4種農(nóng)藥對茶樹菇菌絲生長影響及在子實體內(nèi)殘留研究*

徐 寧，陸 歡，喻初權(quán)，王小艷，吳 芳，王春暉，彭運祥

（1.湖南省食用菌研究所，湖南 長沙 410013；2.湖南省春華生物科技有限公司，湖南 長沙 410013）

〈病蟲害防治〉

4種農(nóng)藥對茶樹菇菌絲生長影響及在子實體內(nèi)殘留研究*

徐 寧1，陸 歡1，喻初權(quán)2，王小艷1，吳 芳1，王春暉1，彭運祥1

（1.湖南省食用菌研究所，湖南 長沙 410013；2.湖南省春華生物科技有限公司，湖南 長沙 410013）

以茶樹菇（Agrocybe cylindracea）為材料，通過在培養(yǎng)料中添加毒死蜱、敵敵畏、多菌靈和氯氰菊酯4種農(nóng)藥，研究其對茶樹菇菌絲生長速度的影響和在子實體內(nèi)的殘留量。結(jié)果表明，4種農(nóng)藥對菌絲生長速度的抑制效果為：毒死蜱＞敵敵畏＞多菌靈＞氯氰菊酯；4種農(nóng)藥對茶樹菇子實體生長影響較大，且隨著農(nóng)藥濃度的增加均呈現(xiàn)出明顯的抑制作用，毒死蜱、敵敵畏濃度達到8 mg·L-1時，不長菇。子實體農(nóng)殘含量檢測結(jié)果顯示敵敵畏和毒死蜱殘留量大，多菌靈和氯氰菊酯殘留量小，均都符合綠色食品食用菌標準。

茶樹菇；農(nóng)藥殘留；子實體

茶樹菇（Agrocybe cylindracea）又名柱狀田頭菇、楊樹菇、茶薪菇、柱狀環(huán)繡傘，屬擔子菌亞門田頭菇屬（Agrocybe)，為木腐菌，原產(chǎn)于中國，主要生長在溫帶至亞熱帶地區(qū)，是我國食用菌主要栽培品種之一[1-3]。

食用菌所用栽培料主要是農(nóng)業(yè)、林業(yè)生產(chǎn)的副產(chǎn)品，如棉籽殼、麩皮、木屑、玉米芯等，在生產(chǎn)栽培過程中，使用含有農(nóng)藥殘留的農(nóng)副產(chǎn)品、木材等作為栽培基質(zhì)，會使某些有害成分經(jīng)過分解、吸收，最終累積到菌絲和子實體中，造成農(nóng)藥殘留，并對產(chǎn)品和人類健康造成極大的危害[4-7]。2011年～ 2015年，歐洲食品安全局（EFSA）共召回我國出口農(nóng)藥殘留超過歐盟標準的食用菌產(chǎn)品8批次，美國食品和藥物管理局（FDA）共扣留我國出口食用菌產(chǎn)品86批次（農(nóng)藥殘留超標），日本厚生勞動省扣留我國出口食用菌8批次（農(nóng)藥殘留超標）[8-9]。王龍等[10]對甘肅省食用菌主栽品種農(nóng)藥殘留調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，多菌靈、氯氰菊酯等有少量殘留，均在檢出限值以內(nèi)；張孔金等[11]研究不同農(nóng)藥對秀珍菇生長及產(chǎn)品安全性影響，敵敵畏、毒死蜱會危害產(chǎn)品安全，氯氰菊酯、多菌靈在檢出限值以內(nèi)；肖奎等[12]研究多菌靈對茶樹菇生產(chǎn)的影響，發(fā)現(xiàn)其對茶樹菇菌絲生長和出菇?jīng)]有明顯影響。

目前4種農(nóng)藥對茶樹菇菌絲生長和子實體影響研究尚未有報道，因此，本文以茶樹菇為材料，通過在培養(yǎng)料中分別添加不同濃度梯度的敵敵畏、毒死蜱、多菌靈、氯氰菊酯4種農(nóng)藥進行拌料栽培，研究其在栽培過程中對茶樹菇菌絲和子實體生長情況的影響及殘留情況，探討4種農(nóng)藥在茶樹菇生產(chǎn)中的合理使用和殘留控制，旨在為茶樹菇生產(chǎn)提供無污染、綠色原材料，并為茶樹菇安全生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌種

茶樹菇3號，由湖南省食用菌研究所提供。

1.2 培養(yǎng)基

PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯（去皮）200 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g，加水至1 000 mL。

