惡性瘧原蟲(chóng)組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶SET7催化結(jié)構(gòu)域的表達(dá)及活性鑒定

張亮亮，蔡立婭，魏?jiǎn)⒚?，江陸斌，梁韶?/p>

（1.溫州醫(yī)科大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 寄生蟲(chóng)學(xué)教研室，浙江 溫州 325035；2.中科院上海巴斯德研究所分子病毒學(xué)和免疫學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200031）

惡性瘧原蟲(chóng)組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶SET7催化結(jié)構(gòu)域的表達(dá)及活性鑒定

張亮亮1，蔡立婭1，魏?jiǎn)⒚?，江陸斌2，梁韶暉1

（1.溫州醫(yī)科大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 寄生蟲(chóng)學(xué)教研室，浙江 溫州 325035；2.中科院上海巴斯德研究所分子病毒學(xué)和免疫學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200031）

目的:構(gòu)建桿狀病毒昆蟲(chóng)表達(dá)質(zhì)粒pFast-N-set7cd、pFast-C-set7cd和無(wú)細(xì)胞麥胚表達(dá)載體pEUHis-set7cd，表達(dá)惡性瘧原蟲(chóng)組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶SET7催化結(jié)構(gòu)域（PfSET7cd），并鑒定PfSET7cd的組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶活性。方法:通過(guò)分子克隆技術(shù)構(gòu)建獲得pFast-N/C-set7cd以及pEU-His-set7cd表達(dá)質(zhì)粒，嘗試通過(guò)桿狀病毒傳代方式與無(wú)細(xì)胞麥胚表達(dá)方式獲得重組PfSET7cd蛋白，以SDS-PAGE和Western blot鑒定表達(dá)產(chǎn)物，并進(jìn)一步檢測(cè)重組蛋白的酶活性。結(jié)果:用于昆蟲(chóng)表達(dá)的重組質(zhì)粒pFast-N-set7cd、pFast-C-set7cd雙酶切結(jié)果大小與測(cè)序結(jié)果均正確，但是Western blot并未檢測(cè)到其在昆蟲(chóng)細(xì)胞中的可溶性表達(dá)產(chǎn)物；pEU-His-set7cd通過(guò)無(wú)細(xì)胞麥胚表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)獲得的蛋白與預(yù)測(cè)大小一致，經(jīng)Western blot鑒定正確，并用NTA-Ni2+親和層析純化。體外酶活實(shí)驗(yàn)顯示PfSET7cd具有催化H3第36位賴(lài)氨酸上三甲基化（H3K36me3）活性。結(jié)論:通過(guò)無(wú)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)獲得可溶性的PfSET7cd重組蛋白，PfSET7cd重組蛋白具有介導(dǎo)H3K36me3的活性，但不影響H3K4me3和H3K9me3水平。

惡性瘧原蟲(chóng)；組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶；重組蛋白表達(dá)；無(wú)細(xì)胞麥胚表達(dá)系統(tǒng)；活性鑒定

瘧疾為世界上三大傳染病之一，嚴(yán)重危害著人類(lèi)的健康。最新統(tǒng)計(jì)顯示全球每年約有2億人感染瘧疾，死亡人數(shù)達(dá)到60萬(wàn)之多[1]，了解瘧原蟲(chóng)致病機(jī)制顯得尤為重要。惡性瘧原蟲(chóng)感染過(guò)程中，毒力基因家族（var家族、rif家族和stevor家族）與致病密切相關(guān)[2-4]。已有研究發(fā)現(xiàn)，組蛋白表觀(guān)遺傳學(xué)修飾在調(diào)控惡性瘧原蟲(chóng)毒力基因表達(dá)的過(guò)程中發(fā)揮著非常重要的作用，組蛋白表觀(guān)遺傳學(xué)修飾控制著毒力基因家族的激活、沉默以及選擇性表達(dá)，并和紅內(nèi)期裂殖子侵染以及耐藥性產(chǎn)生[5]有關(guān)。但直到目前為止對(duì)瘧原蟲(chóng)組蛋白修飾酶的研究并不多，尤其是參與組蛋白甲基化修飾的組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶（histone methyltransferase，HMTs）。研究HMTs不僅可以從生化水平明確蛋白質(zhì)的活性功能，同時(shí)能深刻理解該類(lèi)HMTs在惡性瘧原蟲(chóng)感染致病過(guò)程中所扮演的角色，更為以后進(jìn)一步預(yù)防和治療瘧疾提供理論基礎(chǔ)和相應(yīng)的潛在藥物靶點(diǎn)。

