養(yǎng)殖條件下葉爾羌高原鰍攝食及主要消化酶活性的晝夜節(jié)律

王帥+宋勇+任道全

摘要：旨在探討人工養(yǎng)殖環(huán)境下葉爾羌高原鰍攝食量和主要消化酶的晝夜節(jié)律。在水溫恒定（20±0.5） ℃ 條件下，觀察葉爾羌高原鰍在08：00、11：00、14：00、17：00、20：00、23：00、02：00和05：00時(shí)的攝食情況，并計(jì)算其攝食量；測(cè)定晝夜演替下葉爾羌高原鰍消化器官和消化道中蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性。結(jié)果表明，葉爾羌高原鰍在20：00至次日02：00區(qū)間內(nèi)攝食較多，其中攝食峰值出現(xiàn)在23：00；晝夜變化對(duì)葉爾羌高原鰍消化器官和消化道中消化酶活性均有影響，胃蛋白酶活性的最高值出現(xiàn)在23：00，脂肪酶、胰蛋白酶和淀粉酶活性的最高值出現(xiàn)在02：00；4種消化酶活性最低值均為14：00。葉爾羌高原鰍攝食屬于日伏夜食型，夜間設(shè)置定時(shí)投喂，可促進(jìn)葉爾羌高原鰍快速生長(zhǎng)。

關(guān)鍵詞：葉爾羌高原鰍；攝食；消化酶；晝夜節(jié)律

中圖分類號(hào)： S966.4 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2016）11-0264-03

葉爾羌高原鰍[Triplophysa （Hedinichthys） yarkandensis （Day）]廣泛分布于新疆塔里木河流域，為雜食偏動(dòng)物性底棲魚類，是塔河土著魚類中個(gè)體較大、生長(zhǎng)較快的品種[1]；具有蛋白質(zhì)含量高、氨基酸組成全面等優(yōu)點(diǎn)，而且其氨基酸總量也高于草魚、鯉等常見養(yǎng)殖魚類[2]，是當(dāng)?shù)厝讼彩车募央?，具有一定的?jīng)濟(jì)價(jià)值和養(yǎng)殖前景。對(duì)葉爾羌高原鰍的研究主要集中在其形態(tài)特征、生態(tài)適應(yīng)、繁殖生物學(xué)、食性選擇、系統(tǒng)分類、演化規(guī)律等方面，也有少量關(guān)于葉爾羌高原鰍食用價(jià)值、觀賞價(jià)值和藥用價(jià)值等方面的研究報(bào)道[3]。目前，由于生態(tài)環(huán)境變遷和人類生產(chǎn)活動(dòng)的影響，塔里木河流域葉爾羌高原鰍數(shù)量下降明顯，導(dǎo)致了其價(jià)格上升；葉爾羌高原鰍的人工養(yǎng)殖目前仍處于起步階段，因此，對(duì)葉爾羌高原鰍營(yíng)養(yǎng)需求及消化的研究具有一定的現(xiàn)實(shí)意義[4]。魚類的消化活動(dòng)受到諸多內(nèi)在和外源因素的影響，其中光照強(qiáng)度對(duì)魚類的攝食有明顯影響；另外通過研究魚類消化酶活力的晝夜節(jié)律，還可為養(yǎng)殖過程中正確掌握食物的投喂時(shí)間和投喂量提供參考。然而，葉爾羌高原鰍攝食及消化的晝夜節(jié)律未見報(bào)道[5]。本試驗(yàn)就葉爾羌高原鰍攝食及主要消化酶的晝夜節(jié)律進(jìn)行探討，通過測(cè)定葉爾羌高原鰍24 h中不同時(shí)間段的攝食量，以及蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶的變化規(guī)律，為其人工養(yǎng)殖及推廣等提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物、試劑與儀器

供試葉爾羌高原鰍捕撈自塔里木河沙雅段，捕撈時(shí)間為2014年8月，體質(zhì)量（42.5±3.8）g，體長(zhǎng)（16.3±1.7）cm。試驗(yàn)魚置于長(zhǎng)、寬、高規(guī)格為0.8 m×0.4 m×0.5 m的玻璃水族箱（具有控溫、水體過濾、殺菌、充氧等裝置）中，養(yǎng)殖水溫（20±0.5） ℃，每天換水1次，所換水經(jīng)曝氣處理，試驗(yàn)水溫保持在約20 ℃，pH值約7.0，溶解氧濃度大于5.0 mg/L。

