葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏對3種HbA1c檢測系統(tǒng)結(jié)果的干擾評價*

胡耀宗，王偉佳，溫冬梅，張德才，蕭金麗，陳亞瓊

(中山大學(xué)附屬中山醫(yī)院檢驗醫(yī)學(xué)中心，廣東中山 528403)

·臨床檢驗技術(shù)研究·

葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏對3種HbA1c檢測系統(tǒng)結(jié)果的干擾評價*

胡耀宗，王偉佳，溫冬梅，張德才，蕭金麗，陳亞瓊

(中山大學(xué)附屬中山醫(yī)院檢驗醫(yī)學(xué)中心，廣東中山 528403)

目的 觀察葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)缺乏對糖化血紅蛋白(HbA1c)檢測結(jié)果的影響。方法 收集2012年8月至2016年4月中山大學(xué)附屬中山醫(yī)院286份標(biāo)本，分別為健康組122例、糖尿病組82例、G6PD缺乏癥組61例及糖尿病伴G6PD缺乏癥組21例。用Primus Ultra2、Variant Ⅱ Turbo 2.0和Modular P 3種檢測系統(tǒng)檢測HbA1c，將HbA1c換算成估計平均血糖濃度(eAG)，計算與空腹血糖(FPG)的差值(△eAG-FPG)，對各組△eAG-FPG進行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果 G6PD缺乏組及糖尿病伴G6PD缺乏組在3個檢測系統(tǒng)中的HbA1c、△eAG-FPG均偏低，且分別與健康組及糖尿病組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)。結(jié)論 G6PD缺乏均使Primus Ultra2、Variant Ⅱ Turbo和Modular P檢測系統(tǒng)HbA1c結(jié)果假性偏低，臨床醫(yī)生用HbA1c評估G6PD缺乏人群血糖控制水平時，應(yīng)注意G6PD缺乏所造成的影響。

葡萄糖-6-磷酸脫氫酶；糖化血紅蛋白；估計平均血糖濃度；干擾

糖化血紅蛋白(HbA1c)是評價糖尿病患者血糖監(jiān)測情況的首選指標(biāo)，美國糖尿病協(xié)會(ADA)提出HbA1c≥6.5%可作為糖尿病的診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]。據(jù)文獻報道[2]，HbA1c結(jié)果會受到某些因素如血紅蛋白病、溶血性疾病等影響。葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)缺乏癥是我國南方地區(qū)發(fā)病率較高的遺傳性疾病，G6PD缺乏影響磷酸戊糖途徑還原型輔酶Ⅱ(NADPH)生成，使還原型谷胱甘肽(GSH)生成減少，導(dǎo)致紅細胞易受氧化損傷，引起溶血性貧血[3]。G6PD缺乏癥患者患高血壓及糖尿病風(fēng)險更大[4]，據(jù)有關(guān)報道，G6PD缺乏是2型糖尿病的獨立危險因素之一[5]。因此，對G6PD缺乏人群及糖尿病伴G6PD缺乏人群的HbA1c結(jié)果的準(zhǔn)確性評價至關(guān)重要。本研究用國內(nèi)常見3種HbA1c檢測系統(tǒng)，對G6PD缺乏人群與糖尿病伴G6PD缺乏人群的HbA1c結(jié)果進行干擾評價。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 收集2012年8月至2016年4月中山大學(xué)附屬中山醫(yī)院患者和健康體檢者全血和血清標(biāo)本286例，分為健康組、糖尿病組、G6PD缺乏癥組、糖尿病伴G6PD缺乏癥組。其中，健康組122例，男62例，女60例，年齡20～80歲，中位年齡48歲；符合WHO 1999年診斷標(biāo)準(zhǔn)的糖尿病(DM)82例，男39例，女43例，年齡29～82歲，中位年齡52歲；符合G6PD活性<700 U/L的單純G6PD缺乏癥61例，男31例，女30例, 年齡2～72歲，中位年齡45歲；符合WHO 1999年診斷標(biāo)準(zhǔn)且G6PD活性<700 U/L的糖尿病伴G6PD缺乏癥21例，男11例，女10例，年齡38～71歲，中位年齡49歲。以上研究對象血標(biāo)本均不含血紅蛋白變異體、高脂等干擾因素。

