現(xiàn)，CSFv E2的糖基化修飾能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生又快又持久的抗體保護(hù)，而且還具有良好的免疫記憶。另外，由于接種該種疫苗后，機(jī)體不能產(chǎn)生除E2蛋白以外的抗體，所以可以以此對(duì)疫苗免疫和野毒感染進(jìn)行鑒別。用CSFv的E0蛋白作為抗原刺激機(jī)體，如果為野毒感染豬，就會(huì)產(chǎn)生針對(duì)E0的抗體，如果為疫苗免疫豬就不會(huì)產(chǎn)生這種抗體，因此該疫苗還可作為標(biāo)記性疫苗使用[5]。然而，由于只有一種免疫原，造成其免疫原性比全病毒相對(duì)較差，產(chǎn)生保護(hù)性抗體需要的時(shí)間也較長(zhǎng)，并且需要相對(duì)較高的研發(fā)費(fèi)用。

3.2 核酸疫苗

核酸疫苗又稱(chēng)DNA疫苗或基因疫苗，是20世紀(jì)90年代科學(xué)家研究出的一種新型疫苗。核酸疫苗是將克隆了目的蛋白的編碼基因的表達(dá)質(zhì)粒注入到動(dòng)物體內(nèi)，使其在動(dòng)物體內(nèi)表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)抗原，進(jìn)而刺激免疫反應(yīng)。核酸疫苗的優(yōu)點(diǎn)是既能夠刺激體液免疫反應(yīng)，又可以刺激細(xì)胞免疫反應(yīng)[6]。并且可以通過(guò)一次免疫產(chǎn)生終身免疫，還能有效地解決母源抗體干擾的問(wèn)題。但該種疫苗還不夠完善，有其特有的問(wèn)題需要解決。

研究人員構(gòu)建了4種含CSFv E2基因的真核表達(dá)質(zhì)粒，分別轉(zhuǎn)染BHK21細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)只有2種分泌E2抗原，將這兩種分泌E2抗原的質(zhì)粒在豬體上進(jìn)行免疫攻毒實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示只有一種能夠達(dá)到100%的保護(hù)效果，另一種保護(hù)效果相對(duì)較差。近來(lái)科學(xué)家們研制出了一種新的核酸疫苗——DNA復(fù)制子疫苗，用甲病毒作為載體，構(gòu)建出了一種新型的核酸疫苗質(zhì)粒，這種質(zhì)粒能夠穩(wěn)定表達(dá)CSFv E2蛋白。利用這種質(zhì)粒對(duì)實(shí)驗(yàn)豬進(jìn)行免疫攻毒實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，免疫豬能夠產(chǎn)生特異性抗體，并且在攻毒后能夠達(dá)到很好的保護(hù)效果。

3.3 基因缺失疫苗

基因缺失疫苗就是通過(guò)基因工程技術(shù)，使毒株缺失或替換某些與病毒復(fù)制無(wú)關(guān)但與病毒毒力相關(guān)的基因，使其保持復(fù)制能力和免疫原性，但毒力降低[7]。CSFv基因缺失疫苗就是利用這種技術(shù)研制的新型基因工程疫苗。

研究者首先構(gòu)建了C-株E0缺失突變株：FL22株（缺66個(gè)氨基酸）和FL23株（缺215個(gè)氨基酸）。此種突變體疫苗無(wú)感染性，不引起病毒傳播，安全性好[8]。分別用兩個(gè)突變株對(duì)實(shí)驗(yàn)豬進(jìn)行免疫攻毒試驗(yàn)，結(jié)果表明，免疫豬在致死量CSFVBrescia株強(qiáng)毒的攻擊下得到100%保護(hù)，且可以通過(guò)E0的缺失鑒別感染豬和免疫豬。還有研究人員等分別構(gòu)建了缺失Npro基因的CSFv Alfort/187（中等毒力株）和Eystrup株（強(qiáng)毒株），結(jié)果表明，這兩株病毒的毒力比基因缺失前大大的降低了，但其復(fù)制能力和基因缺失前相比并無(wú)差別[9]。免疫攻毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，這兩株基因缺失疫苗在致死劑量的強(qiáng)毒攻擊下均能對(duì)免疫豬產(chǎn)生較好的保護(hù)作用。

3.4 活載體疫苗

病毒活載體疫苗的本質(zhì)就是雜合病毒，其能夠同時(shí)包含兩種甚至更多病毒的基因組信息，并且通過(guò)載體基因組的轉(zhuǎn)錄復(fù)制元件介導(dǎo)目的蛋白的轉(zhuǎn)錄與翻譯，從而同時(shí)防控兩種甚至多種疾病。目前痘病毒和偽狂犬病毒作為病毒載體是研究最多的，其他作為候選還有腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒等。

