高效液相色譜法測(cè)定藥用輔料苯甲醇中苯甲酸和苯甲醛的含量

徐輝

摘 要：目的：采用高效液相色譜法對(duì)苯甲醇中所含有的苯甲酸以及苯甲醛的含量進(jìn)行檢測(cè)，苯甲醇主要應(yīng)用在藥用輔料中。方法：選取Acclaim120C18柱，規(guī)格為4.6mm×250mm，5μm，乙腈-0.02%甲酸作為流動(dòng)相，使用氨水對(duì)pH進(jìn)行調(diào)節(jié)，使其達(dá)到4.5，比例為30∶70，流速是1.0mL·min-1，所檢測(cè)的波長(zhǎng)為230nm，將柱溫控制在35℃，此時(shí)的進(jìn)樣量是20μL。結(jié)果：結(jié)果顯示當(dāng)苯甲酸在0.5006與15.02μg·mL-1之間時(shí)，能夠與峰面積達(dá)到良好的線性關(guān)系，并且平均回收率在100%以上，RSD的平均值小于1.3%，其中n=3；當(dāng)苯甲醛在0.5052與15.16μg·mL-1之間時(shí)，能夠與峰面積達(dá)到良好的線性關(guān)系，并且平均回收率在108%以上，此時(shí)的RSD平均值小于1.15%，其中n=3。結(jié)論：采用高效液相色譜檢測(cè)的方法具有較高的準(zhǔn)確性，將其應(yīng)用在苯甲酸以及苯甲醛的含量檢測(cè)過(guò)程中具有良好的效果。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；苯甲醇；苯甲酸；苯甲醛

中圖分類號(hào)：R927 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

通常情況下，苯甲醇都是當(dāng)作藥用輔料使用的，主要是在藥膏或者藥液中應(yīng)用比較廣泛，可以有效防止藥膏或者藥液變質(zhì)。想要對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行有效的控制，主要采用了高效液相色譜法進(jìn)行苯甲醇的檢測(cè)。

1.儀器與試藥

LC-30A超高效液相色譜儀（SPD-M20A二極管陣列檢測(cè)器、LC Solution色譜數(shù)據(jù)工作站，島津公司）；ML204分析天平（Mettler Teledo，精度：萬(wàn)分之一）。苯甲酸、苯甲醛對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)分別為100419-201302、111650-200802，使用前不需干燥處理，含量分別為100%、99.7%）；乙腈為色譜純（默克公司）；水為自制超純水；其余所需化學(xué)試劑均為分析純。

2.方法與結(jié)果

（1）色譜條件。色譜柱：Acclaim120C18（4.6mm× 250mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.02%甲酸溶液（用氨水調(diào)至pH=4.5）（30∶70）；流速：1.0mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：20μL。（2）溶液的配制和測(cè)定方法。首先對(duì)對(duì)照品的溶液進(jìn)行制備，適量的選取苯甲酸與苯甲醛的對(duì)照品，將其放入流動(dòng)相中進(jìn)行溶解，并且加以稀釋，直到每mL中含有0.5mg的對(duì)照品儲(chǔ)備液為止。緊接著稱取對(duì)照品儲(chǔ)備液1mL，將其放入容積為50mL的量瓶中，使用流動(dòng)相進(jìn)行稀釋，以達(dá)到要求的刻度，均勻的搖勻以后得到苯甲酸以及苯甲醛的混合對(duì)照品溶液10μg。其次是對(duì)供試品的溶液進(jìn)行制備，先取樣品25mg，加以精密的稱量以后，將其放入容積為25mL的棕色量瓶中，向其中加入適量的流動(dòng)相進(jìn)行溶解并且經(jīng)過(guò)均勻的稀釋以后達(dá)到相應(yīng)的刻度，將其搖勻以后得到供試品溶液。（3）專屬性與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)。對(duì)專屬性以及系統(tǒng)適應(yīng)性進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中，先準(zhǔn)備好適量的空白溶劑、混合對(duì)照品溶劑若干，分別對(duì)其進(jìn)行稱量，保證達(dá)到20μL，然后放入液相色譜儀器中檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果表明苯甲醛與苯甲醛以及苯甲醇在理論塔板數(shù)上都超過(guò)了15000，并且相互譜峰滿足基線分離的要求，從峰形的角度來(lái)看，效果理想。（4）線性關(guān)系。經(jīng)過(guò)對(duì)對(duì)照品儲(chǔ)備液的精密稱量，在其中加入適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)相以后可以稀釋稱為不同的溶液，滿足實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)要求，從標(biāo)準(zhǔn)溶液中稱量出適量的試液，為20μL，同樣將其注入進(jìn)液相色譜中進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)色譜圖顯示出來(lái)的內(nèi)容將苯甲酸還有苯甲醛濃度計(jì)算出線性回歸，結(jié)果顯示具有良好的線性回歸關(guān)系。（5）檢出限與定量限。選取2.4項(xiàng)下的最小濃度溶液進(jìn)行進(jìn)樣，并且對(duì)進(jìn)樣的體積加以適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，當(dāng)SIN為3時(shí)，對(duì)苯甲酸以及苯甲醛的檢出限進(jìn)行分析，結(jié)果分別是0.41ng以及2.10ng，當(dāng)SIN為10時(shí)，對(duì)苯甲酸以及苯甲醛的定量限進(jìn)行分析，結(jié)果為1.38ng以及7.01ng。