栽培培養(yǎng)基：玉米芯33%、棉籽殼33%、雜木屑15%、麥麩16%、石膏2%、過磷酸鈣0.5%、石灰0.5%。

1.3 供試農(nóng)藥

80%敵敵畏、480 g·L-1毒死蜱乳油、50%多菌靈可濕性粉劑、10%氯氰菊酯，均購自長沙市植保站。

1.4 試驗儀器

電子天平（BS224S型），北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；超低溫冷凍儲存箱（DW-FW351型），中科美菱低溫科技有限責任公司；循環(huán)水式真空泵（SHZ-D III），鞏義市予華儀器有限責任公司；電熱鼓風干燥箱（101A-3ET），上海實驗儀器廠有限公司；數(shù)顯恒溫水浴鍋（HH-8），上海浦東物理光學(xué)儀器廠；西門子冰箱（BCD-218型），博西華家用電器有限公司；恒溫培養(yǎng)箱（6XZ-0450），壹灣斯特儀器設(shè)備有限公司；立式壓力蒸汽滅菌鍋（YXQ-LS），上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；搖床震蕩器（HCY-DA），常州洛基儀器有限公司；pH計（PHS-25），上海精密科學(xué)儀器有限公司；凈化工作臺（SW-CJ-2F），蘇州凈化設(shè)備有限公司。

1.5 試驗方法

1.5.1 PDA培養(yǎng)基中不同農(nóng)藥對菌絲生長的影響

采用PDA平板測定菌落直徑法：將4種農(nóng)藥分別按0（對照）、1 mg·L-1、2 mg·L-1、4 mg·L-1、8 mg·L-1濃度梯度等量添加至培養(yǎng)基中，在無菌條件下倒入直徑為9 cm的無菌培養(yǎng)皿中，每個處理重復(fù)3次。用內(nèi)徑為7 mm打孔器均勻取菌塊接種到培養(yǎng)皿中部，置于25℃下培養(yǎng)。觀察菌落生長狀況，6 d后采用十字交叉法測量菌落直徑大小，計算生長速度。

1.5.2 栽培培養(yǎng)基中不同農(nóng)藥對菌絲生長的影響

將4種農(nóng)藥分別按0（對照）、1 mg·L-1、2 mg·L-1、4 mg·L-1、8 mg·L-1濃度梯度配制，添加到原料中混合均勻，制成栽培培養(yǎng)基，每個處理5次重復(fù)。高壓滅菌冷卻后接種茶樹菇菌種，移入25℃發(fā)菌室避光培養(yǎng)。培養(yǎng)10 d后進行第1次劃線，后期每間隔5 d劃線1次，以長滿菌袋為基準，計算菌袋中菌絲生長速度。

1.5.3 不同農(nóng)藥拌料對子實體生長情況的影響

在茶樹菇生長過程中，觀察分析4種農(nóng)藥不同濃度對茶樹菇子實體生長發(fā)育情況的影響，如出原基時間、外觀形態(tài)、顏色等農(nóng)藝性狀。

4種農(nóng)藥不同濃度對茶樹菇原基產(chǎn)生情況的影響分為：＋＋＋＋：原基產(chǎn)生時間早、整齊、無畸形；＋＋＋：原基產(chǎn)生時間稍遲、整齊、無畸形；＋＋：原基產(chǎn)生時間遲，整齊，有畸形蕾；＋：原基產(chǎn)生時間遲、不整齊、有畸形；－：不出原基。

4種農(nóng)藥不同濃度對茶樹菇子實體生長情況的影響分為：＋＋＋＋：菇形好，菇蓋小且光滑，菇柄粗長；＋＋＋：叢生或雙生，菇蓋大，菇柄細長；＋＋：單生，菇蓋有淺皺紋，菇柄短；＋：菇形差，有腐爛，有畸形；－：不長菇。

1.5.4 不同農(nóng)藥拌料在子實體內(nèi)殘留量測定

根據(jù)農(nóng)藥拌料對茶樹菇菌絲生長速度影響的實驗結(jié)果，按國標規(guī)定的蔬菜和水果中允許最高殘留量（MRL）標準，將4種農(nóng)藥分別按0（對照）、1 mg·L-1、2 mg·L-1、4 mg·L-1、8 mg·L-1濃度梯度配制，添加到栽培原料中混合制成培養(yǎng)基，出菇后采收第1潮子實體檢測4種農(nóng)藥的殘留量。敵敵畏檢測方法參照GB/T5009.19食品中六六六、滴滴涕殘留的測定，毒死蜱檢測參照GB/T5009.145-2003植物性食品中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多種殘留的測定，多菌靈檢測參照GB/T5009.188蔬菜、水果中甲基托布津、多菌靈測定，氯氰菊酯檢測參照GB/ T5009.110植物性食品中氯氰菊酯氰戊菊酯和溴氰菊酯殘留量的測定。

