胃癌患者血清VEGF-C、VEGF-D濃度水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)相關(guān)性的臨床研究

徐冬冬,王大廣,所 劍

(吉林大學(xué)白求恩第一醫(yī)院 胃結(jié)直腸肛門外科,吉林 長(zhǎng)春130021)

*通訊作者

胃癌患者血清VEGF-C、VEGF-D濃度水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)相關(guān)性的臨床研究

徐冬冬,王大廣,所 劍*

(吉林大學(xué)白求恩第一醫(yī)院 胃結(jié)直腸肛門外科,吉林 長(zhǎng)春130021)

胃癌是臨床常見惡性腫瘤之一,位居所有惡性腫瘤第2位[1]。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是其惡性生物學(xué)行為之一,與胃癌患者的分期、預(yù)后密切相關(guān),同時(shí)也是臨床上決定是否給予進(jìn)一步治療的依據(jù)。目前對(duì)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)準(zhǔn)確判斷是術(shù)后病理分期。但如何能在術(shù)前對(duì)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)進(jìn)行判斷是臨床研究的熱點(diǎn)。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是一種內(nèi)皮調(diào)控因子,其中VEGF-C、VEGF-D在新生淋巴管的形成上發(fā)揮重要的作用。此文旨在探究胃癌與健康志愿者、相同T分期不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)下VEGF-C、VEGF-D的差異性,以期尋找可預(yù)測(cè)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)的指標(biāo)。

1 資料和方法

1.1 一般資料 本研究中實(shí)驗(yàn)組血清樣本來自2008年8月至2012年8月吉林大學(xué)第一醫(yī)院胃腸外科的手術(shù)患者。術(shù)前明確診斷為胃癌,且初發(fā)腫瘤、癌灶單發(fā)、無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、術(shù)前未接受治療、無明顯急性炎癥反應(yīng)、術(shù)前檢查未見明顯異常。其中45例患者術(shù)后病理確認(rèn)為T2N0期10例、T2Nx期35例。對(duì)照組來自20例健康自愿者。所有受試者血液采集均在術(shù)前一日,空腹采肘靜脈血,血樣采集后離心取上清,于-80℃下冰凍保存,室溫下解凍使用。

1.2 方法 使用人VEGF-C、VEGF-D檢測(cè)試劑盒(上海源葉生物科技有限公司)檢測(cè)血清VEGF-C、VEGF-D的濃度水平,設(shè)置12個(gè)標(biāo)準(zhǔn)孔,樣本和標(biāo)準(zhǔn)品均進(jìn)行雙孔檢測(cè)取平均值。嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行,稀釋倍數(shù)5倍,測(cè)定各孔在450 nm下的光密度值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出VEGF-C、VEGF-D的濃度水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用 SPSS 17.0 軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。胃癌患者和健康人的血清VEGF-C、VEGF-D濃度水平分布情況未知。相關(guān)文獻(xiàn)也未見相關(guān)介紹。因此首先應(yīng)用統(tǒng)計(jì)分析軟件Shapiro-Wilk法對(duì)樣本進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn),本研究計(jì)量資料符合正態(tài)分布,計(jì)量資料用 (x—±s) 表示,采用t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)定為0.05,P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 胃癌患者血清VEGF-C、D的濃度分別為233.3±127.9 pg/ml、268.3±133.0 pg/ml。健康成人VEGF-C、D的濃度分別92.83±37.00 pg/ml、128.3±64.7 pg/ml。VEGF-C、D在胃癌患者和健康人間,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表1。

表1 胃癌患者和健康人VEGF-C、VEGF-D濃度水平(pg/ml)

2.2 胃癌患者血清VEGF-C、D濃度與臨床病理學(xué)特征相關(guān)性分析 T2期胃癌患者血清VEGF-C、D濃度水平與性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤位置、病理類型無關(guān),但在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性和陰性之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表2。

