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    2012至2016年廣西血紅蛋白組分室間質(zhì)量評價結(jié)果的回顧性分析*

    2017-03-29 10:26:34唐娟周微雅周向陽劉曉春何毅
    臨床檢驗雜志 2017年2期
    關(guān)鍵詞:低值凝膠電泳瓊脂糖

    唐娟,周微雅,周向陽,劉曉春,何毅

    (廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院廣西臨床檢驗中心,南寧 530021)

    ·質(zhì)量管理研究·

    2012至2016年廣西血紅蛋白組分室間質(zhì)量評價結(jié)果的回顧性分析*

    唐娟,周微雅,周向陽,劉曉春,何毅

    (廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院廣西臨床檢驗中心,南寧 530021)

    目的 評價實驗室對血紅蛋白組分中血紅蛋白A2(HbA2)和血紅蛋白F(HbF)的檢測能力。方法 2012至2016年每年進行2次有關(guān)HbA2和HbF的室間質(zhì)量評價,每次評價5個樣本;按室間質(zhì)量評價流程要求,各實驗室在規(guī)定時間內(nèi)檢測樣本并上傳檢測結(jié)果,依據(jù)回報結(jié)果統(tǒng)計各檢測系統(tǒng)5年的使用分布情況、各實驗室的合格率,計算并分析各檢測系統(tǒng)、各檢測方法的離散程度及不同濃度水平質(zhì)控品檢測結(jié)果變異情況。結(jié)果 2016年,高效液相色譜法(HPLC)和毛細管電泳法(CE)使用率分別提高至46.1%(82/178)、18.0%(32/178);2012至2016年,HbA2和HbF合格率由51.5%(34/66)、60.6%(40/66)分別提高至93.3%(166/178)、92.1%(164/178);各檢測系統(tǒng)的平均變異系數(shù)(CV)逐年縮小;Bio-Rad VariantⅡ和Sebia CAPILLARYS 2檢測系統(tǒng)高、中、低值HbA2質(zhì)控品檢測結(jié)果平均CV較好,可控制在6.0%內(nèi);HPLC和CE可定量分析HbA2和HbF指標,總體檢測能力優(yōu)于瓊脂糖凝膠電泳法。結(jié)論 通過室間質(zhì)量評價考核實驗室檢測HbA2和HbF能力,量化HbA2和HbF指標,為地中海貧血篩查和防治工作提供質(zhì)量保證與數(shù)據(jù)支持。

    地中海貧血;血紅蛋白A2;血紅蛋白F;室間質(zhì)量評價

    地中海貧血(以下簡稱“地貧”)表型分析指標除紅細胞平均容積(MCV)、紅細胞平均血紅蛋白量(MCH)外,另一組重要指標是血紅蛋白A2(haemoglobin A2,HbA2)和血紅蛋白F(haemoglobin F,HbF)[1]。本研究通過對2012至2016年HbA2和HbF室間質(zhì)量評價(external quality assessment,EQA)結(jié)果及存在問題進行回顧性分析,比較參評實驗室、不同檢測系統(tǒng)(儀器、試劑、方法學)HbA2和HbF檢測質(zhì)量,以了解廣西地貧實驗室檢測能力。

    1 材料與方法

    1.1 EQA樣本制備 根據(jù)國際血液學標準化委員會(ICSH)建議,采用新鮮血為原料制備質(zhì)控品。收集HbA2和HbF高、低值新鮮EDTA-K2抗凝全血,ABO血型相同者按比例混合,調(diào)整HbA2和HbF濃度。HbA2高值調(diào)整為占血紅蛋白量的4%~6%,中值為2.5%~3.5%,低值為1.5%~2.5%;HbF高值調(diào)整為占血紅蛋白量的35%~50%,中值為10%~30%,低值為1%~5%;分裝完成后各濃度質(zhì)控品隨機抽取10支,用Bio-Rad VariantⅡ和Sebia CAPILLARYS 2完成瓶間差異檢測,檢測值都在均值±2%范圍內(nèi)為瓶間差異合格。質(zhì)控品從制備到發(fā)放、檢測等整個流程在21 d內(nèi)完成[2]。

    1.3 統(tǒng)計學分析 用Clinet統(tǒng)計軟件及Microsoft Excel 2007軟件對各參評實驗室檢測結(jié)果進行統(tǒng)計和分析。單個樣本檢測結(jié)果在允許范圍內(nèi)計20分,成績≥80分為合格。計算2012至2016年各實驗室的滿分率、合格率,各檢測系統(tǒng)的平均變異系數(shù)(CV)及各濃度段質(zhì)控品的平均CV。

