血清及糞便髓過氧化物酶測定對潰瘍性結(jié)腸炎患者輔助診斷與疾病活動性監(jiān)測中的應(yīng)用價值

柏明見，馮 璟，馮珍如，李俊霞，閆存玲，梁國威*

(1.航天中心醫(yī)院 檢驗科，北京100049；2.北京大學第一醫(yī)院，北京100034)

*通訊作者

血清及糞便髓過氧化物酶測定對潰瘍性結(jié)腸炎患者輔助診斷與疾病活動性監(jiān)測中的應(yīng)用價值

柏明見1，馮 璟1，馮珍如2，李俊霞2，閆存玲2，梁國威1*

(1.航天中心醫(yī)院 檢驗科，北京100049；2.北京大學第一醫(yī)院，北京100034)

目的 探討血清及糞便髓過氧化物酶對潰瘍性結(jié)腸炎患者輔助診斷及其監(jiān)測疾病活動性的應(yīng)用價值。方法 選取2010年1月到2012年4月就診于北京大學第一醫(yī)院消化內(nèi)科的潰瘍性結(jié)腸炎患者45例(男30例，女15例)，根據(jù)Mayo評分系統(tǒng)將UC患者分為緩解期組(18例)和活動期組(27例)。對照組25例(男15例，女10例)。搜集兩組外周血及糞便標本，采用ELISA法檢測血清及糞便中髓過氧化物酶含量。兩組間比較采用Mann-whitneyU檢驗，雙側(cè)P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。結(jié)果 UC組與對照組中血清MPO (U/L)分別為[113.78(71.31-174.53) vs.62.66(43.39-113.39)],Z=-2.488,P=0.013；活動期與非活動期UC患者血清MPO分別為[102.67(70.52-176.7 0) vs.116.91(68.16-174.04)],Z=-0.255,P=0.799。UC組與對照組糞便MPO分別為[926.47(495.34-1264.07) vs.557.86 (377.84-930.43)],Z=-2.507,P=0.012；活動期與非活動期UC患者糞便MPO分別為[1231.24(725.42-1550.77) vs.692.58(285.98-886.17)],Z=-3.197,P=0.001。結(jié)論 血清及糞便MPO檢測對UC的輔助診斷有一定應(yīng)用價值，糞便MPO同時可用于UC患者的疾病活動性評估。

髓過氧化物酶；潰瘍性結(jié)腸炎

(ChinJLabDiagn,2017,21:0413)

潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)是炎癥性腸病(inflammatory bowel disease,IBD)的主要表型之一[1]，隨著診斷技術(shù)的不斷發(fā)展，臨床上確診的UC患者越來越多。UC病情呈活動期與非活動期相交替，給患者帶來較大的痛苦，準確評估UC患者疾病活動性是指導準確治療的重要依據(jù)。紅細胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)和血清C-反應(yīng)蛋白(C-reactive protein,CRP)在評估UC疾病活動性中應(yīng)用較多，是指南中推薦使用的檢測指標[2]，但特異性欠佳。腸鏡及組織病理學檢查是UC確診及疾病活動性評價的金標準[3]，而內(nèi)鏡檢查具有耗時長、創(chuàng)傷大等缺點。近年來發(fā)現(xiàn)糞便中有多種生物標志物對UC的診斷及疾病活動性檢測有較好的應(yīng)用價值[4]。

因此，針對UC需要一些新的生物標志物，該類生物標志物對UC的診斷及疾病活動性檢測均有較好的應(yīng)用價值。本研究對UC患者血清及糞便髓過氧化物進行檢測，探討其對UC診斷及疾病活動性評估中的應(yīng)用價值。

1 材料與方法

1.1 對象

本研究共納入UC患者共45例，均選自北京大學第一醫(yī)院消化內(nèi)科就診的患者，研究時間自2010年1月至2012年4月，中位年齡(歲)為39(31-51)，男30例，女15例，納入標準符合2010年世界胃腸病學組織關(guān)于IBD診斷和治療的實踐指南[2]，采用Mayo評分系統(tǒng)將UC患者分為緩解期組(18例)和活動期組(27例)。

選取無消化道癥狀、便常規(guī)及便潛血檢查均陰性，經(jīng)內(nèi)鏡檢查排除UC診斷，排除有嚴重心、肺、腎臟疾患的健康體檢者25例作為對照組，中位年齡(歲)為45(33-62)，男15例，女10例。研究經(jīng)北京大學第一醫(yī)院倫理委員會批準同意，所有參與本研究患者及對照組均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 所有血標本收集時間與腸鏡檢查間隔時間均不超過3天，ESR檢測于采血后0.5小時內(nèi)完成，血清CPR檢測于采血當天3小時內(nèi)完成，剩余血清凍存于-80℃冰箱內(nèi)，對血清MPO進行統(tǒng)一檢測。用一次性無菌容器留取患者及對照組隨機糞便標本5.0-10.0 g，置于4℃冰箱保存，3 d內(nèi)提取糞便內(nèi)活性成份，凍存于-80℃冰箱內(nèi)，對糞便MPO進行統(tǒng)一檢測。