CUI等[6]通過(guò)生物信息學(xué)分析，將惡性瘧原蟲(chóng)Pf11_0160基因的產(chǎn)物注釋為SET7。在人類(lèi)細(xì)胞中，SET7/9主要控制組蛋白H3K4甲基化，能廣泛調(diào)節(jié)多種類(lèi)型基因的激活[7]。因此，作為一個(gè)潛在的轉(zhuǎn)錄激活候選因子，我們嘗試研究該惡性瘧原蟲(chóng)組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶SET7（Plasmodium falciparum histone-lysine N-methyltransferase SET7，PfSET7）的組蛋白修飾功能，為后續(xù)研究其在惡性瘧原蟲(chóng)基因尤其是毒力基因和抗藥基因表達(dá)調(diào)控中的作用提供理論基礎(chǔ)。

本研究通過(guò)序列分析獲得PfSET7催化結(jié)構(gòu)域（PfSET7 catalytic domain，PfSET7cd）編碼序列，分別使用桿狀病毒昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)和無(wú)細(xì)胞麥胚表達(dá)系統(tǒng)來(lái)表達(dá)PfSET7cd，并對(duì)表達(dá)獲得的重組PfSET7cd蛋白的酶學(xué)性質(zhì)和功能進(jìn)行了初步的分析研究，為進(jìn)一步了解PfSET7的功能及針對(duì)PfSET7進(jìn)行相關(guān)藥物的研制奠定了一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 載體與菌種:惡性瘧原蟲(chóng)Plasmodium falciparum 3D7，pFast-Bac-N/C、pEU-His載體為本實(shí)驗(yàn)室保存；感受態(tài)大腸桿菌DH5α、感受態(tài)DH10Bac購(gòu)自南京諾唯贊生物有限公司；昆蟲(chóng)細(xì)胞Sf9為本實(shí)驗(yàn)室保存；引物和基因測(cè)序由上海生物工程有限公司完成，Snakeskin透析袋購(gòu)自美國(guó)Pierce公司。

1.1.2 主要試劑:限制性?xún)?nèi)切酶購(gòu)自美國(guó)Thermo scientific；In-fusion無(wú)縫連接試劑盒購(gòu)自南京諾唯贊生物有限公司；質(zhì)粒小抽中抽試劑盒、膠回收試劑盒購(gòu)自德國(guó)Qiagen公司；昆蟲(chóng)培養(yǎng)基Sf-900TMII SFM（1×）購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑LipofectamineTM2000購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司；組氨酸標(biāo)簽抗體購(gòu)自南京EnoGene公司，辣根過(guò)氧化酶（HRP）標(biāo)記的山羊抗鼠二抗購(gòu)自上海聯(lián)科生物技術(shù)公司。麥胚無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)試劑盒WEPRO 7240H購(gòu)自北京天根生化有限公司；組蛋白甲基化H3K4me3抗體、H3K9me3抗體和H3K36me3抗體購(gòu)自美國(guó)Abcam公司；牛胸腺組蛋白提取物購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。

1.2 方法

1.2.1 pFast-N/C-set7cd和pEU-his-set7cd質(zhì)粒的構(gòu)建:惡性瘧原蟲(chóng)P.falciparum 3D7按照文獻(xiàn)[8]方法進(jìn)行培養(yǎng)并提取基因組。引物序列見(jiàn)表1。PCR擴(kuò)增PfSET7基因PF11_0160中的SET結(jié)構(gòu)域片段（260 aa-654 aa），基因序列大小為1 185 bp，PCR反應(yīng)條件為:94 ℃ 4 min；94 ℃ 30 s；54 ℃ 30 s；60 ℃ 60 s；60 ℃ 7 min；30個(gè)循環(huán)。利用Infusion無(wú)縫連接方式將目的序列插入到對(duì)應(yīng)的載體中，線(xiàn)性化載體時(shí)pFast-Bac-N限制性酶切位點(diǎn)為Sal I/Hind I I I、pFast-Bac-C限制性酶切位點(diǎn)為EcoR I/Xho I、pEU-His載體限制性酶切位點(diǎn)為Xho I/Not I。pFast-N-set7cd與pFast-C-set7cd質(zhì)粒的SUMO-His標(biāo)簽分別位于pFast-Bac載體多克隆位點(diǎn)目的序列的N端和C端，可與插入片段融合表達(dá)。