胰蛋白酶、胃蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自南京建成生物工程研究所；其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

Carry 100型紫外-可見分光光度計(jì)，美國(guó)瓦里安；5427型臺(tái)式冷凍高速離心機(jī)，德國(guó)艾本德；Elix5型超純水儀，美國(guó)密理博；PRO250型組織勻漿儀，美國(guó)PRO；QUINTIX224-1CN型分析天平，德國(guó)賽多利斯。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

預(yù)試驗(yàn)5 d，期間正常投飼；正式試驗(yàn)為5 d（試驗(yàn)周期120 h），將160條試驗(yàn)魚和40條后備魚置于不同的水族箱中，日投飼量為2 g。試驗(yàn)期間每隔3 h投喂1 次，均為隨機(jī)取樣后再投喂，每次投喂量0.25 g；投喂時(shí)觀察其攝食情況，采食結(jié)束后立即取樣測(cè)定攝食量及消化酶活性，攝食量取葉爾羌高原鰍整個(gè)消化道內(nèi)的飼料質(zhì)量稱體質(zhì)量并計(jì)算平均值，消化酶活性測(cè)定按試劑盒說明書進(jìn)行，每次取 4 尾幼魚，采樣8次/d。

1.3 粗酶液的制備及消化酶活性的測(cè)定

將活魚使用重器敲擊頭部處死后立即解剖，迅速取出肝胰臟、胃、胃幽門部和全腸，使用預(yù)冷的去離子水沖洗消化道，再使用脫脂棉球擦干并精確稱量，然后加9倍質(zhì)量的預(yù)冷至pH值為7.5 PBS液，冰浴條件下勻漿[6]；12 000 r/min離心15 min，取其上清液即為粗酶提取液。酶活性測(cè)定需在12 h內(nèi)完成，均采用檢測(cè)試劑盒。其中胃蛋白酶的測(cè)定使用福林-酚法，胰蛋白酶的測(cè)定使用精氨酸乙酯法，淀粉酶的測(cè)定使用碘-淀粉比色法，脂肪酶的測(cè)定使用微乳液法。胃蛋白酶取葉爾羌高原鰍胃與胃幽門部測(cè)定，胰蛋白酶取肝胰臟和腸道部分測(cè)定，脂肪酶和淀粉酶取全部組織測(cè)定。

1.4 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)分析使用SPSS 16.0中One-Way ANOVA進(jìn)行單因素方差分析及Duncans多重比較，檢驗(yàn)誤差為5%和1%。

2 結(jié)果與分析

2.1 晝夜變化對(duì)葉爾羌高原鰍攝食的影響

葉爾羌高原鰍攝食主要集中在夜間20：00以后，其中23：00時(shí)其攝食量最高；然后隨時(shí)間的延長(zhǎng)呈下降趨勢(shì)，14：00 時(shí)攝食量最低（表1）。葉爾羌高原鰍在11：00—17：00時(shí)的攝食量均極顯著低于23：00時(shí)的攝食量（P<0.01），顯著低于02：00、05：00、08：00、20：00時(shí)的攝食量（P<0.05）。試驗(yàn)結(jié)果表明葉爾羌高原鰍的攝食集中在20：0至次日 02：00 間，攝食高峰約在23：00。

2.2 葉爾羌高原鰍蛋白酶的晝夜變化

由表2可知，整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)葉爾羌高原鰍胃蛋白酶（胃、幽門）和胰蛋白酶（肝胰臟、腸）的活性均為先降低后升高 （02：00—23：00）。其中胃蛋白酶的活性峰值出現(xiàn)在23：00，胰蛋白酶的活性峰值出現(xiàn)在02：00，胃蛋白酶和胰蛋白酶的活性最低值均出現(xiàn)在14：00。其中葉爾羌高原鰍08：00—14：00時(shí) 的胃蛋白酶活性均極顯著低于23：00時(shí)的胃蛋白酶活性（P<0.01），08：00—17：00時(shí)的胰蛋白酶活性均極顯著低于02：00時(shí)的胰蛋白酶活性（P<0.01）。試驗(yàn)中葉爾羌高原鰍蛋白酶的晝夜變化規(guī)律與攝食規(guī)律相近，表明葉爾羌高原鰍蛋白酶的晝夜變化規(guī)律與攝食活動(dòng)有關(guān)。