飼用玉米根際促生菌資源篩選及其特性研究

李建宏，李雪萍，張建貴，姚 拓，師尚禮，蔣永梅，馬文文

(甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 草業(yè)學(xué)院/草業(yè)生態(tài)系統(tǒng)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/甘肅省草業(yè)工程實(shí)驗(yàn)室/中-美草地畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展研究中心,甘肅 蘭州 730070)

飼用玉米根際促生菌資源篩選及其特性研究

李建宏，李雪萍，張建貴，姚 拓，師尚禮，蔣永梅，馬文文

(甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 草業(yè)學(xué)院/草業(yè)生態(tài)系統(tǒng)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/甘肅省草業(yè)工程實(shí)驗(yàn)室/中-美草地畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展研究中心,甘肅 蘭州 730070)

為獲得玉米根際促生菌(PGPR)菌株并明確其功能特性；以玉米根系及根際土壤為材料，利用選擇性培養(yǎng)基分離篩選溶磷菌與固氮菌，測(cè)定所選菌株溶磷能力和固氮酶活性，并測(cè)定其產(chǎn)IAA的能力，從中篩選綜合性能優(yōu)良的菌株，在此基礎(chǔ)上，運(yùn)用生理生化鑒定和16SrDNA分子生物學(xué)鑒定相結(jié)合的方法鑒定優(yōu)良菌株的種屬。結(jié)果表明：玉米根際有大量PGPR菌，分布特征表現(xiàn)出根表(RP)>根表土(RS)>遠(yuǎn)根土(NRS)>根內(nèi)(HP)的數(shù)量分布規(guī)律，呈根際效應(yīng)。最終獲得262 株P(guān)GPR菌，其中固氮菌48 株，溶解無(wú)機(jī)磷細(xì)菌108 株，溶解有機(jī)磷細(xì)菌106 株，有分泌IAA能力的菌株15株。篩選出綜合性能優(yōu)良、有進(jìn)一步開(kāi)發(fā)應(yīng)用潛力的菌株7株。經(jīng)鑒定其中3株為Pseudomonasfluorescens；2株為Bacillus subtilis；Klebsiellaoxytoca和Bacillusmegaterium各1株。

玉米；植物根際促生菌；固氮菌；溶無(wú)機(jī)磷菌；溶有機(jī)磷菌；16SrDNA

農(nóng)牧業(yè)生產(chǎn)中，氮、磷素供應(yīng)量直接影響作物潛在生產(chǎn)性能和生態(tài)功能的發(fā)揮。為了滿(mǎn)足植物生產(chǎn)所需的氮、磷素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，化肥一直被認(rèn)為是解決這一問(wèn)題的主要(或唯一)途徑。在經(jīng)濟(jì)落后且土壤貧瘠的西部地區(qū)，大量使用高成本的化肥是農(nóng)牧業(yè)生產(chǎn)成本提高的主要因素之一。同時(shí)，隨著化肥施用量的增加，出現(xiàn)了肥效下降、利用率降低等現(xiàn)象，且土壤和植物中NO2-等累積，污染環(huán)境和危及人、畜及食品安全。此外，生產(chǎn)化肥對(duì)非再生能源消耗大，破壞土壤結(jié)構(gòu)及微生物多樣性等，引起土壤退化。因此，探尋其他肥料來(lái)源以部分替代化肥的作用，實(shí)現(xiàn)高效益的循環(huán)農(nóng)業(yè)已迫在眉睫。

