復(fù)方黃葵顆粒的薄層鑒別研究

賀 婕，張愛(ài)榮,姜建芬

(山西華元醫(yī)藥集團(tuán)有限公司,太原 030032;*通訊作者,E-mail:hejie_huayuan@163.com)

復(fù)方黃葵顆粒的薄層鑒別研究

賀 婕*，張愛(ài)榮,姜建芬

(山西華元醫(yī)藥集團(tuán)有限公司,太原 030032;*通訊作者,E-mail:hejie_huayuan@163.com)

目的 建立復(fù)方黃葵顆粒的定性鑒別方法。 方法 采用薄層色譜方法,對(duì)復(fù)方黃葵顆粒中黃蜀葵花、粉萆薢、虎杖、大黃、何首烏、姜黃進(jìn)行定性鑒別。 結(jié)果 建立了復(fù)方黃葵顆粒中所含以上6種藥材薄層鑒別方法,供試品色譜中,在與對(duì)照物質(zhì)相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn),且陰性無(wú)干擾。 結(jié)論 本試驗(yàn)所確定的鑒別方法簡(jiǎn)便、重復(fù)性好,可用于復(fù)方黃葵顆粒的質(zhì)量控制。

復(fù)方黃葵顆粒； 薄層色譜； 黃蜀葵花； 粉萆薢； 虎杖； 大黃

復(fù)方黃葵顆粒的源處方是山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院張兆峰主任醫(yī)師治療前列腺炎的經(jīng)驗(yàn)方,臨床療效顯著。山西天星制藥有限公司開(kāi)發(fā),該方由黃蜀葵花、敗醬草、粉萆薢、虎杖、劉寄奴、姜黃、柴胡、大黃、白術(shù)、何首烏10味中藥組成,經(jīng)提取加適量輔料制成顆粒劑,具有清熱解毒、利濕清濁、活血通絡(luò)、散瘀止痛的功效,適用于慢性前列腺炎及前列腺增生癥狀的改善。證見(jiàn)尿頻、尿急、尿痛、尿道灼熱,陰囊潮濕,尿后滴瀝,舌紅,苔黃或黃膩,脈滑等。為了有效控制該制劑產(chǎn)品的質(zhì)量,以保證產(chǎn)品療效,我們對(duì)處方中相關(guān)藥材進(jìn)行研究,建立包括黃蜀葵花[1,2]、粉萆薢[3]、虎杖、大黃[4]、何首烏、姜黃薄層鑒別方法。

1 儀器與試藥

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

ZF-2三用紫外儀(上海市安亭電子儀器廠);AL204電子天平(Mettler公司)。

1.2 試藥

金絲桃苷對(duì)照品(批號(hào)111521-201205),大黃素對(duì)照品(批號(hào)110756-200110),大黃酚對(duì)照品(批號(hào)110796-201017),大黃對(duì)照藥材(批號(hào)121249-201304),虎杖對(duì)照藥材(批號(hào)120980-201005),何首烏對(duì)照藥材(批號(hào)120934-201104),粉萆薢對(duì)照藥材(批號(hào)121159-201103),姜黃對(duì)照藥材(批號(hào)121188-201103),以上對(duì)照品和對(duì)照藥材均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院;甲醇、乙醇、乙醚、石油醚、冰醋酸、硫酸、三氯甲烷、氫氧化鈉、氨水、三氯化鋁均購(gòu)自北京化工廠,正丁醇購(gòu)自天津申泰化學(xué)試劑有限公司,茴香醛購(gòu)自廣東翁江化學(xué)試劑有限公司,甲酸乙酯、甲酸購(gòu)自天津市大茂化學(xué)試劑廠,以上均為分析純;復(fù)方黃葵顆粒(批號(hào)20140501、20140502、20140503),由山西天星制藥有限公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 黃蜀葵花的薄層鑒別

2.1.1 供試品溶液的制備 取復(fù)方黃葵顆粒1 g,研細(xì),加甲醇10 ml,超聲處理30 min,濾過(guò),濾液作為供試品溶液。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 取金絲桃苷對(duì)照品,加甲醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。

2.1.3 陰性對(duì)照溶液的制備 除黃蜀葵花外,按處方取其他藥材制備陰性樣品,按2.1.1項(xiàng)下方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.1.4 黃蜀葵花的鑒別 按照薄層色譜法(中國(guó)藥典2015年版四部通則0502)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各2 μl,分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上,以50%冰醋酸為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以三氯化鋁試液,晾干,置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn),陰性對(duì)照液無(wú)干擾(見(jiàn)圖1)。