3 討論

VEGF-C和D是VEGF家族的新成員,VEGF-C是 1996 年由Joukov V[1]首次克隆并分離出的 VEGF 家族的一個(gè)新成員,由于其是第一個(gè)具有誘導(dǎo)淋巴管生成作用的生長(zhǎng)因子,故也被稱為淋巴管生長(zhǎng)因子[1]。VEGF-D 是 1998 年由Achen[2]在核酸數(shù)據(jù)庫中通過同源性搜索發(fā)現(xiàn)的第二個(gè)淋巴管生長(zhǎng)因子。VEGF-C、D是高度糖基化的堿性蛋白,對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞有高度特異性,通過內(nèi)皮細(xì)胞的特異性受體刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和毛細(xì)血管袢形成,不僅參與了腫瘤血管的發(fā)生、增殖,還直接參與了腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移。研究表明VEGF-C和D與淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞上的VEGFR-3受體結(jié)合,促進(jìn)淋巴管再生,進(jìn)而促進(jìn)腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[3,4]。目前,人們對(duì)胃癌組織中VEGF-C和D與腫瘤侵潤(rùn)、淋巴轉(zhuǎn)移有較一致意見,胃癌組織中 VEGF-C和D的表達(dá)水平明顯高于正常組織,表明 VEGF 與 胃癌進(jìn)展及預(yù)后密切相關(guān)[5]。Watanabe等[6]證實(shí) VEGF-Cm RNA 水平與胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著性相關(guān),VEGF-C 蛋白表達(dá)水平與術(shù)后淋巴結(jié)組織內(nèi)淋巴管密度呈正比,提示 VEGF-C 可能參與胃癌淋巴管生成并加速淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。但有關(guān)胃癌血清中VEGF-C和VEGF-D水平與胃癌淋巴轉(zhuǎn)移的關(guān)系研究較少。

表2 T2期胃癌患者血清VEGF-C、VEGF-D濃度水平與臨床病理學(xué)特征相關(guān)性分析

為控制淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為單一變量,本研究選取實(shí)驗(yàn)組血清樣本均為T2期,參照國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)的2010第7版分期,包括T2N0、T2N1、T2N2、T2N3。結(jié)果表明,T2期胃癌患者血清VEGF-C、D與健康成人對(duì)照組有顯著差異。進(jìn)一步分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),相同浸潤(rùn)深度,但不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)的T2N0和T2Nx之間血清VEGF-C、D亦有顯著差異。而VEGF-C、D在不同年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤位置、分化類型組別上無統(tǒng)計(jì)差異。這一結(jié)果提示我們,術(shù)前聯(lián)合測(cè)定VEGF-C和VEGF-D可能成為預(yù)測(cè)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的輔助指標(biāo)之一。對(duì)手術(shù)和治療方案的選擇有一定的臨床意義。

與其他腫瘤一樣,胃癌的發(fā)生發(fā)展與許多基因、蛋白有關(guān)系。臨床一線的外科醫(yī)生希望尋找的一種特異的標(biāo)志物來對(duì)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)進(jìn)行預(yù)測(cè),以決定手術(shù)方式、評(píng)估胃癌的發(fā)展和預(yù)后。但目前尚未發(fā)現(xiàn)一個(gè)高敏感性、高特異性的標(biāo)志物。近年新興的有關(guān)胃癌蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)的相關(guān)研究可能為尋找特異性的標(biāo)志物開辟新的途徑。

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[2]Joukov V,K Pajusola,A Kaipainen,et al.A novel vascular endothelial growth factor,VEGF-C,is a ligand for the Flt-4 (VEGFR-3) and KDR(VEGFR-2) receptor tyrosine kinases[J].The EMBO journal,1996,15(2):290.

[3]Achen MG,Jeltsch M,Kukk E,et al.Vascular endothelial growth factor D(VEGF-D) is a ligand for the tyrosine kinases VEGF receptor 2(Flk-1) and VEGF receptor 3 (Flt-4)[J].Proc Natl Acad Sci USA,1998,95(2):548.

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1007-4287(2017)03-0492-02

徐冬冬(1990-),男,遼寧遼陽人,吉林大學(xué)第一醫(yī)院胃結(jié)直腸肛門外科,在讀碩士研究生。

2016-04-16)