2 結(jié)果與分析

2.1 PDA培養(yǎng)基中4種農(nóng)藥對菌絲生長的影響

PDA培養(yǎng)基中4種農(nóng)藥不同濃度對茶樹菇菌絲生長的影響見表1。

表1 PDA培養(yǎng)基中不同農(nóng)藥不同濃度對菌絲生長速度影響Tab.1 Effect of different concentrations and pesticides on the mycelial growth rate in PDA medium

從表1可看出，4種農(nóng)藥的抑制效果為：毒死蜱＞敵敵畏＞多菌靈＞氯氰菊酯。分別添加敵敵畏、毒死蜱的PDA培養(yǎng)基對茶樹菇菌絲生長產(chǎn)生很強的抑制作用，隨著農(nóng)藥添加量的增加抑制作用加強，且當敵敵畏濃度為8 mg·L-1時，菌絲已死亡；添加多菌靈、氯氰菊酯的培養(yǎng)基對茶樹菇菌絲生長速度的抑制效果比敵敵畏、毒死蜱稍弱。不同濃度的敵敵畏、毒死蜱對茶樹菇菌絲生長速度影響的變化波動性相對較大；在含多菌靈、氯氰菊酯的培養(yǎng)基中，茶樹菇菌絲生長速度分別減慢0.08 cm·d-1、0.06 cm· d-1。

2.2 栽培培養(yǎng)基中不同農(nóng)藥對茶樹菇菌絲生長影響

栽培培養(yǎng)基中4種農(nóng)藥不同濃度對茶樹菇菌絲生長速度的影響見表2。

從表2可以看出，農(nóng)藥濃度越高，對茶樹菇菌絲生長的抑制越強，其中毒死蜱對菌絲生長抑制作用尤為明顯，在高濃度下菌絲幾乎不生長；其他農(nóng)藥對菌絲生長影響較小。濃度為1 mg·L-1時，毒死蜱的抑制效果明顯，另外3種農(nóng)藥的影響相對較??；濃度為2 mg·L-1時，毒死蜱與敵敵畏的抑制作用顯著，菌絲生長變化量均超過了1 cm，含多菌靈和氯氰菊酯培養(yǎng)基中菌絲生長變化量在0.6 cm左右；濃度為8 mg·L-1時，4種農(nóng)藥均對茶樹菇菌絲生長影響很大，特別是多菌靈，菌絲生長變化量達到了0.9 cm。綜上所述，4種農(nóng)藥在濃度為4 mg·L-1～8 mg·L-1時，對茶樹菇菌絲生長的抑制作用是最大的。其中加入敵敵畏、毒死蜱的培養(yǎng)基抑制作用明顯，對菌絲生長有藥害作用，在生產(chǎn)中不宜使用或要嚴格控制添加量。

表2 栽培培養(yǎng)基中4種農(nóng)藥不同濃度對茶樹菇菌絲生長影響Tab.2 Effect of different pesticides and concentrations on the mycelial growth of Agrocybe cylindracea in the medium

2.3 4種農(nóng)藥拌料對子實體發(fā)育生長情況的影響

2.3.1 4種農(nóng)藥拌料對原基產(chǎn)生情況的影響

栽培培養(yǎng)基中4種農(nóng)藥不同濃度對茶樹菇原基產(chǎn)生情況影響見表3。

表3 不同農(nóng)藥拌料對茶樹菇原基產(chǎn)生情況影響Tab.3 Effect of different pesticides on the primordium period of Agrocybe cylindracea

從表3可見，與空白對照相比，添加敵敵畏的原基產(chǎn)生時間晚、整齊度小、畸形度大，隨著濃度的增加出現(xiàn)不現(xiàn)原基情況。毒死蜱與敵敵畏的情況類似，均隨著濃度的增加對原基發(fā)育抑制作用變強。當多菌靈與氯氰菊酯濃度為2 mg·L-1時，原基雖正常發(fā)育但原基產(chǎn)生時間延遲。當濃度為8 mg·L-1時，添加敵敵畏、毒死蜱的培養(yǎng)基中不出現(xiàn)原基，含多菌靈與氯氰菊酯的培養(yǎng)基中還能夠產(chǎn)生原基。說明4種農(nóng)藥對原基產(chǎn)生情況的抑制影響順序為毒死蜱、敵敵畏＞多菌靈、氯氰菊酯。

