新生兒膽紅素濃度與UGT1A1基因G71R突變以及G6PD缺陷的相關(guān)性研究

黃晶　郭艷　陳沛?zhèn)ァ罘?/p>

[摘 要] 目的：探討葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶1A1（ UGT1A1）基因G71R突變合并葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）缺陷對新生兒膽紅素濃度的影響。方法：2013年1月至2014年5月間62例足月新生兒62例，根據(jù)臍血G6PD水平分組，G6PD缺陷組36例，G6PD正常組26例，檢測UGT1A1基因G71R突變和出生后3d膽紅素水平變化。結(jié)果：G6PD缺陷組病例與正常組的UGT1A1基因型分布比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，兩組間等位基因G71R突變頻率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。G6PD缺陷組與正常組病例UGT1A1基因G71R純合子/雜合子型的膽紅素水平在出生后1 d時比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），出生后2 d和3 d比較缺陷組顯著高于正常組（P<0.05）。G6PD正常組出生后1 ～3 d 兩種基因型膽紅素水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：UGT1A1基因G71R突變與G6PD缺陷在加重新生兒膽紅血癥及黃疸方面具有協(xié)同作用，應(yīng)密切觀察和監(jiān)護該類患兒，及早發(fā)現(xiàn)膽紅素水平異常和早期干預(yù)，以減少因膽紅素血癥引發(fā)的各類危重疾病的發(fā)生。

[關(guān)鍵詞] UGT1A1基因；G71R突變；G6PD缺陷；新生兒膽紅素濃度

中圖分類號：R722 文獻標(biāo)識碼：B 文章編號：2095-5200（2017）01-126-02

DOI：10.11876/mimt201701051

新生兒高膽紅素血癥可通過光療治療，但重癥患兒可引起膽紅素腦病，即使幸存，也可能遺留永久性神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥[1]。近些年來，分子生物學(xué)對新生兒高膽紅素血癥的基因研究不斷深入。研究發(fā)現(xiàn)葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶1A1（UGT1A1）基因突變可引發(fā)葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶（UGT）的功能和結(jié)構(gòu)性改變，影響膽紅素的結(jié)合[2]，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）缺陷可致高膽紅素血癥[3]。本文探討UGT1A1基因G71R突變合并G6PD缺陷對新生兒膽紅素濃度的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究樣本為我院2013年1月至2014年5月間62例足月新生兒，男/女為34/28，平均孕周（39.2±1.2）周，母乳喂養(yǎng)56例，人工喂養(yǎng)6例。排除早產(chǎn)、低體重、敗血癥、肝功能異常、ABO溶血、窒息、顱內(nèi)出血、頭顱血腫、低血糖、紅細胞增多癥、嚴重感染患兒以及孕母妊娠期有高危并發(fā)癥患兒。采集新生兒臍血或新生兒娩出后24 h內(nèi)血液。采用熒光分析法檢測G6PD，≤2.2為G6PD缺陷。根據(jù)G6PD水平將患兒分為G6PD缺陷組36例，G6PD正常組26例，兩組患兒性別、出生時體質(zhì)量等基本資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

1.2 方法

UGT1A1基因G71R突變檢測參考文獻[4]，PCR引物為上海生工生物工程技術(shù)有限公司提供。

使用日本APEL公司膽紅素測定儀，于每日清晨測定患兒膽紅素水平，連續(xù)測定3 d。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

相關(guān)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS19.0軟件處理分析，計數(shù)資料以%表示，計量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，分別應(yīng)用卡方檢驗和t檢驗，P<0.05時認為數(shù)據(jù)間比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組別病例UGT1A1基因型分布和G71R突變頻率

如表1所示，G6PD缺陷組病例與正常組的UGT1A1基因型分布比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，兩組間等位基因G71R突變頻率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

2.2 不同組別病例膽紅素水平測定結(jié)果

如表2所示，G6PD缺陷組病例出生后1 d UGT1A1基因G71R純合子/雜合子型的膽紅素水平與野生型比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），出生后2 d和3 d純合子/雜合子型的膽紅素水平顯著高于野生型（P<0.05）；G6PD正常組病例出生后1 d、2 d和3 d UGT1A1基因G71R的純合子/雜合子分型與野生型比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