1.2.2 昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)表達(dá):將測(cè)序正確的質(zhì)粒pFast-N/C-set7cd分別轉(zhuǎn)化至感受態(tài)DH10Bac中，通過(guò)藍(lán)白斑篩選48 h后挑取陽(yáng)性單克隆菌37 ℃培養(yǎng)24 h后提取桿狀病毒基因組，通用引物M13F/R進(jìn)行PCR鑒定。PCR鑒定反應(yīng)條件為:94 ℃ 3 min；94 ℃ 30 s；55 ℃ 1.5 min；72 ℃ 6 min；30個(gè)循環(huán)。用脂質(zhì)體方式將鑒定正確的桿狀病毒基因組轉(zhuǎn)染到昆蟲(chóng)細(xì)胞Sf9中。轉(zhuǎn)染用的昆蟲(chóng)Sf9細(xì)胞密度控制在1×106～2×106之間，具體的轉(zhuǎn)染、培養(yǎng)與蛋白表達(dá)步驟參照美國(guó)Invitrogen公司Bac-to-Bac TOPO Expression system操作手冊(cè)，病毒傳代第三代時(shí)（12 d）檢測(cè)蛋白。

1.2.3 無(wú)細(xì)胞麥胚系統(tǒng)表達(dá)PfSET7cd:將測(cè)序正確的質(zhì)粒pEU-His-set7cd轉(zhuǎn)化培養(yǎng)提取質(zhì)粒進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄后翻譯。轉(zhuǎn)錄條件為PCR儀中37 ℃孵育6 h。轉(zhuǎn)錄的mRNA在6孔板中進(jìn)行翻譯，15 ℃，孵育20 h。其中小量反應(yīng)和大量反應(yīng)所用質(zhì)粒量為1 μg和4 μg，反應(yīng)體系和具體步驟參照試劑盒WERPR 7240H使用說(shuō)明。

表1 PCR引物序列信息

1.2.4 重組蛋白檢測(cè):轉(zhuǎn)染后的昆蟲(chóng)細(xì)胞Sf9進(jìn)行病毒傳代培養(yǎng)表達(dá)目的蛋白，將12 d時(shí)收集的樣品分為培養(yǎng)基、細(xì)胞超聲裂解后的上清、沉淀；無(wú)細(xì)胞麥胚表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)離心分為上清和沉淀。2種表達(dá)體系得到的各樣品分別進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）和考馬斯亮藍(lán)染色，分析目的蛋白的表達(dá)。另將得到的各樣品進(jìn)行Western blot鑒定，一抗為鼠源性抗His單抗（1∶2 000稀釋?zhuān)篂樯窖蚩故罂贵w（1∶5 000稀釋?zhuān)?/p>

1.2.5 PfSET7cd蛋白濃縮與純化:麥胚無(wú)細(xì)胞表達(dá)的產(chǎn)物經(jīng)8 000 r/min、4 ℃離心15 min后收集上清，將收集的上清置于透析袋4℃透析過(guò)夜（透析緩沖液:500 mmol/L NaCl、20 mmol/L Tris-HCl，pH 7.9）。透析后上清使用NTA-Ni2+親和層析法進(jìn)行純化[9]并用10% SDS-PAGE鑒定，鑒定后的PfSET7cd蛋白用含有20%甘油的0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液（pH 7.4）4 ℃過(guò)夜透析，濃縮后-20 ℃保存。