1.金絲桃苷對(duì)照品溶液;2-4.復(fù)方黃葵顆粒三批樣品;5.缺黃蜀葵花的陰性對(duì)照溶液圖1 黃蜀葵花的薄層色譜圖Figure 1 Thin layer chromatogram of Abelmoschi Corolla

2.2 粉萆薢的薄層鑒別

2.2.1 供試品溶液的制備 取復(fù)方黃葵顆粒6 g,研細(xì),加甲醇50 ml,超聲處理30 min,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀?0 ml使溶解,用水飽和的正丁醇提取3次,每次20 ml,合并正丁醇液,用1%氫氧化鈉溶液洗滌3次,每次15 ml,棄去堿液,再用正丁醇飽和的水洗滌3次,每次15 ml,棄去水液,正丁醇液蒸干,殘?jiān)蛹状? ml使溶解,作為供試品溶液。

2.2.2 對(duì)照藥材溶液的制備 取粉萆薢對(duì)照藥材1 g,按2.2.1項(xiàng)下方法制成對(duì)照藥材溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 除粉萆薢外,按處方取其他藥材制備陰性樣品,按2.2.1項(xiàng)下方法制成陰性對(duì)照溶液。2.2.4 粉萆薢的鑒別 按照薄層色譜法(中國(guó)藥典2015年版四部通則0502)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各10 μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-甲醇-水(13 ∶7 ∶2)10 ℃以下放置的下層溶液為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以新鮮配制的茴香醛-冰醋酸-硫酸(1 ∶100 ∶0.2)溶液,在100 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn),陰性對(duì)照液無(wú)干擾(見(jiàn)圖2)。

1.粉萆薢對(duì)照藥材溶液;2-4.復(fù)方黃葵顆粒三批樣品;5.缺粉萆薢的陰性對(duì)照溶液圖2 粉萆薢的薄層色譜圖Figure 2 Thin layer chromatogram of Dioscoreae Hypoglaucae Rhizoma

2.3 虎杖、大黃、何首烏的薄層鑒別

2.3.1 供試品溶液的制備 取復(fù)方黃葵顆粒5 g,研細(xì),加甲醇50 ml,超聲處理30 min,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀?0 ml使溶解,再加鹽酸2 ml,加熱回流30 min,立即冷卻,用乙醚提取3次,每次20 ml,合并乙醚液,蒸干,殘?jiān)尤燃淄? ml使溶解,作為供試品溶液。

2.3.2 對(duì)照藥材溶液的制備 分別取虎杖對(duì)照藥材0.2 g,大黃對(duì)照藥材0.2 g,何首烏對(duì)照藥材0.5 g,按2.3.1項(xiàng)下方法制成對(duì)照藥材溶液。

2.3.3 對(duì)照品溶液的制備 分別取大黃素、大黃酚對(duì)照品,加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。

2.3.4 陰性對(duì)照溶液的制備 除虎杖、大黃、何首烏外,按處方取其他藥材制備陰性樣品,按2.3.1項(xiàng)下方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.3.5 鑒別 按照薄層色譜法(中國(guó)藥典2015年版四部通則0502)試驗(yàn),吸取供試品溶液、大黃素對(duì)照品溶液、大黃酚對(duì)照品溶液、大黃對(duì)照藥材溶液、虎杖對(duì)照藥材溶液各3 μl,何首烏對(duì)照藥材溶液6 μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以石油醚(30-60 ℃)-甲酸乙酯-甲酸(15 ∶5 ∶1)上層溶液為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,置紫外光燈(365 nm)下檢視,再置氨蒸氣中熏至斑點(diǎn)顯色清晰,日光下檢視。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,日光下顯相同顏色的斑點(diǎn),紫外光下顯相同顏色的熒光斑點(diǎn),陰性對(duì)照液無(wú)干擾(見(jiàn)圖3)。

A.紫外光 B.日光1.大黃素對(duì)照品溶液;2.大黃酚對(duì)照品溶液;3.大黃對(duì)照藥材溶液;4.虎杖對(duì)照藥材溶液; 5.何首烏對(duì)照藥材溶液;6-8.復(fù)方黃葵顆粒三批樣品;9.缺大黃、虎杖、何首烏的陰性對(duì)照溶液圖3 虎杖、大黃、何首烏的薄層色譜圖Figure 3 Thin layer chromatogram of Polygoni Cuspidati Rhizoma Et Radix,Rhei Radix Et Rhizoma and Polygoni Multiflori Radix

2.4 姜黃的薄層鑒別

2.4.1 供試品溶液的制備 取復(fù)方黃葵顆粒5 g,研細(xì),加乙醚50 ml,超聲處理30 min,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)訜o(wú)水乙醇2 ml使溶解,作為供試品溶液。