3 討論

3.1 膽紅素

膽紅素主要來源于血紅蛋白，可非極性與白蛋白結(jié)

合[5]。新生兒膽紅素是判定黃疸的關(guān)鍵指標(biāo)。了解影響新生兒膽紅素水平的機制對于改善高膽紅素血癥患兒預(yù)后具有重要意義[6]。

3.2 UGT1A1基因G71R突變

UGT參與膽紅素排出體外的生理過程，而UGT1A1則與膽紅素的葡萄糖醛酸化密切相關(guān)[7]。UGT家族一般被分為兩個亞族，分別是UGT1A和UGT2B[8]。UGT1A主要對膽紅素、苯酚類葡萄糖等具有醛酸化作用，其編碼基因主要位于2號染色體上，由1599個核苷酸組成。UGT1A1基因為UGT1A蛋白的一種，以肝臟為主要分布臟器，為唯一作用于膽紅素的同工酶[9]。一旦UGT1A1基因編碼區(qū)發(fā)生突變，則對UGT酶的結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)生影響，降低UGT酶的催化結(jié)合作用，影響膽紅素葡萄糖醛酸化，阻礙膽紅素排出體外，進而引發(fā)高膽紅素血癥[10-11]。

G71R突變最早在日本人群中發(fā)現(xiàn)[12]，主要表現(xiàn)為UGT1A1的第一外顯子發(fā)生G-A突變，其71位密碼子發(fā)生GGA-AGA突變，使甘氨酸突變?yōu)榫彼醄13]。傅雯萍等[14]

將母乳性黃疸患兒作為研究對象，證實了UGT1A1基因G71R突變對母乳性黃疸的發(fā)生具有促進作用，可通過抑制葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶活性提高患兒機體內(nèi)膽紅素水平。因而對于篩查發(fā)現(xiàn)存在UGT1T基因G71R突變患兒，應(yīng)格外注意其黃疸的發(fā)生和膽紅素的濃度變化情況，及時發(fā)現(xiàn)異常并早期施治，盡早控制病情進展[15]。

3.3 G6PD缺陷

G6PD為人體血紅細胞內(nèi)存在的一種蛋白質(zhì)，由515個氨基酸構(gòu)成，13個外顯子與12個內(nèi)含子編碼，具有協(xié)同葡萄糖實現(xiàn)人體新陳代謝的作用[16]。G6PD的編碼氨基酸序列發(fā)生結(jié)構(gòu)性異常時，引起G6PD缺乏癥，造成膽紅素水平升高，但目前對于G6PD引起高膽紅素的機制尚不明確。有研究認為，存在G6PD缺乏的病例中存在還原型輔酶II缺乏，血紅細胞有結(jié)構(gòu)和功能性改變，易發(fā)生紅細胞破裂溶血，進而造成膽紅素水平升高[17]。也有報道認為G6PD缺乏時血紅細胞膜及血紅蛋白可能發(fā)生氧化性損傷，從而引起溶血，加重黃疸癥狀。

3.4 G6PD缺陷聯(lián)合UGT1A1基因G74R突變

基于G6PD缺陷和UGT1A1基因G74R突變均對新生兒膽紅素升高存在影響作用，本研究將兩種分子學(xué)指標(biāo)進行聯(lián)合檢驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在G6PD缺陷病例中，患兒出生后第2 d和第3 d，UGT1A1基因G71R純合子/雜合子的膽紅素水平顯著高于野生型，說明G6PD缺陷與UGT1A1基因G71R突變聯(lián)合出現(xiàn)時，對新生兒膽紅素濃度有顯著影響，可提高膽紅素水平，誘發(fā)或加重黃疸及膽紅素血癥。

綜上所述，UGT1A1基因G71R突變與G6PD缺陷在加重新生兒膽紅血癥及黃疸方面具有協(xié)同作用，該類患兒應(yīng)作為臨床的重點工作對象，密切觀察和監(jiān)護，及早發(fā)現(xiàn)膽紅素水平異常和早期干預(yù)，以減少因膽紅素血癥而引發(fā)的各類危重疾病的發(fā)生。

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