1.2 標(biāo)本采集與處理 空腹采集2 mL靜脈血，EDTA-K2抗凝，用于Hb、HbA1c和G6PD活性檢測，所有收集的標(biāo)本測定RBC、Hb和G6PD活性后-70 ℃保存，避免反復(fù)凍融。空腹采集3 mL靜脈血于含促凝劑真空采血管，離心并分離血清，用于總膽紅素(T-Bil)、尿素(Urea)、三酰甘油(TG)等檢測。空腹采集2 mL靜脈血，氟化鈉抗凝，用于空腹血糖(FPG)檢測。

1.3 檢測系統(tǒng)與方法 Primus Ultra2全自動糖化血紅蛋白分析儀及其配套試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和配套消耗品(美國Trinity Biotech公司)，用硼酸鹽親和層析高效液相色譜法(affinity chromatography high performance liquid chromatography，AC-HPLC)檢測HbA1c。Variant Ⅱ Turbo 2.0 全自動糖化血紅蛋白分析儀及配套試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和配套消耗品(美國BioRad公司)，用離子交換高效液相色譜法(ionexchange high performance liquid chromatography，IE-HPLC)檢測HbA1c。Modular P全自動生化分析儀及配套HbA1c試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和配套消耗品(瑞士Roche公司)，用免疫抑制比濁法檢測HbA1c；G6PD試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品(北京利德曼公司)，用葡萄糖-6-磷酸底物法檢測G6PD活性。Cobas 8000全自動生化分析儀及其配套試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和配套消耗品(瑞士Roche公司)，用己糖激酶法檢測空腹血糖(FPG)、用甘油磷酸氧化酶-過氧化氫酶(GPO-PAP)法檢測TG、用尿素酶法檢測Urea、用重氮法檢測T-Bil。用XE 2100血液分析儀及其配套試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品(日本Sysmex公司)檢測RBC、Hb。

1.4 實驗方案 通過新鮮全血賦值的方法[6]實現(xiàn)3個系統(tǒng)檢測結(jié)果的可比性，檢測4組HbA1c水平，并用HbA1c換算出估計平均血糖濃度(estimated average glucose，eAG)[7]，eAG(mmol/L)=1.59×HbA1c-2.59，用eAG與FPG的差值與健康人群進行比較，評估G6PD缺乏對HbA1c的檢測是否存在干擾。

2 結(jié)果

2.1 RBC、Hb、T-Bil、Urea、TG和FPG結(jié)果 見表1。健康組與單純G6PD缺乏癥組，糖尿病組與糖尿病伴G6PD缺乏癥組的RBC、Hb、T-Bil差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)，Urea、TG、FPG差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。

2.2 HbA1c和△eAG-FPG結(jié)果 見表2。健康組與單純G6PD缺乏癥組，糖尿病組與糖尿病伴G6PD缺乏癥組在3個檢測系統(tǒng)中HbA1c、△eAG-FPG差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)。

G6PD正常人群△eAG-FPG幾乎均位于Y軸正方向，eAG比空腹血糖濃度高;而G6PD缺乏人群△eAG-FPG偏低，甚至出現(xiàn)負數(shù)，G6PD缺乏人群eAG水平偏低，即HbA1c水平偏低。見圖1。

表1 4組研究對象RBC、Hb、T-Bil、Urea、TG和FPG結(jié)果

表2 4組研究對象HbA1c與△eAG-FPG結(jié)果

圖1 4組樣本3種檢測系統(tǒng)檢測的△eAG-FPG結(jié)果

3 討論

脂血、黃疸、氨基甲酰化血紅蛋白等因素會對HbA1c檢測造成干擾[8]，而HbA1c檢測的不同方法學(xué)抗干擾能力差異有別。本研究顯示，健康組與G6PD缺乏癥組，糖尿病組與糖尿病伴G6PD缺乏癥組Urea、TG、FPG差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)，而T-Bil差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。但本研究中3種HbA1c檢測系統(tǒng)對黃疸標(biāo)本的抗干擾能力較強，幾乎不受黃疸的干擾[9]。

研究結(jié)果顯示，G6PD缺乏組、糖尿病伴G6PD缺乏組分別與健康組、糖尿病組比較，3種檢測系統(tǒng)檢測HbA1c結(jié)果均偏低(P均<0.05)，初步認為G6PD缺乏使HbA1c結(jié)果降低。本研究收集的標(biāo)本例數(shù)較少，所以用ADA推薦的公式計算eAG，利用eAG與患者血糖的差值比較，△eAG-FPG在3種檢測系統(tǒng)中偏低，甚至為負數(shù)，即2組在3種檢測系統(tǒng)HbA1c的檢測值比理論值偏低，所以根據(jù)HbA1c換算后的eAG不能反映患者血糖平均水平。因此，我們認為G6PD缺乏導(dǎo)致HbA1c的檢測受到負干擾，造成檢測結(jié)果假性偏低。本研究結(jié)果說明G6PD缺乏患者無論是否合并糖尿病，其HbA1c水平都不能反映其真實血糖平均水平。至于HbA1c受到的干擾程度是否隨G6PD活性下降而改變，有待進一步研究。