    2 結(jié)果

    2.1 檢測系統(tǒng)和方法 HbA2和HbF的檢測系統(tǒng)共有7種,檢測方法主要有3種。2012年大多數(shù)實驗室采用瓊脂糖凝膠電泳法,占72.7%(48/66)。2013年后,使用高效液相色譜法(high performance liquid chromatography, HPLC)的Bio-Rad VariantⅡ儀及毛細管電泳法(capillary electrophoresis,CE)的Sebia CAPILLARYS 2儀的實驗室逐漸增多,2016年分別占46.1%(82/178)和18.0%(32/178)。見表1。

    表1 2012至2016年廣西Hb組分EQA各檢測系統(tǒng)使用情況(n)

    2.2 實驗室滿分率和合格率 2012年第1次EQA HbA2和HbF合格率分別是51.5%(34/66)和60.6%(40/66)。2013年后HbA2和HbF合格率均大幅度提高,2016年實驗室合格率分別達93.3%(166/178)和92.1%(164/178)。HbA2和HbF滿分率從2012年的30.3%(20/66)和34.9%(23/66)提高到2016年的86.5%(154/178)和78.1%(139/178)。

    2.3 各檢測系統(tǒng)及方法離散程度的比較 7種檢測系統(tǒng)HbA2和HbF檢測結(jié)果的平均CV逐年縮小。瓊脂糖凝膠電泳法HbA2檢測結(jié)果的平均CV(12.1%~22.0%)優(yōu)于HbF(15.8%~24.9%)。3種不同檢測方法檢測結(jié)果顯示,HPLC、CE 5年EQA的平均CV均在6.0%以內(nèi),小于瓊脂糖凝膠電泳法的平均CV(12.1%~24.9%)。見表2。

    表2 不同檢測系統(tǒng)HbA2和HbF檢測結(jié)果的平均CV(%)

    注:-,無數(shù)據(jù)。

    2.4 高、中、低值HbA2的EQA結(jié)果 高、中、低值HbA2質(zhì)控品3種方法檢測結(jié)果顯示,低值HbA2質(zhì)控品的5年平均CV較中、高值大。HPLC和CE檢測高、中、低值HbA2質(zhì)控品的5年EQA平均CV相差不大,均≤6.0%(分別為4.2%、4.7%、6.0%)。瓊脂糖凝膠電泳法檢測高、中、低值HbA2質(zhì)控品5年EQA平均CV分別為15.2%、11.5%、10.1%。

    3 討論

    HbA2定量分析是地貧表型分析的重要參數(shù)[4],HbF升高對中間型、重型β地貧及δβ地貧診斷有重要意義[5]。因此,HbA2和HbF室間質(zhì)量評價是地貧防治的重要質(zhì)量保證。

    2012年第1次HbA2和HbF項目實驗室合格率均較低,主要原因是以往無該項目的EQA,無法與其他實驗室比對,且部分實驗室所用方法學誤差較大。目前,HbA2/HbF常用的3種檢測方法中,HPLC、CE為定量檢測[6],瓊脂糖凝膠電泳法為半定量檢測。2012年參評實驗室使用瓊脂糖凝膠電泳法較多,占72.7%。瓊脂糖凝膠電泳法的操作是先將血紅蛋白各組分通過電泳分開再對各組分條帶顯色,電腦掃描顯色圖,人工判斷HbA2和HbF切割點,利用軟件計算各組分的相對含量。不同操作人員對切割點的判斷、圖片掃描質(zhì)量及軟件對顯色深淺識別的差異均會帶來較顯著的分析誤差。此外,部分使用瓊脂糖凝膠電泳法的實驗室未能有效開展日常室內(nèi)質(zhì)量控制和校準,檢測的重復性和準確性得不到保證。2013年后部分實驗室更換了HPLC和CE定量檢測法,加強室內(nèi)質(zhì)量控制和日常校準,其日間CV可控制在3%以內(nèi)。同時,EQA促進了實驗室相關(guān)人員對HbA2/HbF檢測質(zhì)量控制知識的學習與持續(xù)改進,其精密度和準確性進一步提高,各參評實驗室EQA成績合格率明顯提升。

    本研究采用新鮮人全血樣本作為EQA質(zhì)控品,接近患者檢測樣本,較好地克服了凍干品或商品質(zhì)控品添加穩(wěn)定劑及其他物質(zhì)所存在的基質(zhì)效應(yīng)和干擾。EQA數(shù)據(jù)顯示,實驗室使用Bio-Rad VariantⅡ(HPLC)和Sebia CAPILLARYS 2(CE)檢測系統(tǒng)檢測HbA2和HbF的平均室間CV在6.0%以內(nèi),其他檢測系統(tǒng)的平均CV也逐年遞減。

    為了解參評實驗室對臨床診斷的檢測質(zhì)量,我們設(shè)計了高值、中值和低值質(zhì)控品。由于HbA2參考區(qū)間窄(2.5%~3.5%)[7],要求檢測方法的變異控制在一定范圍,若變異較大,將影響臨床判斷。HPLC和CE檢測HbA2高、中、低值質(zhì)控品平均CV可控制在6.0%以內(nèi),與意大利Paleari等[8]報道的7.1%較為接近,基本可以滿足臨床對檢測變異的要求。但瓊脂糖凝膠電泳法高值室間變異高達15.8%,其檢測精度有待進一步提高。