1.2.2 試劑與儀器 人髓過氧化物酶試劑盒(America RB company)，測量單位用U/L表示；CRP測量(IMMAGE 800，Becman-Coulter)單位用mg/L表示。加樣器(規(guī)格為200、100、10 μl)、全自動洗板機(Wellwash Versa)，-80℃冰箱(型號MZMY-BX-012 709)，酶標儀(Phomo,MBY201)，恒溫箱，微量振蕩儀，一次性無菌標本盒、凍存管，封閉式采血管(黃管及黑管)，普通離心機(型號BECKMAN COULTER Allegra X-22R)、高速低溫離心機(型號SIGMA 3k15)，分析天平(型號Sartorius BP211D)。

1.2.3 糞便提取方法 稱取糞便標本0.5-1.0 g，按1∶4(重量∶體積)比例與提取緩沖液稀釋，充分混勻2 min，吸取1.0 ml于EP管中高速離心(20 800 g，30 min，4℃)，吸取上清液50 μl，用提取緩沖液稀釋至1.0 ml后充分混勻，-80℃冰箱保存。

提取緩沖液成分[5]：磷酸鹽緩沖液緩沖液(Phosphate Buffered Saline,PBS )，pH=7.4、10 mmol/L乙二胺四乙酸二鈉、0.2%十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)、20%甘油、0.05%吐溫20、1%小牛血清白蛋白。

1.2.4 檢測方法 血清及糞便MPO檢測采用ELISA法，ESR檢測采用魏氏法，血清CRP檢測采用速率散射比濁法。

1.3 統(tǒng)計學分析

采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計學分析，采用MedCalc軟件繪制ROC曲線。兩組間率的比較采用卡方檢驗。經(jīng)檢驗數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布，連續(xù)變量采用中位數(shù)(median)及四分位數(shù)間距表示(inter-quartile range,IR)，兩組間比較采用Mann-whitney U檢驗。雙側(cè)P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 UC組和對照組基線資料、ESR、血清CRP、血清及糞便MPO水平結(jié)果

UC組與對照組血清MPO中水平分別為[113.78(71.31-174.53) vs.62.66(43.39-113.39)],Z=-2.488,P=0.013；UC組與對照組糞便MPO水平分別為[926.47(495.34-1264.07) vs.557.86 (377.84-930.43)],Z=-2.507,P=0.012，具體見表1。

表1 UC組和對照組基線資料、ESR、血清CRP及血清MPO水平結(jié)果

注：a：中位數(shù)及四分位數(shù)間距(IR)，b:N (%)

2.2 活動期與非活動期UC患者ESR、血清CRP、血清及糞便MPO水平比較，見表2。

活動期與非活動期UC患者血清MPO分別為[102.67(70.52-176.7 0) vs.116.91(68.16-174.04)],Z=-0.255,P=0.799；活動期與非活動期UC患者糞便MPO分別為[1231.24 (725.42-1550.77) vs.692.58(285.98-886.17)],Z=-3.197,P=0.001，具體見表2。

表2 活動期與非活動期UC患者ESR、血清CRP、血清及糞便MPO水平比較

2.3 ESR、血清CRP、血清及糞便MPO區(qū)分活動期與非活動期UC能力比較(表3及圖1)

糞便MPO與ESR、血清CRP、血清MPO對區(qū)分UC活動期與非活動期的能力相比，其統(tǒng)計值分別為Z=0.703(P=0.482)、Z=0.804(P=0.422)、Z=2.087(P=0.037)。

表3 ESR、血清CRP、血清及糞便MPO區(qū)分活動期與非活動期UC患者曲線下面積

圖1 ESR、血清CRP、血清及糞便MPO區(qū)分活動期與非活動期UC能力比較

3 討論

本研究結(jié)果如下，血清MPO水平在UC患者及對照組中差異有統(tǒng)計學意義，但在活動期與非活動期UC患者中差異無統(tǒng)計學意義；糞便MPO水平在UC患者及對照組中差異有統(tǒng)計學意義，在非活動期與活動期UC患者中差異亦有統(tǒng)計學意義。UC患者血清及糞便MPO水平明顯高于對照組，活動期UC患者糞便MPO水平明顯高于非活動期患者。

