冰凍與石蠟切片檢測HER-2的對比探討

陳曉童

(玉林市第一人民醫(yī)院病理科，廣西 玉林 537000)

冰凍與石蠟切片檢測HER-2的對比探討

陳曉童

(玉林市第一人民醫(yī)院病理科，廣西 玉林 537000)

目的 探討冰凍剩余石蠟切片以及冰凍切片兩種不同切片檢測乳腺癌患者人類表皮生長因子受體-2(HER-2)的效果，并進行對比分析。方法 選擇2014年3月至2016年3月乳腺癌患者45例，取每個患者送檢的組織，制作為冰凍切片，冰凍剩余的作石蠟切片。2種切片均進行免疫組織化學(xué)染色，檢測HER-2的蛋白表達。結(jié)果 HER-2檢測結(jié)果中冰凍切片組陽性信號強于石蠟切片組，冰凍切片更能真實清晰地表達HER-2。結(jié)論 在對乳腺癌患者HER-2檢測時，冰凍切片觀察效果較好。

HER-2； 冰凍剩余石蠟切片； 冰凍切片

人類表皮生長因子受體-2(HER-2)是人類17號染色體上的原癌基因，是乳腺癌患者重要的預(yù)后以及HER-2靶向藥物治療的預(yù)測指標，經(jīng)研究顯示，HER-2陽性的患者腫瘤惡性程度比較大，且治療效果相對較差，預(yù)后較差，但陽性患者使用HER-2靶性藥物的治療效果卻比較好。因此，檢測乳腺癌患者HER-2對于指導(dǎo)患者的預(yù)后以及治療具有重要的意義[1]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇玉林市第一人民醫(yī)院2014年3月至2016年3月乳腺癌患者45例，年齡25～60歲，取每個患者送檢的組織，制作為冰凍切片，冰凍剩余組織作石蠟切片。2種切片均進行免疫組織化學(xué)染色，檢測HER-2的蛋白表達。

1.2 方法

同一塊組織先做冰凍切片進行HER-2免疫組化染色檢測，然后把該塊組織做成蠟塊，進行石蠟切片后再進行HER-2免疫組化染色檢測。把同一塊組織所做的2種不同切片做的HER-2免疫組化染色檢測結(jié)果進行對比分析。2種切片均采用MaxVision法進行染色。具體步驟如下：

