孟魯司特鈉片的含量測定方法學(xué)研究

魏子龍+李文蘭

摘 要：目的：研究并驗(yàn)證HPLC法檢查孟魯司特鈉片的含量測定方法。方法：采用苯基硅烷鍵合硅膠色譜柱；以0.15%三氟乙酸溶液-0.15%三氟乙酸乙腈溶液（45：55）為流動(dòng)相；檢測波長為238nm。結(jié)果：方法的專屬性、準(zhǔn)確度、精密度及耐用性良好；在孟魯司特鈉的進(jìn)樣量為0.424μg～4.24μg范圍內(nèi)，進(jìn)樣濃度與色譜峰面積線性關(guān)系良好，平均回收率為99.53%，RSD為1.13%（n=9）。結(jié)論：本方法簡便、快速、靈敏，可有效檢測孟魯司特鈉片的含量。

關(guān)鍵詞：孟魯司特鈉；含量測定；HPLC

孟魯司特鈉，由默沙東公司研發(fā)、生產(chǎn)，并于1999年，獲得中國國家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)正式上市，是一種口服的白三烯受體拮抗劑，能特異性抑制氣道中的半胱氨酰白三烯（CysLT1）受體，從而達(dá)到改善氣道炎癥，有效控制哮喘癥狀，適用于成人和1歲以上兒童哮喘的預(yù)防和長期治療及過敏性鼻炎的治療，根據(jù)我國《支氣管哮喘防治指南》2008年版推薦可單獨(dú)應(yīng)用的長期控制藥，可作為輕度哮喘的替代治療藥物和中重度哮喘的聯(lián)合治療用藥。

國家藥典委員會(huì)發(fā)布了孟魯司特鈉片的國家標(biāo)準(zhǔn)征求意見稿，標(biāo)準(zhǔn)中采用高效液相色譜法檢測孟魯司特鈉片中孟魯司特的含量，本研究將對(duì)該方法進(jìn)行詳細(xì)的方法學(xué)研究，以判斷該方法是否適合于孟魯司特鈉片產(chǎn)品質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（安捷倫1200）；色譜柱：硅膠色譜柱；孟魯司特鈉片（批號(hào)：160101、160102、160103，實(shí)驗(yàn)室自制）；孟魯司特二環(huán)己胺鹽對(duì)照品（含量為100%），購自中檢所。

甲醇、乙腈均為色譜級(jí)；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

本品的含量檢查方法參照國家藥典委員發(fā)布的孟魯司特鈉片標(biāo)準(zhǔn)征求意見稿中色譜條件進(jìn)行。

2.1 色譜條件

色譜柱：苯基硅烷鍵合硅膠色譜柱；以0.15%三氟乙酸溶液-0.15%三氟乙酸乙腈溶液（45：55）為流動(dòng)相；檢測波長為238nm；流速：1.0ml/min；進(jìn)樣量20μl。

2.2 供試品溶液的制備

取本品片20片，精密稱定， 研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于孟魯司特10mg），加入到100ml的量瓶中，加入90%甲醇溶液適量， 超聲約15分鐘使孟魯司特鈉溶解，用90%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

取孟魯司特二環(huán)己胺鹽對(duì)照品適量，精密稱定，加入適宜的量瓶內(nèi)，用90%甲醇溶液溶解并定量稀釋制成每1ml中約含孟魯司特0.1μg的溶液，振搖使混合均勻，作為對(duì)照品溶液。

2.4 專屬性實(shí)驗(yàn)

按照處方量精密稱量本品中的輔料，按照供試品溶液的配制、稀釋方法配制輔料空白溶液，精密量取20μl注入色譜儀，記錄色譜圖。

結(jié)果：輔料和溶劑在孟魯司特出峰處無干擾。

2.7 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液分別于0、1、2、4、6小時(shí)進(jìn)樣，考察各個(gè)時(shí)間點(diǎn)溶液中孟魯司特峰峰面積的RSD%，驗(yàn)證孟魯司特供試品溶液的穩(wěn)定性。

結(jié)果：孟魯司特峰面積6小時(shí)內(nèi)RSD為0.8%，結(jié)果表明孟魯司特鈉含量測定溶液在6小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 線性試驗(yàn)