近些年研究表明，植物根際促生菌(簡(jiǎn)稱(chēng)PGPR或促生菌)不但可以固定空氣中的氮?dú)?，同時(shí)一些菌還兼具溶解土壤中不能被植物直接利用的磷素，分泌植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)，促進(jìn)植物根系生長(zhǎng)和礦物質(zhì)吸收，增強(qiáng)抗病性的功能[1]。用從不同環(huán)境、不同植物群落根際分離獲得的特定促生菌株生產(chǎn)的生物菌肥與化肥相比具有成本低、使用安全、持續(xù)效果好、增產(chǎn)穩(wěn)定、非再生能源消耗少、經(jīng)濟(jì)效益高、對(duì)環(huán)境和食品無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)，還可改善土壤結(jié)構(gòu)、提高土壤有機(jī)質(zhì)含量和改良鹽堿地[2-3]?？v觀(guān)世界生物肥料研究與應(yīng)用現(xiàn)狀，發(fā)達(dá)國(guó)家(如美國(guó))仍然是世界上研究、生產(chǎn)和使用生物肥料的大國(guó)。我國(guó)化肥年產(chǎn)量、總產(chǎn)量和單位面積使用量均居世界第一，而微生物肥料年生產(chǎn)量不足化肥的1‰，且品種單一(以豆科植物根瘤菌肥為主)，禾本科植物(除水稻外)及其他非豆科植物專(zhuān)用菌肥的生產(chǎn)幾乎空缺。雖然國(guó)外已有規(guī)模化的促生菌肥產(chǎn)品，但不同生境的植物根際生存著不同的菌株，而不同菌株對(duì)環(huán)境的適應(yīng)性不同。因此，我們只能借鑒國(guó)外的成功經(jīng)驗(yàn)，從我國(guó)特定氣候、植物及生境中不斷地分離篩選高效菌株，以生產(chǎn)出適合我國(guó)特定氣候、植物及生境的生物菌肥[4-6]。

玉米具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，用途廣泛，既可以作為優(yōu)質(zhì)雜糧食用，也是世界上最受重視的飼料作物之一。在我國(guó)糧食和畜牧業(yè)生產(chǎn)中占有重要地位。另一方面，雖然玉米具有極其重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和生態(tài)作用，但其生長(zhǎng)過(guò)程對(duì)氮素和磷素的需求量較大。100年來(lái)，化肥一直是提供玉米氮、磷素的主要途徑。然而，隨著化肥使用量的不斷增大，其負(fù)面影響日益明顯。

因此，篩選玉米根際PGPR菌，并將其運(yùn)用于玉米專(zhuān)用生物肥料的研制和生產(chǎn)，不僅對(duì)促進(jìn)我國(guó)玉米種植業(yè)發(fā)展具有重要意義，而且對(duì)發(fā)展綠色農(nóng)業(yè)，保護(hù)生態(tài)環(huán)境具有重要意義。

1 材料和方法

1.1 材料

研究區(qū)位于甘肅省武威市黃羊鎮(zhèn)，2013年8月在采樣區(qū)用五點(diǎn)法獲取玉米根系及根際0～25 cm土壤樣品，存儲(chǔ)于無(wú)菌容器，低溫運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室立即分離。

1.2 方法

1.2.1 樣品處理 為了研究PGPR菌在植物根際的分布特點(diǎn)，分離時(shí)參照文獻(xiàn)[7]的方法，將根際劃分為4個(gè)區(qū)域，即遠(yuǎn)根土(NRS)、根表土(RS)、根表面(RP)與根內(nèi)(HP)。

1.2.2 聯(lián)合固氮菌分離純化及固氮特性測(cè)定 聯(lián)合固氮菌的分離與純化：在NFM培養(yǎng)基[8-9]表面運(yùn)用涂布平板法分離純化聯(lián)合固氮菌；固氮菌固氮酶活性的測(cè)定：乙炔還原法(ARA)[10]測(cè)定固氮酶活性。

1.2.3 溶磷菌的分離純化與溶磷能力測(cè)定 溶磷菌的分離純化 溶解無(wú)機(jī)磷菌株運(yùn)用平板涂布法在PKO無(wú)機(jī)磷培養(yǎng)基[7，11]表面分離純化；溶解有機(jī)磷菌株運(yùn)用平板涂布法在蒙金娜有機(jī)磷培養(yǎng)基表面分離純化[12]。

溶磷能力測(cè)定 溶磷圈法(定性測(cè)定，用于菌株初篩)；通過(guò)鉬藍(lán)比色法定量測(cè)定菌株溶磷量，用于菌株復(fù)篩[13]。

1.2.4 菌株分泌IAA特性測(cè)定 IAA定性測(cè)定 spot比色法(用于菌株初篩)[14]；IAA定量測(cè)定 高效液相色譜法(用于菌株復(fù)篩)[15]。