1.2.1 冰凍切片制作

1)取新鮮的組織平放于冷凍頭上，加適量OCT包埋劑，置于冰凍切片機冷凍臺冷凍，速凍之后切成4～5 μm的切片，將其貼在防脫載玻片上。

2)置于丙酮之中固定10 min，之后至水化[2]。

3)玻片進行蒸餾水水洗1次，之后用PBS沖洗1次、2 min。

4)放入3%的過氧化氫溶液中處理10 min。

5)水洗1次，之后用PBS沖洗3次、每次2 min。

6)滴加相應(yīng)的一抗，然后放入37 ℃的環(huán)境30 min[3]。

7)PBS沖洗3次、每次2 min。

8)滴加MaxVision檢測系統(tǒng)試劑(二抗)1滴，置于室溫下反應(yīng)15 min。

9)PBS沖洗3次、每次2 min。

10)DAB室溫顯色3～10 min，鏡下控制顯色，水洗，終止顯色。

11)蘇木素進行復(fù)染1～2 min，水洗，分化，藍化。

12)常規(guī)進行脫水，用中性樹膠進行封固[4]。

1.2.2 石蠟切片制作

1)將組織標本置于10%中性緩沖甲醛液之中固定24 h后，置于自動脫水機中依次梯度酒精脫水、透明、浸蠟，包埋成蠟塊，切成2～3 μm的切片[3]。

2)石蠟切片65 ℃烤片1 h，脫蠟至水化并蒸餾水洗1次。

3)抗原修復(fù)：EDTA，pH8.0，中火持續(xù)煮沸20 min，之后快速冷卻。

4)玻片進行蒸餾水水洗1次，之后用PBS沖洗2次、每次3 min。

5)放入3%的過氧化氫溶液中處理10 min。

6)水洗1次，之后用PBS沖洗3次、每次3 min。

7)滴加相應(yīng)的一抗，然后放入37 ℃的環(huán)境1 h(或4 ℃冰箱過夜)。

8)PBS沖洗3次、每次3 min。

9)滴加MaxVision檢測系統(tǒng)試劑(二抗)1滴，置于室溫下反應(yīng)15 min。

10)PBS沖洗3次、每次3 min。

11)DAB室溫顯色3～10 min，鏡下控制顯色，水洗，終止顯色。

12)蘇木精進行復(fù)染1～2 min，水洗，分化，藍化。

13)常規(guī)進行脫水，用中性樹膠進行封固。

1.3 觀察指標

將所有切片放置在普通光學(xué)顯微鏡下觀察免疫組織化學(xué)染色的結(jié)果，以10% 以上的腫瘤細胞出現(xiàn)胞膜或胞漿，觀察到清晰棕褐色的或棕黃色的顆粒時則為陽性，其他結(jié)果為陰性，記為(-)；并將陽性結(jié)果分三種情況：1)癌細胞隱約可見膜染色時為弱陽性(記為1+)。2)細胞有微弱可見至中度可見其基底膜、側(cè)膜或完全性的膜染色時為中度陽性(記為2+)。3)觀察到細胞的基底膜、側(cè)膜清晰染色，或者細胞完全性膜強染色時為強陽性(記為3+)[5]。

2 結(jié)果

HER-2檢測結(jié)果中冰凍切片組陽性信號強于石蠟切片組，雖然組織形態(tài)學(xué)上，冰凍切片欠缺于石蠟切片，但是冰凍切片能更加真實清晰的表達HER-2。如封四圖1—4。

3 討論

現(xiàn)如今，女性乳腺癌的發(fā)病率逐漸上升，已成為女性惡性腫瘤導(dǎo)致死亡的首要的因素。因此對于乳腺癌的預(yù)防、診斷、治療成為了醫(yī)學(xué)界的研究重點[6]。人類表皮生長因子受體-2(HER-2)是人類17號染色體上的原癌基因，HER-2基因的擴增以及其所對應(yīng)的蛋白質(zhì)表達，皆與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展以及預(yù)后有關(guān)，是乳腺癌患者重要的預(yù)后以及HER-2靶向藥物治療的預(yù)測指標，經(jīng)研究顯示，HER-2陽性的患者腫瘤惡性程度比較大，且治療效果相對較差，預(yù)后較差，但陽性(2+以上)患者使用HER-2靶性藥物的治療效果卻比較好。因此，檢測乳腺癌患者HER-2，尤其是準確的檢測HER-2，對于指導(dǎo)患者的預(yù)后以及治療具有重要的意義。

本實驗主要探討檢測HER-2時，標本作為冰凍切片以及冰凍剩余石蠟切片兩者的對比分析，冰凍切片是免疫組織化學(xué)染色中較常用的一種切片方法。冰凍切片的制作過程短，效率高，敏感性強，且可以最大程度地保證標本的多種抗原免疫活性，抗原完整性。冰凍切片做HER-2的最大好處還有，能最大限度地保留抗原，能較真實地反映HER-2是陰性，陽性的1+、2+或是3+。而石蠟切片的特點是達到可重復(fù)性且恒定的抗原顯示，能夠保持組織結(jié)構(gòu)的完整性，而且制作好的石蠟組織塊可以長久保存[7]。

本實驗中，主要探討兩種切片對乳腺癌患者檢測HER-2的影響，結(jié)果顯示，冰凍切片顯示效果較好。

[1] 王妍,賈羽峰,井明晰,等.新輔助化療對乳腺癌的療效及影響因素分析[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報,2013,11(10):45-47.

[2] 丁偉，王德田，董建強，等.簡明病理學(xué)技術(shù)[M].杭州：浙江科學(xué)技術(shù)出版社，2014：156.

[3] 劉琪,左文述,王新昭,等.乳腺癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶激素受體及HER-2與Ki-67表達相關(guān)性分析[J].中華腫瘤防治雜志,2013,20(15):1153-1157.

[4] 李世寧,唐紅,郭慶喜,等.乳腺癌HER-2基因擴增及其蛋白表達與臨床病理特征的關(guān)系[J].臨床與實驗病理學(xué)雜志,2014,30(3):251-255.

[5] 耿強,錢曉龍,付麗.乳腺癌HER-2檢測的概況與進展[J].中國腫瘤臨床,2014,41(10):671-674.

[6] 葛文凱,楊奔,左文述,等.乳腺癌穿刺活檢對HR和HER-2及Ki-67評價可靠性以及化療對其影響研究[J].中華腫瘤防治雜志,2014,21(11):847-853.

[7] 姜學(xué)革,李曉瑛,呂亞莉,等.乳腺髓樣癌HER-2基因擴增與臨床病理因素相關(guān)性分析[J].中華腫瘤防治雜志,2013,20(22):1724-1727.

(責(zé)任編輯：劉大仁)

2016-09-20

R446.8

A

1009-8194(2017)02-0016-02

10.13764/j.cnki.lcsy.2017.02.008