2.3.2 4種農(nóng)藥拌料對子實體生長情況的影響

栽培培養(yǎng)基中不同農(nóng)藥不同濃度對茶樹菇子實體情況的影響見表4。

表4 不同農(nóng)藥拌料對茶樹菇子實體生長情況的影響Tab.4 Effect of pesticides on the fruiting body of Agrocybe cylindracea

從表4可看出，與空白對照相比，毒死蜱、敵敵畏對茶樹菇子實體生長影響最大，主要表現(xiàn)為出菇時間延遲，生成畸形菇，菌蓋對折、變厚甚至腐爛，菌柄細，菇蕾數(shù)量少，產(chǎn)量降低，濃度增加到8 mg·L-1時不出菇。多菌靈對子實體生長的影響主要表現(xiàn)為菌蓋有皺紋、畸形菇。氯氰菊酯對子實體生長有影響，出現(xiàn)腐爛、畸形菇概率降低，隨著濃度增加到8 mg·L-1，子實體還能繼續(xù)生長發(fā)育，但為畸形菇。4種農(nóng)藥在濃度逐漸增加時，對茶樹菇子實體生長抑制作用逐漸加強。

2.3.3 4種農(nóng)藥拌料對產(chǎn)量的影響

以采收第1茬菇產(chǎn)量作為指標，研究栽培培養(yǎng)基中添加不同農(nóng)藥對茶樹菇生長的影響，見表5。

表5 不同農(nóng)藥拌料對茶樹菇產(chǎn)量的影響Tab.5 Effect of different pesticides on the yields of Agrocybe cylindracea

以空白作為對照，添加農(nóng)藥的茶樹菇產(chǎn)量均低于對照，隨著4種農(nóng)藥濃度的增加，產(chǎn)量均表現(xiàn)為明顯減產(chǎn)。當濃度在2 mg·L-1～4 mg·L-1時，敵敵畏與毒死蜱的影響程度明顯大于多菌靈與氯氰菊酯；當濃度達到8 mg·L-1時，添加敵敵畏、毒死蜱的栽培袋不出菇，添加多菌靈、氯氰菊酯的栽培袋每袋產(chǎn)量在70 g左右。由表5可知，添加毒死蜱、敵敵畏、多菌靈、氯氰菊酯濃度為8 mg·L-1為是否影響產(chǎn)量的分界點。

2.4 農(nóng)藥殘留量的測定

不同農(nóng)藥拌料對茶樹菇子實體農(nóng)藥殘留量的影響見表6。

表6 不同農(nóng)藥拌料對茶樹菇子實體農(nóng)藥殘留量的影響Tab.6 Effect of substrates treated with different pesticides on residue levels of Agrocybe cylindracea fruiting bodies

從表6可以看出，不同農(nóng)藥及添加不同濃度的農(nóng)藥在子實體中殘留量差異明顯，敵敵畏和毒死蜱殘留量最多，氯氰菊酯有少量殘留，多菌靈基本無殘留。氯氰菊酯1mg·L-1、2 mg·L-1、4 mg·L-1三個濃度處理，子實體中均未檢測到農(nóng)藥殘留；敵敵畏1 mg·L-1、2 mg·L-1兩個濃度處理，未檢出農(nóng)藥殘留，當濃度達到8 mg·L-1時，不長菇；多菌靈添加量達4 mg·L-1時，子實體內(nèi)有農(nóng)藥殘留，殘留量未超過1 mg·kg-1。參照NY/T 749-2012綠色食品食用菌標準，氯氰菊酯、多菌靈、敵敵畏和毒死蜱在培養(yǎng)料中添加量為4 mg·L-1時，子實體中農(nóng)藥殘留量均未超出綠色產(chǎn)品食用菌農(nóng)殘指標。

3 結(jié)論與討論

本試驗通過添加農(nóng)藥至PDA培養(yǎng)基和栽培料培養(yǎng)基中，分別考察氯氰菊酯、多菌靈、敵敵畏和毒死蜱4種農(nóng)藥不同濃度對茶樹菇菌絲生長速度和子實體生長情況的影響。試驗結(jié)果表明，4種農(nóng)藥的4個濃度處理與對照組相比，對茶樹菇菌絲生長均有抑制作用，敵敵畏和毒死蜱抑制性最顯著。4種不同農(nóng)藥在PDA培養(yǎng)基和栽培培養(yǎng)基中對茶樹菇菌絲生長速度的影響有差別，可能是在高溫滅菌時一些農(nóng)藥就已經(jīng)大部分降解，另外菌絲生長過程中也會降解一部分農(nóng)藥。