1.2.5 菌株鑒定 生理生化特征鑒定 將各菌株進(jìn)行淀粉水解試驗(yàn)、乙酰甲基甲醇(V-P)試驗(yàn)、過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)、石蕊牛奶試驗(yàn)、明膠液化試驗(yàn)、吲哚產(chǎn)生試驗(yàn)、產(chǎn)硫化氫試驗(yàn)、糖發(fā)酵試驗(yàn)、檸檬酸鹽利用試驗(yàn)、氧化酶試驗(yàn)、酪朊反應(yīng)、需VB2試驗(yàn)、需泛酸鹽試驗(yàn)等，準(zhǔn)確觀(guān)察并記錄試驗(yàn)結(jié)果。

16S rRNA分子生物學(xué)鑒定 用細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒(OMEGA，美國(guó))提取各菌株的DNA；用瓊脂糖凝膠電泳法和紫外分光光度法檢測(cè)分析DNA的純度及濃度；擴(kuò)增引物為細(xì)菌16S rDNA擴(kuò)增通用引物27F-1492R，序列分別為：27F：5-AGAGTTTGATCCTG GCTCAG-3；1492R：5-GGTTACCTTGTTACGACTT-3，由上海生工生物工程股份有限公司合成。

擴(kuò)增反應(yīng)體系為(25 μL)：10×buffer緩沖液2.5 μL，10 mmol/L的Mg2+1.5 μL，25 mmol/L的dNTP 0.5 μL，20 μmol/L的PCR引物各0.5 μL，5 U/μL的TaqDNA聚合酶0.25 μL，約25 ng/μL的模板DNA 2.0 μL，無(wú)菌雙蒸水稀釋至25 μL。PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5 min，94℃變性30 s，55℃退火60 s，72℃延伸30 s，重復(fù)擴(kuò)增40個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10 min，4℃保存，然后采用瓊脂糖凝膠電泳法完成擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)。DNA Marker為DL2000(上海生工生物科技公司，中國(guó)上海)，將擴(kuò)增出的產(chǎn)物的測(cè)序直接交上海生工生物科技公司完成。以 GenBank中相似度超過(guò) 99%的序列的對(duì)比序列，運(yùn)用Clustal X 1.83及Mega 5.3軟件以 N-J鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)整理及制圖采用 Excel 2007，數(shù)據(jù)分析采用 SPSS 17.0。

2 結(jié)果與分析

2.1 玉米根際促生菌株的分離純化及其數(shù)量分布

利用NFM、PKO和蒙金娜選擇培養(yǎng)基從玉米根際分離出生長(zhǎng)速度快、菌落較大的溶解有機(jī)磷、無(wú)機(jī)磷和具固氮能力的菌株，經(jīng)純化獲得262株，其中固氮菌48株，溶解無(wú)機(jī)磷108株，有機(jī)磷106株。這些菌株在玉米根際的分布特征均表現(xiàn)出根表(RP)>根表土(RS)>遠(yuǎn)根土(NRS)>根內(nèi)(HP)的數(shù)量分布規(guī)律(圖1)，即表現(xiàn)出很強(qiáng)的根際效應(yīng)。

2.2 玉米根際聯(lián)合固氮菌特性

利用乙炔還原法測(cè)定了分離自玉米根際的48 株固氮菌株，其中10 株具有良好的固氮酶活性(表1)，固氮酶活性在2.65～178.94 nmol C2H4/(h·mL)，且各菌株之間固氮酶活性差異較大，大于50 nmol C2H4/(h·mL)的菌株占50%，固氮酶活性最強(qiáng)的5 株菌分別為ZPRW82>ZPRW95>ZPRN45>ZPRS32>ZPRP1，除ZPRS32、ZPRP1之間差異不顯著外，這5株菌的固氮酶活性都顯著高于其他菌株，且均分離自根系表面，生長(zhǎng)速度在中等或中等以上。其他菌株固氮酶活性都低于17 nmol C2H4/(h·mL)，其中固氮酶活性相對(duì)最低的為分離自玉米遠(yuǎn)根土壤中的ZPRN1 菌株，固氮酶活性為2.65 nmol C2H4/(h·mL)，菌株生長(zhǎng)速度也較慢。

圖1 固氮菌株與溶磷菌株數(shù)量及分布Fig.1 Sources and distribution of nitrogen fixing and phosphate solubilizing bacteria