1.2.6 PfSET7cd體外酶活鑒定:取純化后PfSET7cd蛋白1 μg與底物組蛋白2 μg在緩沖液中（50 mmol/L Tris-HCl，pH 8.0，10%甘油，20 mmol/L KCl，5 mmol/L MgCl2，1 mmol/L DTT，1 mmol/L PMSF，S-腺苷甲硫氨酸）充分混勻，30 ℃孵育4 h，陰性對(duì)照用反應(yīng)緩沖代替PfSET7cd蛋白。此外，我們用人源的H3K9me2的甲基轉(zhuǎn)移酶G9a作為檢測(cè)體系的陽(yáng)性對(duì)照，其使用量及反應(yīng)條件與PfSET7cd一致。反應(yīng)結(jié)束后用15% SDS-PAGE膠進(jìn)行Western blot鑒定組蛋白底物中H3K4me3、H3K9me3和H3K36me3的變化，一抗為Abcam公司對(duì)應(yīng)的甲基化抗體（1∶2 000稀釋?zhuān)?，二抗為山羊抗兔抗體（1∶10 000稀釋?zhuān)?/p>

2 結(jié)果

2.1 pFast-N/C-set7cd、pEU-His-set7cd質(zhì)粒的構(gòu)建以及重組病毒基因組的鑒定 構(gòu)建的質(zhì)粒pFast-N-set7cd和pFast-C-set7cd分別用Sal I/Hind I I I、EcoR I/Xho I雙酶切和測(cè)序鑒定構(gòu)建成功（見(jiàn)圖1A）。將成功構(gòu)建的pFast-N/C-set7cd質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌DH10Bac中，挑取單克隆菌經(jīng)培養(yǎng)提取重組桿狀病毒基因組，PCR鑒定大小為3 625 bp（見(jiàn)圖1B）。對(duì)構(gòu)建好的質(zhì)粒pEU-His-set7cd進(jìn)行PCR鑒定，結(jié)果為1 185 bp，與目的序列大小一致（見(jiàn)圖1C），測(cè)序結(jié)果正確。

圖1 PfSET7cd重組質(zhì)粒構(gòu)建

2.2 重組蛋白表達(dá)純化與鑒定 SDS-PAGE考馬斯亮藍(lán)染色和Western blot鑒定顯示set7cd在昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)并沒(méi)有獲得可溶性蛋白，目的蛋白僅出現(xiàn)在細(xì)胞裂解后的沉淀中，即蛋白以包涵體的形式表達(dá)，并且表達(dá)量低，考馬斯亮藍(lán)染色無(wú)法檢測(cè)。而無(wú)細(xì)胞麥胚表達(dá)系統(tǒng)得到了預(yù)期的目的蛋白，SDS-PAGE考馬斯亮藍(lán)染色顯示，實(shí)驗(yàn)組在50 kDa處有一條明顯的條帶（見(jiàn)圖2A），與預(yù)測(cè)大小一致；Westernblot結(jié)果顯示，同一位置的條帶具有組氨酸標(biāo)簽（見(jiàn)圖2B），經(jīng)過(guò)NTA-Ni2+親和層析純化得到PfSET7cd（見(jiàn)圖2C），因此我們通過(guò)無(wú)細(xì)胞麥胚表達(dá)方式成功獲得融合了組氨酸標(biāo)簽的可溶性PfSET7cd。

圖2 PfSET7cd蛋白表達(dá)與鑒定

2.3 PfSET7cd蛋白體外酶活鑒定 根據(jù)甲基化修飾的賴(lài)氨酸位點(diǎn)不同，可以激活基因的轉(zhuǎn)錄亦可以抑制基因轉(zhuǎn)錄。我們選取并檢測(cè)了惡性瘧原蟲(chóng)組蛋白H3常見(jiàn)的3個(gè)甲基化修飾位點(diǎn)（H3K4、H3K9和H3K36）的三甲基化變化。用對(duì)應(yīng)的抗體進(jìn)行Western blot檢測(cè)，結(jié)果顯示PfSET7cd并沒(méi)有改變H3K4和H3K9的三甲基化水平，但是H3K36三甲基化水平明顯升高，這表明PfSET7cd蛋白具有催化H3K36三甲基化形成的能力，見(jiàn)圖3。