2.4.2 對(duì)照藥材溶液的制備 取姜黃對(duì)照藥材0.2 g,按2.4.1項(xiàng)下方法制成對(duì)照藥材溶液。

2.4.3 陰性對(duì)照溶液的制備 除姜黃外,按處方取其他藥材制備陰性樣品,按2.4.1項(xiàng)下方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.4.4 鑒別 按照薄層色譜法(中國(guó)藥典2015年版四部通則0502)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各10 μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-甲醇-甲酸(96 ∶4 ∶1)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn),陰性對(duì)照液無(wú)干擾(見(jiàn)圖4)。

1.姜黃對(duì)照藥材溶液; 2-4.復(fù)方黃葵顆粒三批樣品;5.姜黃的陰性對(duì)照溶液圖4 姜黃的薄層色譜圖Figure 4 Thin layer chromatogram of Curcumae Longae Rhizoma

3 討論

試驗(yàn)對(duì)處方中的敗醬草、劉寄奴、柴胡、白術(shù)藥材也進(jìn)行薄層鑒別方法的研究,但通過(guò)篩選,特征斑點(diǎn)不明顯或?qū)傩圆粡?qiáng),故未在正文中列入。

曾參考《中國(guó)藥典》黃蜀葵花薄層鑒別項(xiàng)下方法,樣品用鹽酸乙醇溶液加熱回流,硅膠G薄層板上展開(kāi),展開(kāi)劑選擇甲苯-乙酸乙酯-甲酸混合溶液,過(guò)程復(fù)雜且效果不理想。經(jīng)摸索,樣品經(jīng)甲醇超聲處理,選用聚酰胺薄膜,以50%冰醋酸為展開(kāi)劑,斑點(diǎn)清晰,陰性無(wú)干擾,故最終確定此方法。

通過(guò)本實(shí)驗(yàn),對(duì)復(fù)方黃葵顆粒中黃蜀葵花、粉萆薢、虎杖、大黃、何首烏、姜黃六味藥材制定了薄層鑒別方法,方法操作簡(jiǎn)便、專(zhuān)屬性強(qiáng)、重復(fù)性好,對(duì)復(fù)方黃葵顆粒的質(zhì)量控制及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的進(jìn)一步研究具有指導(dǎo)意義,也為類(lèi)似制劑或成分的鑒別和含量測(cè)定提供參考。

[1] 李春梅,王濤,張祎,等.中藥黃蜀葵花化學(xué)成分的分離與鑒定(iv)[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2010,27(9):712-714.

[2] 李春梅,安雅婷,王濤,等.中藥黃蜀葵花化學(xué)成分的分離與鑒定(III)[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2011,28(7):520-525.

[3] 中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:一部[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015:289.

[4] 陳巧華,范世明,包國(guó)榮,等.一清顆粒薄層鑒別的改進(jìn)[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn),2005,6(4):53-56.

[5] 王利麗,周志遠(yuǎn),陳隨清.敗醬草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中醫(yī)學(xué)報(bào),2012,27(172):1150-1152.

[6] 李春梅,吳春華,王濤,等.中藥北劉寄奴中化學(xué)成分的分離與鑒定[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2012,29(5):331-336.

Study on the TLC of compound Huangkui granule

HE Jie*,ZHANG Airong,JIANG Jianfen

(ShanxiHuayuanPharmaceuticalGroupCo.,Ltd,Taiyuan030032,China;*Correspondingauthor,E-mail:hejie_huayuan@163.com)

ObjectiveTo establish qualitative identification methods of compoud Huangkui granules.MethodsThin layer chromatography(TLC)was used to qualitatively identify Abelmoschi Corolla,Dioscoreae Hypoglaucae Rhizoma,Polygoni Cuspidati Rhizoma Et Radix,Rhei Radix Et Rhizoma,Polygoni Multiflori Radix,Curcumae Longae Rhizoma in compoud Huangkui granules.ResultsThe identification methods of six components were successfully established.The chromatography of samples and standard sample showed that spots with same color were observed in same position, and no interference was found in negative sample.ConclusionThe method is simple,reproducible,and can be used for quality control in compound Huangkui granules.

compound Huangkui granules； thin layer chromatography； Abelmoschi Corolla; Dioscoreae Hypoglaucae Rhizoma;Polygoni Cuspidati Rhizoma Et Radix; Rhei Radix Et Rhizoma

賀婕，女，1978-12生，碩士，藥師，E-mail:hejie_huayuan@163.com

2016-12-17

R927.2

A

1007-6611(2017)03-0260-03

10.13753/j.issn.1007-6611.2017.03.013

河北省衛(wèi)生計(jì)生委辦公室醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)課題計(jì)劃項(xiàng)目(20150449)