表1 菌株固氮酶活性

注：1.同列不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)，下同；2.+、++、++++代表菌株生長(zhǎng)速度，分別為較慢、中等、較快，測(cè)量時(shí)將菌株在LB培養(yǎng)基于28℃進(jìn)行純培養(yǎng)，以能生長(zhǎng)為明顯的單菌落為準(zhǔn)判別生長(zhǎng)速度，24 h內(nèi)的為生長(zhǎng)速度較快， 48 h內(nèi)為中等，72 h內(nèi)較慢

2.3 玉米根際溶磷菌特性

供試的108株菌株中14 株具有良好的溶解Ca3(PO4)2的能力(PKO 無(wú)機(jī)磷培養(yǎng)基)，占供試菌株的12.96%，溶磷量為3.10～514.28 μg/mL，以菌株ZPRW63的溶磷量最高，且顯著高于其他13 株；菌株ZPRP32的溶磷量最低。溶解無(wú)機(jī)磷的菌株的D/d值在1.32～3.80，以ZPRP12的最大，但溶磷量并不是最高，最小的為菌株ZPRP32，且溶磷量ZPRP32也是最低的；溶磷量最高的ZPRW63 的D/d 值卻不是最大的，僅為1.5，菌株ZPRW63 的溶磷量也達(dá)到了482.31 μg/mL，但D/d 值也只有2.43。各菌株的PKO 培養(yǎng)液pH在4.04～5.84，均偏酸性，pH 小于5 的菌株溶磷量相對(duì)比較高。供試的106 株菌株僅以蛋黃卵磷脂為唯一有機(jī)磷源的蒙金娜培養(yǎng)基培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，其中14 株具有良好的溶解有機(jī)磷的能力，占供試菌株的13.21%。溶磷量為4.66～39.88 μg/mL，以ZPRM29與ZPRM45 溶磷量最高，且顯著高于其他13株；菌株ZPRM24的溶磷量最低。溶解有機(jī)磷的菌株的D/d值在1.12～3.0，以ZPRM49的最大，但溶磷量也不是最高，最小的為菌株ZPRM33，溶磷量為24.21 μg/mL，卻不是最低；溶磷量最高的ZPRM29與ZPRM45的D/d值都為1.63，介于1.12～3.0；各菌株的蒙金娜培養(yǎng)液pH在7.31～7.94，均偏堿性(表2)。

表2 各菌株溶解磷能力

注：同列不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)，下同

2.4 根際優(yōu)良菌株分泌IAA特性

表3 菌株在King 培養(yǎng)基中分泌IAA 量

注：+，++和+++分別表示淺紅、粉紅、深紅；同列不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)，下同

利用顯色法和比色法分別對(duì)供試的262株菌株分泌IAA的能力進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果表明，15株菌株具有分泌IAA的能力，占供試菌株的5.73%，各菌株的顯色反應(yīng)與分泌IAA的量成正比關(guān)系，即分泌量越大，顏色反應(yīng)越強(qiáng)烈。各菌株分泌IAA的能力差異顯著，分泌量在1.36～17.80 μg/mL；其中ZPRM45的分泌量最大，ZPRM28的分泌量最小；介于兩者之間相對(duì)較好的菌株有6株，分別為ZPRW21、ZPRW18、ZPRP89、ZPRP92、 ZPRM31和ZPRP88(表3)。

2.5 優(yōu)良PGPR菌株的篩選

將2.2，2.3和2.4 所得優(yōu)良菌株按照試驗(yàn)方法進(jìn)行交叉測(cè)定，結(jié)果表明，有7 株菌株具有作為玉米根際促生菌的潛力，其中ZPRW18，ZPRW21和ZPRW82菌株既具有固氮、溶磷能力，又具有分泌IAA 的能力。其他4 種菌株則具有其中2 個(gè)能力。綜上，ZPRW18、ZPRW21、ZPRW58、ZPRW61、ZPRW63、ZPRW82、ZPRW95等7 株菌綜合特性?xún)?yōu)良，具有進(jìn)一步研究開(kāi)發(fā)的潛力，故作為后期深入研究的供試菌株。