圖3 PfSET7cd蛋白體外酶活鑒定

3 討論

目前，瘧疾在許多國(guó)家依然是一個(gè)重大的公共衛(wèi)生負(fù)擔(dān)，伴隨著瘧原蟲(chóng)抗藥性的發(fā)生和擴(kuò)散日趨嚴(yán)峻[10-11]，人類(lèi)需要更深刻了解瘧原蟲(chóng)的致病和抗藥性產(chǎn)生機(jī)制來(lái)研制針對(duì)性的疫苗或藥物，而對(duì)瘧原蟲(chóng)基因功能的注釋是最基礎(chǔ)的工作[12]。體外對(duì)蛋白功能活性進(jìn)行研究可以避免瘧原蟲(chóng)復(fù)雜內(nèi)環(huán)境的干擾，有助于獲得清晰明確的結(jié)論，利用成熟的蛋白表達(dá)系統(tǒng)獲得具有活性的可溶性蛋白則是重要前提。不同于常見(jiàn)的模式物種，惡性瘧原蟲(chóng)來(lái)源的蛋白在異源表達(dá)時(shí)普遍存在表達(dá)量低以及表達(dá)產(chǎn)物不溶的特點(diǎn)[13]。一方面是該物種的基因組成中AT含量高達(dá)80%[14-15]，密碼子偏好AT，如AGA/AGG（R），AUA（I），GGA（G）[16]。文獻(xiàn)[16]報(bào)道，優(yōu)化E.coli的tRNA組成可以顯著提高惡性瘧原蟲(chóng)DHPS基因的表達(dá)。常見(jiàn)的幾種表達(dá)系統(tǒng)（大腸桿菌、酵母以及哺乳動(dòng)物）都沒(méi)有專(zhuān)門(mén)針對(duì)高AT編碼基因進(jìn)行過(guò)優(yōu)化，因此容易導(dǎo)致低水平表達(dá)的現(xiàn)象發(fā)生。另一方面Plasmodium falciparum中的蛋白存在大量單氨基酸及多氨基酸的重復(fù)序列，因此在翻譯過(guò)程中，需要一些特定的輔助因子幫助折疊才能形成正確的構(gòu)象[17]，而異源表達(dá)的過(guò)程中缺乏相關(guān)輔助因子，所以極易導(dǎo)致蛋白聚集形成不溶沉淀[18]。

昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)具有大多數(shù)高等真核生物相似的翻譯后修飾加工能力，是一類(lèi)應(yīng)用廣泛的真核表達(dá)系統(tǒng)。我們嘗試在蛋白的N端或C端融合了SUMO標(biāo)簽以促進(jìn)產(chǎn)物可溶性，但只有極少量不溶性產(chǎn)物存在于細(xì)胞沉淀中。我們懷疑不溶產(chǎn)物是因?yàn)槿鄙俦匾恼郫B輔助因子導(dǎo)致蛋白大量聚集。

本研究中，我們進(jìn)一步嘗試了無(wú)細(xì)胞麥胚表達(dá)系統(tǒng)。該系統(tǒng)具有快速、高通量的優(yōu)點(diǎn)，并且不需要密碼子優(yōu)化[19-21]。RUI等[22]專(zhuān)門(mén)比較過(guò)原核表達(dá)系統(tǒng)和麥胚無(wú)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)在惡性瘧原蟲(chóng)蛋白表達(dá)上的特點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)麥胚無(wú)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)更容易獲得大量的可溶性蛋白產(chǎn)物。本研究分別用無(wú)細(xì)胞麥胚表達(dá)系統(tǒng)和昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)來(lái)表達(dá)重組PfSET7cd，發(fā)現(xiàn)無(wú)細(xì)胞麥胚表達(dá)系統(tǒng)的重組PfSET7cd表達(dá)量明顯提高，并且都以可溶形式存在，明顯優(yōu)于昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)。

