高通量血液透析患者淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及分型表達(dá)的分析

王松巖,李春光,馬 爽,馬寅芙,李 兵,王 磊,張世英*

(1.吉林省人民醫(yī)院 腎內(nèi)科，吉林 長(zhǎng)春130021；2.長(zhǎng)春市中醫(yī)院)

*通訊作者

高通量血液透析患者淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及分型表達(dá)的分析

王松巖1,李春光2,馬 爽1,馬寅芙1,李 兵1,王 磊1,張世英1*

(1.吉林省人民醫(yī)院 腎內(nèi)科，吉林 長(zhǎng)春130021；2.長(zhǎng)春市中醫(yī)院)

維持性血液透析患者各種感染及腫瘤的發(fā)病率較普通人群均明顯增高，感染和腫瘤的發(fā)生與機(jī)體的免疫功能低下有一定關(guān)系，而淋巴細(xì)胞與機(jī)體免疫功能相關(guān)。本研究旨在探討高通量血液透析患者淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及分型表達(dá)的變化，并進(jìn)行分析，為臨床上改善患者的免疫功能，減少透析患者感染及腫瘤的發(fā)生提供一定的理論依據(jù)。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取吉林省人民醫(yī)院腎內(nèi)科于2015年1月-2016年9月間住院且臨床資料完整的患者共67例為研究對(duì)象。按腎功能指標(biāo)將研究對(duì)象分為3組，高通量血液透析組(透析齡大于3個(gè)月)、腎功能異常未透析組以及腎功能正常組。回顧性分析三組患者淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及分型表達(dá)的情況。其中高通量血液透析組患者共25例(男女比例8∶17)，年齡29-90歲(平均年齡69.680±14.820歲)。透析齡為4月-16年(平均透析齡為5.733±3.763年)。原發(fā)病為慢性腎小球腎炎者11例，糖尿病腎病者5例，高血壓良性腎小動(dòng)脈硬化者3例，慢性腎盂腎炎者1 例，藥物性腎損害4例，痛風(fēng)腎1例。腎衰竭未透析組患者共22例(男女比例9∶13)，年齡39-83歲(平均年齡67.182±12.861歲)。原發(fā)病為慢性腎小球腎炎者10例，糖尿病腎病者3例，高血壓良性腎小動(dòng)脈硬化者7例，慢性腎盂腎炎者1 例，藥物性腎損害1例。肌酐范圍210-1146 μmol/L，平均為487.068±254.036 μmol/L。腎功能正常組患者共20例(男女比例7:13)，年齡28-92歲(平均年齡59.9±15.573歲)。原發(fā)病為慢性腎小球腎炎者7例，糖尿病腎病者2例，高血壓良性腎小動(dòng)脈硬化者5例，腎病綜合征4 例，動(dòng)脈硬化2例。

高通量血液透析患者以動(dòng)靜脈內(nèi)瘺或長(zhǎng)期深靜脈導(dǎo)管為血管通路。高通量血液透析器采用德國(guó)Fresenius公司生產(chǎn)的High-Flux FX-80透析器，膜表面積為1.8 m2。采用標(biāo)準(zhǔn)碳酸氫鹽透析液，超純凈透析用水。Fresenius 4008 B透析機(jī)，透析液流量500 mL/min，血流量220-280 mL/min，透析溫度36.0-37.0℃，透析時(shí)間4小時(shí)/次，3次/周，以干體重為目標(biāo)設(shè)置超濾量。低分子肝素抗凝。規(guī)律血液透析基礎(chǔ)上給予常規(guī)藥物治療。所有入組患者入組時(shí)無(wú)感染、腫瘤及應(yīng)用免疫制劑。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

細(xì)胞表面標(biāo)志單克隆抗體CD3/CD4/CD8三標(biāo)(即CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PE-CY5)、CD3-FITC/CD19-PE、CD3-FITC/(CD16+56)-PE，溶血素Optilyse C等購(gòu)于Beckman Coulter公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

所有患者于入院當(dāng)日或次日空腹靜脈采血檢測(cè)血常規(guī)及淋巴細(xì)胞分型。其中血常規(guī)檢查應(yīng)用日本SYSMEX公司常規(guī)血細(xì)胞自動(dòng)分類計(jì)數(shù)儀；淋巴細(xì)胞分型檢測(cè)應(yīng)用美國(guó)Beckman Coulter公司生產(chǎn)的EPICS XL型流式細(xì)胞儀。將100 μl EDTA抗凝全血加20 μl抗體，室溫避光孵育15分鐘；加入500 μl溶血素，混勻，室溫避光孵育10分鐘；加入PBS 2 ml，混勻，1 500轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，棄上清液，加500 μl PBS上流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

白細(xì)胞計(jì)數(shù)及淋巴細(xì)胞分型屬于計(jì)量資料，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，透析組、未透析組及腎功正常組三組之間比較采用單因素方差分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組患者白細(xì)胞及淋巴細(xì)胞總數(shù)的變化(見(jiàn)表1) 三組患者白細(xì)胞總數(shù)均在正常范圍，三組比較無(wú)明顯差異。與腎功能正常組比較，未透析組下降，高通量血液透析組降至最低。高通量血液透析組患者淋巴細(xì)胞總數(shù)較腎功正常組明顯降低，P=0.003，差異顯著。高通量血液透析組患者淋巴細(xì)胞比率較腎功正常組明顯降低，P=0.033，差異顯著。