2.6 優(yōu)良菌株鑒定結(jié)果

2.6.1 生理生化鑒定 根據(jù)表 4生理生化實(shí)驗(yàn)結(jié)果，結(jié)合菌株革蘭氏染色特性、菌落特征，查閱《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)》[16]以及《常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》[17]得到ZPRW18，ZPRW58和ZPRW63為假單胞屬，ZPRW21，ZPRW61和ZPRW95為芽孢桿菌屬，ZPRW82暫無(wú)法確定(圖2)。

表4 菌株生理生化反應(yīng)結(jié)果

注：表中的符號(hào)與《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)(第八版)》和《常見(jiàn)細(xì)菌鑒定手冊(cè)》保持一致，+表示該反應(yīng)為陽(yáng)性，-表示該反應(yīng)為陰性

圖2 所分離菌株分子系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)Fig.2 Phylogenetic tree of the isolate strains.

2.6.2 分子生物學(xué)鑒定結(jié)果 綜合生化實(shí)驗(yàn)結(jié)果和分子鑒定結(jié)果，發(fā)現(xiàn)研究中所分離的菌株形態(tài)及生化鑒定結(jié)果和分子鑒定結(jié)果能很好的吻合，說(shuō)明此次研究的鑒定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，鑒定結(jié)果(表5)。

表5 優(yōu)良PGPR菌株鑒定結(jié)果

3 討論

國(guó)內(nèi)外的很多研究者在篩選高效溶磷菌株的過(guò)程中，以溶磷圈的有無(wú)及大小為標(biāo)準(zhǔn)判斷菌株溶磷能力的有無(wú)及高低[18-19]。但研究發(fā)現(xiàn)，溶磷圈的大小和溶磷量不完全呈正相關(guān)，也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)了相似的現(xiàn)象[10，20-22]，分析原因是菌株的溶磷機(jī)理的復(fù)雜性[23]，溶磷圈的出現(xiàn)主要是體現(xiàn)溶磷微生物產(chǎn)酸而造成的，現(xiàn)有研究表明，產(chǎn)酸是微生物溶磷的主要途徑[24]，產(chǎn)生的酸性物質(zhì)包括葡萄糖酸、2-酮戊二酸、乳酸、草酸、氨基酸、延胡索酸、蘋(píng)果酸、檸檬酸和琥珀酸等有機(jī)酸[25]和H2S、H2SO4等無(wú)機(jī)酸[26]，在酸類(lèi)物質(zhì)作用下，培養(yǎng)基中Ca3(PO4)2或CaCO3等成分溶解，出現(xiàn)溶磷圈；但除了產(chǎn)酸外，微生物還通過(guò)酶解作用和蛋白質(zhì)作用[27]溶解土壤中的難溶性磷。因此，溶磷圈的大小并不能完全反應(yīng)溶磷能力的高低，在研究中，以溶磷圈法作為定性測(cè)定，鉬銻抗比色法作為定量測(cè)定，兩個(gè)相結(jié)合，來(lái)確定菌株的溶磷能力，努力使誤差降低。

在分離、純化具有固氮能力、溶解無(wú)機(jī)磷和溶解有機(jī)磷能力菌株時(shí)，發(fā)現(xiàn)各菌株數(shù)量均表現(xiàn)出“根表>根表土>遠(yuǎn)根土>根內(nèi)”的根際分布趨勢(shì)，此研究結(jié)果與馬文文等[28]，張英[29]，以及趙小蓉等[20-21]的研究結(jié)果相一致，由此說(shuō)明PGPR菌株在土壤中的數(shù)量除了受土壤理化性質(zhì)、肥力、類(lèi)型及其耕作措施等因素外，PGPR菌的分布同時(shí)也受植物強(qiáng)烈的根際效應(yīng)的影響。據(jù)此可以推測(cè)，不同植物根際促生菌的組成必然不同，因此，要開(kāi)發(fā)效果良好的促生菌產(chǎn)品，就必須從相應(yīng)環(huán)境中相應(yīng)植物的根際分離，當(dāng)然，選育出適應(yīng)性廣的優(yōu)良菌株也是一個(gè)好的研究方向。