在G6PD缺乏癥的高發(fā)地區(qū)，實驗室工作人員和臨床醫(yī)生若發(fā)現(xiàn)HbA1c檢測結(jié)果與血糖濃度不相關(guān)時，應(yīng)確定是否存在G6PD缺乏，若存在G6PD缺乏應(yīng)選用其他替代指標(biāo)如糖化清蛋白(GA)、果糖胺(GSP)輔助判斷血糖監(jiān)測效果。

[1]Sack DB, Arnold M, Bakris GL,etal. Guidelines and recommendations for laboratory analysis in the diagnosis and management of diabetes mellitus Diabetes Care[J]. 2011,34(6): e61-99.

[2]涂國華, 姜旭淦. 糖化血紅蛋白的研究現(xiàn)狀與進展[J]. 臨床檢驗雜志, 2011,29(8):605-608.

[3]陸小梅, 彭琪, 黎四平. 葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥研究現(xiàn)狀[J]. 國際兒科學(xué)雜志, 2014,41(4) :373-379.

[4]Gaskin RS，Estwick D，Peddi R. G6PD deficiency: its role in the high prevalence of hypertension and diabetes mellitus [J]． Ethn Dis，2001，11(4) : 749-754.

[5]Carette C, Dubois-Laforgue D, Gautier JF,etal. Diabetes mellitus and glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency: from one crisis to another[J]. Diabetes Metab, 2011, 37(1):79-82.

[6]溫冬梅, 張秀明, 吳劍楊,等. 新鮮全血賦值傳遞實現(xiàn)不同HbA1c檢測系統(tǒng)測定結(jié)果的溯源性和可比性[J]. 臨床檢驗雜志, 2014, 32(10):790-792.

[7]Nathan DM, Kuenen J, Borg R,etal. Translating the A1C assay into estimated average glucose values[J]. Diabetes Care, 2008, 31(8):1473-1478.

[8]李卿, 居漪. 糖化血紅蛋白A1c的檢測方法和干擾因素[J]. 臨床檢驗雜志, 2012，30(6):418-420.

[9]陳穎, 溫冬梅, 張秀明,等. 四種方法檢測糖化血紅蛋白的干擾性能評價[J]. 臨床檢驗雜志, 2013，31(10):786-787.

(本文編輯：王海燕)

Interference of glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency on measurements of glycated hemoglobin by three detection systems

HUYao-zong,WANGwei-jia,WENdong-mei,ZHANGde-cai,XIAOjin-li,CHENya-qiong

(ClinicalLaboratoryCenter,ZhongshanHospitalofSunYat-SunUniversity,Zhongshan528403,Guangdong,China)

Objective To observe the interference of glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) deficiency on glycated hemoglobin (HbA1c) detected by three measurement systems. Methods A total of 286 cases of blood and serum samples were collected at Zhongshan Hospital of Sun Yat-Sun University from August 2012 to April 2016. The blood samples were divided into healthy control group (122 cases), diabetes group (82 cases), glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency group (61 cases) and diabetes with G6PD deficiency group (21 cases). The levels of HbA1c were detected by three measurement systems, including Primus Ultra2, Variant Ⅱ Turbo 2.0 and Modular P. The results of HbA1c were converted into the estimated average blood glucose concentration (eAG). The values of △eAG-FPG in different groups were calculated and statistical analysis was performed for evaluation of the differences from the three measurement systems. Results The HbA1c results measured by the three systems and △eAG-FPG values in G6PD deficiency group were all lower than healthy control group(allP<0.05). The measured results were similar in both diabetes group and diabetes with G6PD deficiency group. Conclusion G6PD deficiency may cause false HbA1c results detected by three measurement systems. In the case of HbA1c for evaluating blood glucose control, the interference of G6PD deficiency should be noticed.

glucose-6-phosphate dehydrogenase; glycated hemoglobin; estimated average glucose; interference

中山市科技計劃(20122A034)。

胡耀宗，1993年生，男，技師，大學(xué)本科，主要從事臨床生物化學(xué)檢驗工作。

溫冬梅，主任技師，E-mail：swan4130@163.com。

R446；R587.1

A

2016-08-04)