近年來，發(fā)展中國家UC的發(fā)病率逐年上升[6]，病情呈緩解與復(fù)發(fā)相交替，難以治愈，準確評估疾病的活動性至關(guān)重要[1]。研究發(fā)現(xiàn)，在腸道發(fā)生炎癥的時候，腸黏膜屏障的通透性往往會發(fā)生改變，使中性粒細胞能夠穿過腸黏膜屏障進入腸腔[7]，但中性粒細胞進入腸腔后極易遭到破壞，難以檢測，而中性粒細胞破碎后可釋放出較多物質(zhì)，如鈣衛(wèi)蛋白、乳鐵蛋白、MPO等。既往針對UC患者的研究中，以糞便鈣衛(wèi)蛋白最多，糞便鈣衛(wèi)蛋白不僅能夠輔助UC診斷，而且能夠較好的反映UC疾病活動性，甚至能夠預(yù)測UC的復(fù)發(fā)[8]。糞便生物標記物的檢測在UC患者中的應(yīng)用價值受到了越來越多的重視[9]，而其他中性粒細胞來源的生物標志物研究相對較少，Masoodi I等[10]研究發(fā)現(xiàn)糞便MPO不僅能夠反映UC患者的疾病活動性而且能夠監(jiān)測其治療效果。

MPO存在于髓系細胞(主要是中性粒細胞和單核細胞)的嗜苯胺藍顆粒中，是髓細胞的特異性標志，在炎癥、感染等刺激條件下，中性粒細胞和單核細胞聚集并釋放MPO。MPO在糞便提取液中較為穩(wěn)定[5]，易于保存和檢測。本研究發(fā)現(xiàn)UC患者血清及糞便MPO在UC患者中明顯高于對照組，考慮二者與血清CRP及其他糞便生物標志物一樣，對UC的輔助診斷均有一定的應(yīng)用價值。

本研究發(fā)現(xiàn)，活動期UC患者糞便MPO明顯高于非活動期患者，提示糞髓過氧化物酶在區(qū)分UC活動與否具有較好的應(yīng)用價值，其水平高低能較好的反映UC的疾病活動性，與國外研究結(jié)果一致[10]。但血清MPO檢測對于區(qū)分活動期與非活動期UC患者并無應(yīng)用價值，考慮由于糞便與腸黏膜直接接觸，檢測糞便中的MPO能夠更好的反映出腸道局部的病變情況，而血清MPO水平檢測僅能反映出機體全身的狀況，推測血清MPO檢測對判斷UC患者活動特異性較低可能由以上原因造成。因此，考慮糞便MPO檢測在判斷UC疾病活動性方面優(yōu)于血清MPO。本研究中，與ESR及血清CRP相比，糞便MPO對UC活動期與非活動期的區(qū)分能力差異并無統(tǒng)計學意義，考慮糞便MPO與指南中推薦的ESR、血清CRP一樣，均能較好的反映出UC患者的疾病活動性。

綜上所述，與ESR、血清CRP常用指標相比，血清及糞便MPO檢測對UC的輔助診斷有一定應(yīng)用價值。在區(qū)分UC疾病活動性方面，糞便MPO優(yōu)于血清MPO，糞便MPO可作為準確、無創(chuàng)的生物標記物，能較好的用于輔助UC疾病活動性評估。

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Serum and feces myeloperoxidase determination for auxiliary diagnosis and monitoring of disease activity in patients with ulcerative colitis

BAIMing-jian,FENGJing,FENGZhen-ru,etal.

(AerospaceCentralHospital,Beijing100049,China)

Objective To investigate the value of serum and feces myeloperoxidase(MPO)in assist diagnosis and disease activity of ulcerative colitis (UC).Methods 45 patients with UC and 25 control subjects were enrolled in present study.UC patients were divide into active(n=27) and inactive (n=18) group according to Mayo score.MPO was detected by ELISA.Mann-whitney U test was used for comparison of different groups.Results serum MPO between UC group and controls were [113.78(71.31-174.53) vs.62.66(43.39-113.39)],Z=-2.488,P=0.013,respectively;serum MPO between active and inactive group were[102.67(70.52-176.70) vs.116.91(68.16-174.04)],Z=-0.255,P=0.799,respectively.Fecal MPO between UC group and controls were[926.47(495.34-1264.07) vs.557.86 (377.84-930.43)],Z=-2.507,P=0.012,respectively；fecal MPO between active and inactive group were[1231.24(725.42-1550.77) vs.692.58(285.98-886.17)],Z=-3.197,P=0.001,respectively.Conclusion Serum and feces MPO was useful for auxiliary diagnosis of UC,feces MPO was a promising biomarker in monitoring disease activity of UC.

myeloperoxidase;ulcerative colitis

1007-4287(2017)03-0413-04

R574.62

A

2016-01-17)