除此次研究的溶磷、固氮、分泌生長(zhǎng)素等功效外，PGPR另外一個(gè)重要的功能就是用于防治農(nóng)作物病害[30]。用于生防研究的細(xì)菌中，熒光假單胞桿菌(Pseudomonasfluorescens)是研究報(bào)道最多的一種生物防治細(xì)菌，它們大量存在于植物根際，繁殖迅速、能分泌嗜鐵素和抗生素，而成為植物位點(diǎn)和空間微環(huán)境的有力競(jìng)爭(zhēng)者，從而對(duì)多種植物病原菌有抑制作用。孫廣正等[30]研究發(fā)現(xiàn)促生菌LHS11對(duì)黃瓜枯萎菌(Fusariumoxysporiumsp.cucumerinum)，西瓜尖鐮孢菌(Fusariumoxysporumsp.niveum)抑制效果達(dá)80%以上，具有較好的應(yīng)用潛力。而此次研究也分離出了Pseudomonasfluorescens和Bacillussubtilis，參考前人文獻(xiàn)推測(cè)其有拮抗病原菌的潛力，這一方面研究將是下一步工作的重點(diǎn)。

4 結(jié)論

玉米根際有大量PGPR菌，分布特征表現(xiàn)出根表(RP)>根表土(RS)>遠(yuǎn)根土(NRS)>根內(nèi)(HP)的數(shù)量分布規(guī)律，最終獲得262 株P(guān)GPR菌，其中固氮菌48 株，溶解無(wú)機(jī)磷108 株，有機(jī)磷106 株，有分泌IAA能力的菌株15株。篩選出綜合性能優(yōu)良，有進(jìn)一步開(kāi)發(fā)應(yīng)用潛力的菌株7株，經(jīng)鑒定其中3株為Pseudomonasfluorescens，2株為Bacillussubtilis，Klebsiellaoxytoca和Bacillusmegaterium各1株；玉米PGPR菌分布呈根際效應(yīng)，最終篩選出7 株綜合性能良好、有進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用價(jià)值的PGPR。

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Study on screening and characteristics of PGPR isolated from maize

LI Jian-hong，LI Xue-ping，ZHANG Jian-gui，YAO Tuo，SHI Shang-li，JIANG Yong-mei，MA Wen-wen

(CollegeofPrataculturalScience,GansuAgriculturalUniversity/KeyLaboratoryofGrasslandEcosystem，MinistryofEducation/PrataculturalEngineeringLaboratoryofGansuProvince/Sino-U.S.CentersforGrazinglandEcosystemSustainability,Lanzhou730070,China)

In order to obtain the plant growth promoting rhizobacteria (PGPR) from maize and identify the function,the phosphate-solubilization bacteria and nitrogen fixation bacteria were isolated by using rhizosphere soil and selective medium.The potential PGPR strains were screened by measuring the phosphate-solubilization capacity (organic phosphorus and inorganic phosphorus),nitrogen fixation capacity and IAA secretion capacity.And then,the potential strains were identified through physiological and biochemical tests,as well as 16SrDNA sequence analyses.The number of PGPR shown the following order: RP (rhizoplan or root surface) > RS (root soil) > NRS (soil away from roots) > HP (histoplan or root interior).Totally 262 PGPR strains were isolated from the maize rhizosphere,including 48 nitrogen fixing strains,108 inorganic phosphorus-solubilization strains,106 organic phosphorus-solubilization strains and 15 inorganic phosphorus-solubilization strains.In which,7 strains were excellent and had application potential (3 strains werePseudomonasfluorescens,2 strains wereBacillussubtilis,1 strain wasKlebsiellaoxytocaand 1 strain wasBacillusmegaterium).

maize,plant growth promoting rhizobacteria,nitrogen fixing bacteria，inorganic phosphate-solubilizing bacteria，organic phosphate-solubilizing bacteria，16SrDNA

2016-03-14；

2016-04-20

國(guó)家自然基金項(xiàng)目(31360584)和農(nóng)業(yè)部國(guó)家牧草產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(CARS-35)資助

李建宏(1986-)，男，甘肅臨潭縣人，在讀博士研究生。 E-mail：lijianhong123@126.com 姚拓為通訊作者。

Q 939.96

A

1009-5500(2017)01-0044-07