阿奇霉素腸溶膠囊的含量測定方法學(xué)研究

胡玉慶

（哈爾濱商業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與環(huán)境科學(xué)研究中心）

摘 要：目的：研究并驗證HPLC法檢查阿奇霉素腸溶膠囊的含量測定方法。方法：采用十八烷基鍵合硅膠柱；以磷酸鹽緩沖溶液（取0.05mol/L的K2HPO4溶液，用20%的H3PO4溶液調(diào)節(jié)溶液pH值至8.2）-乙腈（45：55）為流動相；柱溫為30℃；檢測波長為210nm。結(jié)果：方法的專屬性、準(zhǔn)確度、精密度及耐用性良好；在阿奇霉素的進(jìn)樣量為10.024μg～100.24μg范圍內(nèi)，進(jìn)樣濃度與色譜峰面積線性關(guān)系良好，平均回收率為99.18%，RSD為0.59%（n=9）。結(jié)論：本方法簡便、快速、靈敏，可有效檢測阿奇霉素腸溶膠囊的含量。

關(guān)鍵詞：阿奇霉素；含量測定；HPLC

阿奇霉素是一種屬于大環(huán)內(nèi)酯的抗生素，于1980年被發(fā)現(xiàn)，1981年推出，又翻譯作阿紅霉素、阿齊紅霉素。與紅霉素等藥物作用機理類似，對細(xì)菌的蛋白質(zhì)合成進(jìn)行抑制，從而產(chǎn)生較強的抑菌作用，對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、厭氧菌等均具有非常明顯的殺菌作用。阿奇霉素是一種在臨床上使用非常廣泛的抗生素，常用于治療耳部的細(xì)菌感染、鼻竇炎、肺炎、咽喉細(xì)菌感染等。

國家藥典委員會發(fā)布了阿奇霉素腸溶膠囊的國家標(biāo)準(zhǔn)征求意見稿，標(biāo)準(zhǔn)中采用高效液相色譜法檢測阿奇霉素腸溶膠囊中阿奇霉素的含量，本研究將對該方法進(jìn)行詳細(xì)的方法學(xué)研究，以判斷該方法是否適合于阿奇霉素腸溶膠囊產(chǎn)品質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（安捷倫1200）；色譜柱：十八烷基鍵合硅膠柱；阿奇霉素腸溶膠囊（批號：160801、160802、160803，實驗室自制）；阿奇霉素對照品（含量為100%，批號：130593-201303），阿奇霉素系統(tǒng)適用性對照品（批號：130609-201504），均購自中檢所。

甲醇、乙腈均為色譜級；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

本品的含量檢查方法參照國家藥典委員發(fā)布的阿奇霉素腸溶膠囊標(biāo)準(zhǔn)征求意見稿中色譜條件進(jìn)行。

2.1 色譜條件

色譜柱：十八烷基鍵合硅膠柱；以磷酸鹽緩沖溶液（取0.05mol/L K2HPO4溶液，用20%的H3PO4溶液調(diào)節(jié)溶液的pH值至8.2）-乙腈（45：55）為流動相；柱溫控制為30℃；檢測波長設(shè)定為210nm；流速：1.0ml/min；進(jìn)樣量50μl。

稀釋液：磷酸二氫銨溶液（稱取磷酸二氫銨1.73g，加水溶解并稀釋至1000ml，用氨試液調(diào)節(jié)pH值至10.0±0.05）-甲醇-乙腈（7：7：6），混合均勻。

2.2 供試品溶液的制備

取本品膠囊20粒，小心傾出膠囊的內(nèi)容物，研細(xì)粉使之混合均勻，精密稱取適量（約相當(dāng)于阿奇霉素0.1g），加入到100ml的量瓶中，加入適量的稀釋液超聲溶解后，再加入稀釋液稀釋至刻度，振搖使混合均勻，用濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3 對照品溶液的制備

取阿奇霉素對照品適量，精密稱定，加入適宜的量瓶內(nèi)，用稀釋液溶解并定量稀釋制成每1ml中約含阿奇霉素1mg的溶液，振搖使混合均勻，作為對照品溶液。

2.4 阿奇霉素系統(tǒng)適用性對照品溶液的制備

取阿奇霉素系統(tǒng)適用性對照品適量，精密稱定，加入適宜的量瓶內(nèi)，先加入適量的乙腈溶解，再用乙腈稀釋制成每1ml中約含10mg的溶液，作為系統(tǒng)適用性對照品溶液。

2.5 系統(tǒng)適用性試驗

精密量取阿奇霉素系統(tǒng)適用性對照品溶液50μl注入色譜儀，記錄的色譜圖應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)圖譜一致。