3.討論

綜上所述，本文主要以乙腈-乙酸銨溶液為系統(tǒng)，發(fā)現(xiàn)苯甲醛以及苯甲醛出現(xiàn)了明顯的拖尾現(xiàn)象，并且基線存在較大的波動(dòng)，無(wú)法達(dá)到理想的分離效果，同時(shí)又對(duì)乙腈-0.02%甲酸（30∶70）進(jìn)行了考察，結(jié)果顯示分離效果良好，基線具有平整性的特點(diǎn)，所以最終選擇乙腈-0.02%甲酸（30∶70）作為流動(dòng)相。在此基礎(chǔ)上使用氨水對(duì)0.02%的甲酸酸堿值進(jìn)行調(diào)節(jié)，對(duì)苯甲酸、苯甲醛以及苯甲醇的影響進(jìn)行分析，結(jié)果顯示苯甲酸與苯甲醇在pH為4.0時(shí)，分離效果不理想，當(dāng)pH在5.0時(shí)，存在明顯的峰拖尾現(xiàn)象，并且峰形呈現(xiàn)不對(duì)稱性，當(dāng)pH為4.5時(shí)，對(duì)稱因子與1最為接近，分離度能夠超過(guò)1.5，并且基線相對(duì)比較平滑，因此最終選擇了乙腈-0.02%甲酸（30∶70）作為流動(dòng)相。在對(duì)波長(zhǎng)進(jìn)行選擇的過(guò)程中，先選取適當(dāng)?shù)募状紭悠愤m量，將其置于25mL的量瓶之中，在量瓶中再加入適量的苯甲酸以及苯甲醛對(duì)照品，在其中加入流動(dòng)相進(jìn)行溶解，直到稀釋到相應(yīng)的刻度上，均勻的搖晃，精密的稱取20μL后將其注入進(jìn)液相色譜儀中準(zhǔn)備檢測(cè)，采用3D圖的形式對(duì)兩種成分進(jìn)行觀察，結(jié)果兩種成分在峰形為400nm～200nm時(shí)觀察分離度以及相應(yīng)值等情況，結(jié)果顯示在230nm時(shí)能夠達(dá)到最大的吸收波長(zhǎng)，以此作為測(cè)定波長(zhǎng)，該測(cè)定波長(zhǎng)符合百分比的特點(diǎn)，具有同等的百分比關(guān)系，在基線表現(xiàn)的方面具有平滑性的特點(diǎn)。通過(guò)本文的試驗(yàn)結(jié)果顯示，如果將其用作普通劑型，那么應(yīng)該確保苯甲醛的含量在1.5%以下，苯甲酸的含量為0.1%以下。如果應(yīng)用在注射時(shí)，那么苯甲醇中苯甲酸的含量應(yīng)該控制在0.05%以下，苯甲醛的含量應(yīng)該控制在0.05%以下。

參考文獻(xiàn)

[1]孫占松.國(guó)內(nèi)苯甲醇生產(chǎn)及應(yīng)用分析[J].精細(xì)與專用化妝品，2012，20（12）：12-14.