表1 三組患者白細(xì)胞及淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)情況

注： 與腎功正常組比較*P<0.01，#P<0.05。

2.2 三組患者淋巴細(xì)胞分型表達(dá)的變化(見(jiàn)表2) (1)與腎功正常組患者比較，CD3+淋巴細(xì)胞所占比率在腎衰未透析組水平升高，P<0.05，差異顯著；高通量血液透析組較未透析組有所下降，但與腎功正常組患者比較差異不顯著。(2)與腎功正常組患者比較，高通量血液透析組及未透析組患者CD3+CD8+淋巴細(xì)胞所占比率有所升高，但差異不顯著。(3)高通量血液透析組及未透析組患者CD3+CD4+淋巴細(xì)胞所占比率與腎功正常組患者比較無(wú)明顯差異。(4)隨著腎功能進(jìn)展，NK細(xì)胞所占比率呈降低趨勢(shì)。與腎功能正常組患者比較，腎衰未透析組患者NK細(xì)胞所占比率明顯降低，差異顯著；高通量血液透析組患者NK細(xì)胞所占比率較腎衰未透析組水平明顯升高，P=0.03，差異顯著，基本達(dá)到腎功正常組水平。(5)隨著腎功能進(jìn)展，B淋巴細(xì)胞所占比率呈降低趨勢(shì)，與腎功能正常組患者比較，未透析組患者B淋巴細(xì)胞所占比率明顯降低，高通量血液透析組亦明顯降低。三組之間兩兩比較P=0，差異顯著。

表2 三組患者淋巴細(xì)胞分型表達(dá)情況

注：與腎功正常組比較,*P<0.01，#P<0.05。

3 討論

研究表明尿毒癥毒素及干預(yù)性治療可使尿毒癥及血液透析患者出現(xiàn)免疫功能異常[1,2]。本研究將高通量血液透析患者與腎功能正?；颊呒澳I功能異常但未行透析的患者進(jìn)行比較，來(lái)探討高通量血液透析對(duì)患者淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及分型表達(dá)的影響。

既往研究表明血液透析患者與健康對(duì)照組相比淋巴細(xì)胞減少[3,4]。我們的研究也得出了一致的結(jié)果：三組患者盡管白細(xì)胞總數(shù)均在正常范圍，但是隨著腎功能進(jìn)展，淋巴細(xì)胞總數(shù)呈下降趨勢(shì)，高通量血液透析患者淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及比率均較腎功能正常組患者明顯下降，差異顯著。而關(guān)于CD3+、CD3+CD4+及CD3+CD8+所占比率在慢性腎臟病患者與健康對(duì)照組的比較，目前不同的研究結(jié)果結(jié)論尚不完全相同[3,5,6]。本研究結(jié)果表明隨著腎功能進(jìn)展，CD3+、CD3+CD4+及CD3+CD8+所占比率呈升高趨勢(shì)，CD3+淋巴細(xì)胞所占比率在腎衰未透析組水平較腎功正常組明顯升高，差異顯著；高通量血液透析后，CD3+、CD3+CD4+及CD3+CD8+所占比率較未透析組有所下降，但仍高于腎功能正常組，差異不顯著。CD4+/CD8+三組間差異不顯著。

既往文獻(xiàn)報(bào)道血液透析患者B淋巴細(xì)胞數(shù)低于正常對(duì)照組[7,8]。在本研究中，三組患者B淋巴細(xì)胞所占比率隨著腎功能的進(jìn)展呈降低趨勢(shì)，與腎功能正常組患者比較，腎衰未透析組患者明顯降低，高通量血液透析組患者降至最低，三組之間兩兩比較差異顯著。項(xiàng)方方等曾研究B細(xì)胞數(shù)和有效腎小球?yàn)V過(guò)率(eGFR)的關(guān)系，并證實(shí)二者呈獨(dú)立正相關(guān)[5]，本研究進(jìn)一步證明了這種相關(guān)性。也有體外研究表明尿毒癥(包括透析與未透析)患者B淋巴細(xì)胞減少可能部分歸因于與Bcl-2基因表達(dá)下降相關(guān)的細(xì)胞凋亡[8]。

自然殺傷(NK)細(xì)胞為機(jī)體提供了針對(duì)感染和腫瘤的第一線免疫防御。NK細(xì)胞不僅具有殺傷功能，在某些病理?xiàng)l件下還可以分泌細(xì)胞因子參與機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)。本研究NK細(xì)胞分析結(jié)果表明：與腎功正常組患者比較，腎衰未透析組患者NK細(xì)胞所占比率明顯降低，差異顯著；高通量血液透析組患者明顯升高，基本達(dá)到腎功正常組水平。未透析組患者NK細(xì)胞計(jì)數(shù)降低可能與腎臟的清除能力降低相關(guān)[9]；而血液透析患者盡管NK細(xì)胞計(jì)數(shù)與腎功正常組比較沒(méi)有差異，但血液透析患者的慢性炎癥狀態(tài)可使NK細(xì)胞zeta鏈下調(diào)，導(dǎo)致NK細(xì)胞活性降低[10],這或許是血液透析患者容易發(fā)生感染、腫瘤等的一個(gè)原因，而長(zhǎng)期透析可以改善NK細(xì)胞的細(xì)胞毒活性[9]。

綜上，本研究結(jié)果表明，高通量血液透析患者存在淋巴細(xì)胞總數(shù)及分型表達(dá)異常，包括淋巴細(xì)胞總數(shù)下降及B淋巴細(xì)胞所占比率下降等，而NK細(xì)胞所占比率盡管與腎功正常組無(wú)明顯差異，但可能存在活性降低。這些因素可能是導(dǎo)致高通量血液透析患者免疫功能低下，易于發(fā)生感染、腫瘤等疾病的一個(gè)原因。因此，在臨床上可以采取相應(yīng)的干預(yù)措施來(lái)調(diào)節(jié)血液透析患者的淋巴細(xì)胞功能，增強(qiáng)免疫力，改善預(yù)后。

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1007-4287(2017)03-0519-03

2016-12-22)