對子實體生長情況影響方面，敵敵畏的影響最大，氯氰菊酯、多菌靈的影響較小；在添加農(nóng)藥濃度1 mg·L-1～2 mg·L-1范圍內(nèi)，殘留農(nóng)藥不會抑制茶樹菇生長，而超過2 mg·L-1時，會阻礙菌絲生長，影響子實體出菇時間和品質(zhì)。在實際生產(chǎn)過程中，需做好栽培料農(nóng)藥殘留檢測，選擇農(nóng)藥殘留較低的原材料為栽培基質(zhì)，當原材料中的氯氰菊酯和毒死蜱殘留超過了0.05 mg·kg-1、多菌靈殘留超過1.0 mg·kg-1、敵敵畏殘留超過0.5 mg·kg-1，均不適合用于栽培食用菌。

[1]鄭毅，余望，施巧琴，等.茶薪菇人工栽培及營養(yǎng)成分分析[J].中國食用菌，1999（5）：13-14.

[2]陳明杰，汪紹月，賀冬梅，等.低溫影響草菇蛋白質(zhì)組分變化的研究[J].食用菌學(xué)報，1995，2（4）：28-31.

[3]夏志蘭.茶樹菇[J].湖南農(nóng)業(yè)，2001（11）：12.

[4]李月梅.食用菌的功能成分與保健功效[J].食品科學(xué)，2005，26（8）：517-521.

[5]Heleno SA,Barros L,Sousa MJ,et al.Tocopherols composition f Portuguese wild mushrooms with antioxidant capacity[J]. Food hemistry,2010,119(4):1443-1450.

[6]Ouzouni PK,Petridis D,Koller W,et al.Nutritional value nd metal content of wild edible mushrooms collected from West Acedonia and Epirus[J].Food Chemistry,2009,115(4): 1517-1580.

[7]FAO.FAOSTAT[DB/OL].(2014-12-13)[2015-12-15].http:// faostat3.fao.org/browse/Q/*E.

[8]中國產(chǎn)業(yè)信息網(wǎng).2015-2022年中國食用菌市場行情調(diào)查投資可行性評估報告[EB/OL].(2015-8-5)[2015-12-19]. http://www/chyxx.com/research/201508/340529.html.

[9]王坦，宋瑋，李玉博，等.我國食用菌出口技術(shù)壁壘特點及應(yīng)對措施研究[J].農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量與安全，2016（1）：61-66.

[10]王龍，張鐸，徐強.甘肅省主栽食用菌品種農(nóng)藥殘留現(xiàn)狀調(diào)查研究[J].中國食用菌，2011，30（2）：44-45.

[11]張孔金，黎志銀，謝寶貴，等.不同農(nóng)藥對秀珍菇生長及產(chǎn)品安全性影響的研究[J].食藥用菌，2012，20（5）：292-294.

[12]肖奎，葉華智.多菌靈對茶樹菇菌絲生長的影響及其在子實體中的殘留[J].中國食用菌，2008，27（3）：31-33.

Effect of Four Pesticide on Mycelial Growth and Pesticide Residues in Fruiting Bodies of Agrocybe cylindracea

XU Ning1,LU Huan1,YU Chu-quan2,WANG Xiao-yan1,WU Fang1,WANG Chun-hui1,PENG Yun-xiang1
(1.Hunan Provincial Institute of Edible Fungus,Changsha 410013,China; 2.Hunan Provincial Chunhua Biological Technology Company,ChangSha 410013,China)

Effect of chlorpyrifos,DDVP,carbendazim and cypermethrin on mycelia growth of Agrocybe cylindracea and residue in fruiting body were studied,and 4 kinds of pesticides was used in the artificial medium.The results showed that the order of restraining effect on mycelia growth with 4 kinds of pesticides was chlorpyrifos>DDVP>carbendazim>cypermethrin.With the in crease of pesticide concentration,it showed a significant inhibitory effect on the fruiting body of A.cylindracea.When the con centration of chlorpyrifos and DDVP reached 8 mg·L-1,respectively,mushroom didn’t grow.According to detection results of pesticide residues in fruiting bodies of A.cylindracea,the pesticide residues of DDVP and chlorpyrifos were larger than that of carbendazim and cypermethrin,and all of these results had accorded with the green food standards.

Agrocybe cylindracea;pesticide residue;fruiting body

S646.9

A

1003-8310（2017）02-0060-05

10.13629/j.cnki.53-1054.2017.02.016

“十二五”國家科技支撐計劃課題（2013BAD16B04）。

徐寧（1988-），女，碩士，助理研究員，主要從事食用菌加工研究。E-mail:1050353232@qq.com

2017-01-25