結(jié)果：取阿奇霉素系統(tǒng)適用性對照品溶液色譜圖與標(biāo)準(zhǔn)圖譜一致，符合要求。

2.6 專屬性實驗

按照處方量精密稱量本品中的輔料，按照供試品溶液的配制、稀釋方法配制輔料空白溶液，精密量取50μl注入色譜儀，記錄色譜圖。

結(jié)果：輔料和溶劑在阿奇霉素出峰處無干擾。

2.7 溶液穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液分別于0、1、2、4、6小時進(jìn)樣，考察各個時間點溶液中阿奇霉素峰峰面積的RSD%，驗證阿奇霉素供試品溶液的穩(wěn)定性。

結(jié)果：阿奇霉素峰面積6小時內(nèi)RSD為1.4%，結(jié)果表明阿奇霉素含量測定溶液在6小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 線性試驗

精密稱取阿奇霉素對照品適量，分別配制成每1ml分別含阿奇霉素濃度為0.2mg、0.6mg、1.0mg、1.4mg、2.0mg的對照品溶液，分別進(jìn)樣50μl，記錄譜圖。以阿奇霉素的峰面積為縱坐標(biāo)，以阿奇霉素對照品的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，計算線性回歸方程及線性相關(guān)系數(shù)。

結(jié)果：阿奇霉素線性方程為：y=114661x-125699，r=0.9999；表明該方法阿奇霉素進(jìn)樣量在10.024μg～100.24μg范圍內(nèi)均線性關(guān)系良好。

2.9 定量限試驗

取2.8項下的對照品溶液進(jìn)一步稀釋，精密量取50μl注入高效液相色譜儀，以信噪比10：1時濃度計算進(jìn)樣量為檢測限。

結(jié)果：將2.8項下濃度最低的對照品溶液稀釋適宜的倍數(shù)后，當(dāng)其色譜峰信噪比即約為10：1時，由該溶液的濃度計算出阿奇霉素的檢測限為10.024ng。

2.10 回收率試驗

取本品樣品9份（每份約含阿奇霉素50mg），分成3組，置100ml容量瓶內(nèi)，分別精密加入阿奇霉素對照品適量，按照供試品溶液稀釋方法配制，使每1ml溶液中含阿奇霉素對照品的加入量分別為0.4mg、0.5mg、0.6mg，并按照規(guī)定的方法分別配制對照品溶液，量取以上各溶液50μl，按照以上檢測條件分別進(jìn)樣檢測，記錄譜圖，計算回收率。

結(jié)果：平均回收率為99.18%，RSD為0.59%，說明本方法耐用性較好。

2.11 中間精密度試驗

取阿奇霉素膠囊樣品，按照標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的方法配制系統(tǒng)適用性對照品溶液、阿奇霉素對照品溶液和供試品溶液，分別由不同人員、不同儀器、不同日期按照規(guī)定的檢測條進(jìn)樣檢測，記錄譜圖，計算RSD%。

結(jié)果：不同人員、不同儀器、不同日期分別檢測阿奇霉素含量結(jié)果間RSD為1.16%，表明本方法中間精密度良好。

2.12 重復(fù)性試驗

取阿奇霉素膠囊樣品，按照標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的方法配制系統(tǒng)適用性對照品溶液、阿奇霉素對照品溶液和供試品溶液各6份，按照規(guī)定的檢測條進(jìn)樣檢測，記錄譜圖，計算RSD%。

結(jié)果：阿奇霉素腸溶膠囊6次含量測定結(jié)果間RSD為1.32%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.13 耐用性試驗

取阿奇霉素膠囊樣品，按照規(guī)定的方法配制系統(tǒng)適用性對照品溶液、阿奇霉素對照品溶液和供試品溶液，分別調(diào)整流動相的流速為1.0ml/min、0.8ml/min、1.2ml/min；調(diào)整流動相比例分別為40：60，45：55，50：50；柱溫分別為25℃、30℃、35℃；檢測波長分別為208nm、210nm、212nm；分別精密量取以上各溶液50μl，按照以上檢測條件分別進(jìn)樣檢測，記錄譜圖，考察耐用性。

結(jié)果：液相各檢測條件輕微改變后，阿奇霉素腸溶膠囊含量測定結(jié)果無明顯差異，說明本方法耐用性較好。

2.14 阿奇霉素腸溶膠囊含量測定

取三批樣品，檢查阿奇霉素腸溶膠囊含量，結(jié)果三批含量結(jié)果分別為99.23%、99.86%、100.28%。

3 討論

本品的含量測定參照國家藥典委員會阿奇霉素腸溶膠囊標(biāo)準(zhǔn)征求意見稿中方法進(jìn)行檢查。方法學(xué)驗證結(jié)果表明，方法的專屬性、準(zhǔn)確度、中間精密度、重復(fù)性、耐用性較好，檢測靈敏度較高。該方法簡便、快捷，可準(zhǔn)確檢測阿奇霉素腸溶膠囊的含量。

參考文獻(xiàn)：

[1] 國家藥典委員會，阿奇霉素腸溶膠囊標(biāo)準(zhǔn)征求意見稿.