CUI等[6]將Plasmodium falciparum的PfSET7歸類(lèi)到SET7家族。已有報(bào)道顯示人的SET7/9（Hs-SET7/9）主要負(fù)責(zé)H3K4的甲基化[23]。由于PfSET7和HsSET7/9同源性?xún)H為12.8%，故二者在底物特異性上可能會(huì)有所差別。因此在活性檢測(cè)時(shí)，我們同時(shí)檢測(cè)了組蛋白H3的K4、K9和K36位的甲基化修飾。而本研究的結(jié)果也顯示，PfSET7cd并不能催化H3K4和H3K9的甲基化，而對(duì)H3K36三甲基化具有較高活性。

當(dāng)前已知的在哺乳動(dòng)物中可催化H3K36發(fā)生甲基化的酶有SET2和NSD1[23]，而H3K36甲基化修飾多存在于轉(zhuǎn)錄活化基因的編碼區(qū)，主要影響基因轉(zhuǎn)錄的激活過(guò)程[24]，與染色體激活區(qū)域有關(guān)。而在惡性瘧原蟲(chóng)中，H3K36甲基化與毒力基因家族的激活有著密切的聯(lián)系[5]，提示PfSET7有可能參與到毒力基因家族的表達(dá)調(diào)控中。這為進(jìn)一步研究PfSET7的生物學(xué)功能，探索惡性瘧原蟲(chóng)表觀(guān)遺傳及針對(duì)PfSET7相關(guān)藥物抑制劑的研制奠定了一定的基礎(chǔ)。

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（本文編輯：趙翠翠）

Expression and activity identif cation of Plasmodium falciparum histone H3 methyltransferase SET7 cata-

lytic domain

ZHANG Liangliang1, CAI Liya1, WEI Qimei1, JIANG Lubin2, LIANG Shaohui1. 1.Department

of Parasitology, School of Basic Medical Science, Wenzhou Medical University, Wenzhou, 325035; 2.Key Laboratory of Molecular Virology & Immunology, Institute Pasteur of Shanghai Chinese Academy of Sciences, Shanghai, 200031

Objective：To construct the recombinant baculovirus expression plasmid pFast-N-set7cd, pFast-C-set7cd and cell-free wheat germ expression vector pEU-His-set7cd, to express Plasmodium falciparum histonelysine N-methyltransferase SET7 catalytic domain (PfSET7cd), and to identify PfSET7cd protein methyltransferase activity.Methods：pFast-N/C-set7cd and pEU-His-set7cd were constructed for expression of recombinant PfSET7cd by baculovirus-insect cell system and wheat germ cell-free expression system, respectively, and recombinant protein was identif ed by SDS-PAGE and Western blotting. Furthermore, recombinant protein was purif ed and applied in vitro enzymatic activity assay.Results：The recombinant plasmid pFast-N-set7cd and pFast-C-set7cd were constructed successfully and conformed by sequencing. However, no soluble PfSET7cd protein was detected by Western blotting in insect cells. By wheat germ cell-free expression system, soluble recombinant PfSET7cd was expressed and the molecular weight of protein agreed well with the theoretical prediction, which was identif ed by Western blot. And then, recombinant PfSET7cd was purif ed with NTA-Ni2+aff nity column. In vitro enzymatic activity assay showed that PfSET7cd exhibites H3K36me3 activity.Conclusion：Soluble recombinant protein, PfSET7cd, can be successfully obtained by wheat germ cell-free expression system, and this protein can catalyze H3K36 trimethylation (H3K36me3) in vitro while has no effects on the H3K4 trimethylation (H3K4me3) or H3K9 trimethylation (H3K9me3).

Plasmodium falciparum; histone-lysine N-methyltransferase; recombinant protein expression; wheat germ cell-free expression system; activity identif cation

R382.3

A

10.3969/j.issn.2095-9400.2017.02.006

2016-07-01

浙江省科技廳公益技術(shù)研究社會(huì)發(fā)展項(xiàng)目（2015C33101）；浙江省大學(xué)生科技創(chuàng)新活動(dòng)計(jì)劃（2014R 413079）；溫州市公益科技項(xiàng)目（Y20140481）。

張亮亮（1989-），男，山西長(zhǎng)治人，碩士生。

梁韶暉，教授，碩士生導(dǎo)師，Email:lsh@wmu.edu.cn。