精密稱取孟魯司特二環(huán)己胺鹽對(duì)照品適量，分別配制成每1ml分別含孟魯司特濃度約為20μg、75μg、100μg、150μg、200μg的對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣20μl，記錄譜圖。以孟魯司特的峰面積為縱坐標(biāo)，以孟魯司特二環(huán)己胺鹽對(duì)照品的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，計(jì)算線性回歸方程及線性相關(guān)系數(shù)。

結(jié)果：孟魯司特線性方程為：y=4258708x-100257，r=0.9999；表明該方法孟魯司特進(jìn)樣量在0.424μg～4.24μg范圍內(nèi)均線性關(guān)系良好。

2.9 定量限試驗(yàn)

取2.8項(xiàng)下的對(duì)照品溶液進(jìn)一步稀釋，精密量取20μl注入高效液相色譜儀，以信噪比10：1時(shí)濃度計(jì)算進(jìn)樣量為檢測限。

結(jié)果：將2.8項(xiàng)下濃度最低的對(duì)照品溶液稀釋適宜的倍數(shù)后，當(dāng)其色譜峰信噪比即約為10：1時(shí)，由該溶液的濃度計(jì)算出孟魯司特鈉的檢測限為4.24ng。

2.10 回收率試驗(yàn)

取本品輔料適量，按照處方配比稱量各輔料9份，分成3組，置100ml容量瓶內(nèi)，分別精密加入孟魯司特二環(huán)己胺鹽對(duì)照品適量，按照供試品溶液稀釋方法配制，使每1ml溶液中含孟魯司特二環(huán)己胺鹽對(duì)照品的加入量分別為40μg、50μg、60μg，并按照規(guī)定的方法分別配制對(duì)照品溶液，量取以上各溶液20μl，按照以上檢測條件分別進(jìn)樣檢測，記錄譜圖，計(jì)算回收率。

結(jié)果：平均回收率為99.53%，RSD為1.13%，說明本方法耐用性較好。

2.11 中間精密度試驗(yàn)

取孟魯司特鈉片樣品，按照標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的方法配制孟魯司特鈉對(duì)照品溶液和供試品溶液，分別由不同人員、不同儀器、不同日期按照規(guī)定的檢測條進(jìn)樣檢測，記錄譜圖，計(jì)算RSD%。

結(jié)果：不同人員、不同儀器、不同日期分別檢測孟魯司特含量結(jié)果間RSD為1.70%，表明本方法中間精密度良好。

2.12 重復(fù)性試驗(yàn)

取孟魯司特鈉片樣品，按照標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的方法配制孟魯司特鈉對(duì)照品溶液和供試品溶液各6份，按照規(guī)定的檢測條進(jìn)樣檢測，記錄譜圖，計(jì)算RSD%。

結(jié)果：孟魯司特鈉片6次含量測定結(jié)果間RSD為0.97%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.13 耐用性試驗(yàn)

取孟魯司特鈉片樣品，按照規(guī)定的方法配制孟魯司特鈉對(duì)照品溶液和供試品溶液，調(diào)整流動(dòng)相比例分別為40：60，45：55，50：50；分別調(diào)整流動(dòng)相的流速為1.0ml/min、0.8ml/min、1.2ml/min；檢測波長分別為238nm、236nm、240nm；分別精密量取以上各溶液20μl，按照以上檢測條件分別進(jìn)樣檢測，記錄譜圖，考察耐用性。

結(jié)果：液相各檢測條件輕微改變后，孟魯司特鈉片含量測定結(jié)果無明顯差異，說明本方法耐用性較好。

2.14 孟魯司特鈉片含量測定

取三批樣品，檢查孟魯司特鈉片含量，結(jié)果三批含量結(jié)果分別為100.48%、100.11%、100.23%。

3 討論

本品的含量測定參照國家藥典委員會(huì)孟魯司特鈉片標(biāo)準(zhǔn)征求意見稿中方法進(jìn)行檢查。方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果表明，方法的專屬性、準(zhǔn)確度、中間精密度、重復(fù)性、耐用性較好，檢測靈敏度較高。該方法簡便、快捷，可準(zhǔn)確檢測孟魯司特鈉片的含量。

參考文獻(xiàn)：

[1] 國家藥典委員會(huì)，孟魯司特鈉片標(biāo)準(zhǔn)征求意見稿.