    隨著國際臨床化學和實驗室醫(yī)學聯(lián)盟(IFCC)HbA2和HbF工作組標準化工作的推進[5,7],有望進一步解決該項目參考方法、參考物質(zhì)和溯源問題。實驗室規(guī)范日常校準、室內(nèi)質(zhì)量控制,結(jié)合EQA與持續(xù)改進,可進一步改善HbA2和HbF檢測的重復性和準確性,為臨床篩查和地貧防治提供實驗室質(zhì)量保證和支持。

    [1]唐娟,周向陽,劉曉春,等. 地中海貧血血細胞質(zhì)控品的研制和評價[J].臨床檢驗雜志,2015,33(11):864-867.

    [2]Stephens AD, Angastiniotis M, Baysal E,etal. ICSH recommendations for the measurement of haemoglobin A2[J]. Int J Lab Hematol, 2012, 34(1): 1-13.

    [3]何法霖, 王薇, 鐘堃,等. 血紅蛋白A2和F的室間質(zhì)量評價結(jié)果分析[J]. 現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志,2015,30(2): 156-159.

    [4]Paleari R, Munoz A, Mosca A. Towards the development of a certified reference material for hemoglobin A2 [J]. Clin Chem Lab Med,2010,48(11) :1611-1618.

    [5]Stephens AD, Angastiniotis M, Baysal E,etal. ICSH recommendations for the measurement of haemoglobin F[J]. Int J Lab Hematol, 2012, 34(1): 14-20.

    [6]Van DP, Lenters E, Bakker VM,etal. Evaluating five dedicated automatic devices for haemoglobinopathy diagnostics in multi-ethnic populations[J]. Int J Lab Hematol, 2009, 31(5):484-495.

    [7]Stephens AD, Angastiniotis M, Baysal E,etal. ICSH recommendations for the measurement of haemoglobin A2[J].Int J Lab Hematol. 2012,34(1):1-13.

    [8]Paleari R,Giambona A, Cannata M,etal. External quality assessment of hemoglobin A2 measurement: data from an Italian pilot study with fresh whole blood samples and commercial HPLC systems[J]. Clin Chem Lab Med, 2007, 45(1):88-92.

    (本文編輯:王海燕)

    Retrospective analysis of external quality assessment results for hemoglobin measurement in Guangxi Province during 2012 to 2016

    TANGJuan,ZHOUWei-ya,ZHOUXiang-yang,LIUXiao-chun,HEYi

    (ClinicalLaboratoryCenterofGuangxi,ThePeople′sHospitalofGuangxiZhuangAutonomousRegion,Nanning530021,Guangxi,China)

    Objective To evaluate the detection competence of HbA2 and HbF in Guangxi medical laboratories. Methods The external quality assessment(EQA) of HbA2 and HbF was conducted twice a year and five samples was detected each time during 2012 to 2016. The laboratories participated in EQA completed the samples′ detection and submitted the detection results at specified time according to the requirements of EQA. The distribution of each detection system, the qualification rate of each laboratory, the variation degrees of each detection system and each detection method, and the variations of results for different levels of quality control(QC) materials during 5 years were analyzed based on the returned results. Results The application of high performance liquid chromatography(HPLC) and capillary electrophoresis(CE) increased year by year and their usage rates in 2016 reached up to 46.1%(82/178) and 18.0%(32/178), respectively. The qualification rates of HbA2 and HbF increased from 51.5%(34/66) and 60.6%(40/66) in 2012 to 93.3%(166/178) and 92.1%(164/178) in 2016, respectively. The average coefficient of variation(CV) of each detection system decreased year by year. There were goodCVs for the results of high, medium and low levels of HbA2 QC materials detected by the Bio-Rad Variant Ⅱ and Sebia CAPILLARYS 2 systems, and they were less than 6.0%. HPLC and CE could quantitatively detect the HbA2 and HbF levels, and their total detection competence was superior to that of agarose gel electrophoresis. Conclusion EQA can assess the ability of one laboratory detecting HbA2 and HbF, and quantitatively analyze the levels of HbA2 and HbF, which may provide the quality assurance and data support for the screening and prevention of thalassemia.

    thalassemia; haemoglobin A2; haemoglobin F; external quality assessment

    10.13602/j.cnki.jcls.2017.02.17

    廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)計委科研課題(z2014221)。

    唐娟,1983年生,女,主管技師,碩士,主要從事臨床血液檢驗質(zhì)量控制研究。

    周向陽,副主任技師,E-mail:zhouxyang@126.com。

    R446

    A

    2016-11-16)

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