有研究構(gòu)建了能夠表達(dá)CSFv石門(mén)株E0基因的重組雞痘病毒，將該重組病毒對(duì)小鼠進(jìn)行試驗(yàn)，腹腔接種3次，用ELISA檢測(cè)小鼠血清抗體，其滴度高達(dá)1 ? 4 096，對(duì)豬進(jìn)行3次免疫之后，進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，結(jié)果免疫組保護(hù)率達(dá)75%[10]。有研究構(gòu)建了能表達(dá)CSFV E2蛋白的gD、gE雙缺失的偽狂犬病毒重組疫苗，免疫接種試驗(yàn)結(jié)果表明，該活載體疫苗對(duì)豬進(jìn)行免疫后，免疫豬同時(shí)獲得了偽狂犬病和CSF的雙重保護(hù)[11]。將CSFV E2蛋白基因插入人5型腺病毒中構(gòu)建重組疫苗，并進(jìn)行鑒定，其免疫小鼠后，經(jīng)檢測(cè)小鼠可產(chǎn)生CSFv抗體。因大載量的外源基因、高表達(dá)效率、對(duì)人無(wú)害等優(yōu)點(diǎn)，偽狂犬病毒已逐漸突顯出優(yōu)越的應(yīng)用前景。但由于未接種過(guò)痘苗的人群在接種痘病毒載體后會(huì)造成感染，因此限制了痘病毒重組疫苗的應(yīng)用。且由于腺病毒存在潛在的生物安全問(wèn)題——可致人感染，因此使腺病毒作為疫苗載體的應(yīng)用受到了限制。

4 展望

目前最有效的預(yù)防豬瘟方法就是疫苗免疫，但是由于豬瘟復(fù)雜的流行情況及非典型性的臨床癥狀導(dǎo)致預(yù)防疾病變得越來(lái)越困難。新型豬瘟疫苗的研究也成為了當(dāng)務(wù)之急。雖然目前大多數(shù)新型豬瘟疫苗的研究仍處于試驗(yàn)階段，但就目前研究情況來(lái)看有理由相信不久的將來(lái)會(huì)有更多安全可靠、使用方便、免疫確實(shí)的新型豬瘟疫苗誕生。

[1]陳田梅,王榮祥.豬瘟防制中存在的問(wèn)題和對(duì)策[J].畜牧與飼料科學(xué),2009,1:111-113.

[2]王海光.豬瘟兔化弱毒ST傳代細(xì)胞源疫苗效檢替代方法和豬瘟病毒鑒別檢測(cè)方法的建立[D].北京:中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所, 2013.

[3]胡鴻惠,婁高明.豬瘟疫苗研究進(jìn)展[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2012,4: 196-200.

[4]杜勐侃.規(guī)模豬場(chǎng)豬瘟免疫效果分析及防治技術(shù)研究[D].杭州:浙江大學(xué),2013.

[5]李群,顧秀萍.豬瘟基因工程疫苗研究進(jìn)展[J].國(guó)外畜牧學(xué)-豬與禽,2014,11:72-73.

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[7]沈中華.豬瘟RT-PCR診斷及抗體監(jiān)測(cè)研究[D].蘭州:甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué),2004.

[8]賈洪林,仇華吉,李娜.新型豬瘟疫苗研究現(xiàn)狀[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào),2005,4:312-316.

[9]李娜.基于甲病毒復(fù)制子載體的豬瘟DNA疫苗的構(gòu)建及免疫效力評(píng)價(jià)[D].哈爾濱:東北農(nóng)業(yè)大學(xué),2007.

[10]張浩,郭抗抗,張彥明.表達(dá)豬瘟病毒E0、E2基因重組雞痘病毒的遺傳穩(wěn)定性[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版, 2008,8:36-40.

[11]呂素芳,郭廣君,魏鳳.重組偽狂犬病病毒疫苗的研究進(jìn)展[J].鄭州牧業(yè)工程高等專(zhuān)科學(xué)校學(xué)報(bào),2008,3:17-21.

Research Progress of Classical Swine Fever Vaccine

LI Chunxue,MA Zhonghua

（Harbin Pharmaceutical Group Biovaccine Co.Ltd.,Harbin,Heilongjiang,150069）

The diseases of classical swine fever have great harm to the pig breeding industry in China.Currently, the main method is vaccination to prevent and control the disease of classical swine fever.However,the phenomenon of immune failure often occurs in the commonly used of the Lapinized Chinese Strain of Classical Swine Fever Virus in China.Therefore,it is urgent to develop new vaccines to replace.This paper summaried the development of classical swinefevervaccine.

classical swine fever;vaccine;research progress

S 828；S852.65+1

A

1001-0084（2017）05-0034-03

2017-04-19

李春雪（1988-），女，山東禹城人，碩士，研究方向?yàn)樨i瘟疫苗及菌苗的檢驗(yàn)。