大補(bǔ)陰丸對去卵巢所致骨質(zhì)疏松癥大鼠骨組織形態(tài)計量學(xué)指標(biāo)的影響

汪文來，劉梅潔，于 崢，李 艷，王少君，劉 紅，潘靜華，王 震，趙紅霞

(中國中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所，北京 100700)

大補(bǔ)陰丸對去卵巢所致骨質(zhì)疏松癥大鼠骨組織形態(tài)計量學(xué)指標(biāo)的影響

汪文來，劉梅潔，于 崢，李 艷，王少君，劉 紅，潘靜華，王 震，趙紅霞△

(中國中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所，北京 100700)

目的:觀察大補(bǔ)陰丸對去卵巢所致骨質(zhì)疏松癥大鼠脛骨骨組織形態(tài)計量學(xué)指標(biāo)的影響，以探討其對骨質(zhì)疏松癥的作用。方法:將88只雌性Wistar大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為空白對照組、假手術(shù)組、模型組、己烯雌酚組和大補(bǔ)陰丸高、中、低劑量組7組。采用摘除卵巢的方法制作骨質(zhì)疏松癥動物模型，在灌胃給藥3個月后，運(yùn)用骨組織形態(tài)計量學(xué)方法對大鼠脛骨不脫鈣骨切片進(jìn)行形態(tài)計量。結(jié)果:與模型組比較，大補(bǔ)陰丸高、中劑量組TBV%顯著增高，TRS%、TFS%、MAR、mAR顯著降低。結(jié)論:大補(bǔ)陰丸對去卵巢所致的大鼠骨質(zhì)疏松癥具有一定的治療作用。

大補(bǔ)陰丸;骨質(zhì)疏松癥;骨組織形態(tài)計量學(xué)

中醫(yī)理論認(rèn)為，骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生，腎虛是其根本原因，大補(bǔ)陰丸由熟地黃、炙龜板、黃柏、知母、豬脊髓組成，具有滋陰降火、大補(bǔ)真陰之功效。據(jù)此，本實驗以卵巢切除大鼠為動物模型，采用骨組織形態(tài)計量學(xué)方法，探討該方對骨質(zhì)疏松癥的治療作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 選用雌性SPF級Wistar大鼠88只，體質(zhì)量200～220 g，由中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供(許可證號 SCXK-(軍) 2002-001)。大鼠飼養(yǎng)和實驗均在中國中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所清潔級實驗動物室內(nèi)進(jìn)行(實驗動物室許可證號SYXK(京)2010-0032)。

1.1.2 藥物 熟地黃、鹽知母、鹽黃柏、醋龜甲購自北京燕京飲片廠，豬脊髓購自北京市昌平區(qū)回龍觀農(nóng)貿(mào)市場。經(jīng)中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所生藥室胡世林研究員鑒定均符合2010年版《中華人民共和國藥典》項下規(guī)定。藥材加水煎煮，藥液濃縮至1 g生藥 /1 ml的濃度。鹽酸四環(huán)素，欣惠澤奧科技有限公司，己烯雌酚為合肥久聯(lián)制藥有限公司生產(chǎn)。

1.1.3 主要儀器 Reicheit-Jung切片機(jī)、CTR6000顯微鏡、QwinV3圖像分析儀系統(tǒng)均為德國Leica公司。

1.2 方法

1.2.1 動物分組及處理 先將88只大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為3組，其中空白對照組12只，假手術(shù)組12只，造模組64只。造模組大鼠用戊巴比妥鈉麻醉后摘除雙側(cè)卵巢［1］，假手術(shù)組只摘取卵巢周圍的少許脂肪組織。術(shù)后15 d，再將造模組大鼠以體質(zhì)量按隨機(jī)數(shù)字表法分為5組，其中模型組12只，己烯雌酚組13只，大補(bǔ)陰丸高劑量組13只，大補(bǔ)陰丸中劑量組13只，大補(bǔ)陰丸低劑量組13只。開始灌胃給藥，大補(bǔ)陰丸高劑量組7.6 g生藥/kg體質(zhì)量，大補(bǔ)陰丸中劑量組3.8 g生藥/kg體質(zhì)量，大補(bǔ)陰丸低劑量組1.9 g生藥/kg體質(zhì)量，陽性對照組灌胃給予藥液濃度為0.008 mg/ml的己烯雌酚5.6 ml/kg體質(zhì)量。以上給藥，每日1次，連續(xù)6 d，休息1 d后再連續(xù)灌服6 d，如此給藥3個月，空白對照組、假手術(shù)組、模型組按上法灌服等體積的純凈水。分別在大鼠處死前15 d和前3 d腹腔注射鹽酸四環(huán)素30 mg/kg體質(zhì)量，以對骨進(jìn)行熒光標(biāo)記。給藥結(jié)束后，將大鼠以45 mg/kg劑量的戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后，將各組大鼠迅速脫頸椎處死。取右側(cè)脛骨，用4% 多聚甲醛溶液固定，制作不脫鈣骨切片，用于骨組織形態(tài)計量學(xué)檢測。

1.2.2 指標(biāo)的檢測方法 骨組織形態(tài)計量學(xué)指標(biāo)的測定:不脫鈣骨切片的制作及染色方法參見文獻(xiàn)［2］。采用Leica Qwin圖像分析系統(tǒng)，按照章明放等方法［2］對不脫鈣骨切片進(jìn)行形態(tài)計量。(1)骨小梁組織形態(tài)計量:骨小梁體積百分比(TBV%) :骨小梁體積占被測骨髓腔總體積的百分比是衡量骨量水平的主要標(biāo)志;骨小梁吸收表面百分比(TRS%):不規(guī)則、凹凸不平的骨小梁表面占骨小梁表面的百分比可判斷破骨細(xì)胞(OC)的活性;骨小梁形成表面百分比(TFS%):有成骨細(xì)胞(OB)被覆的類骨質(zhì)表面占骨小梁表面的百分比，可判斷OB的活性;骨小梁礦化率(MAR):骨小梁表面熒光雙標(biāo)記帶的平均距離除以2次標(biāo)記相隔的天數(shù); (2)皮質(zhì)內(nèi)表面形態(tài)計量:類骨質(zhì)平均寬度(OSW) :皮質(zhì)內(nèi)表面有OB被覆的類骨質(zhì)的平均寬度;骨皮質(zhì)礦化率(mAR):皮質(zhì)內(nèi)表面雙標(biāo)記帶的平均距離除以2次標(biāo)記相隔的天數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 大補(bǔ)陰丸對去卵巢大鼠脛骨TBV% 影響

表1顯示，模型組及各給藥組大鼠脛骨TBV%較假手術(shù)組顯著降低。與模型組比較，大補(bǔ)陰丸高、中劑量組TBV%顯著升高，與低劑量組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。陽性對照組的TBV%顯著高于模型組，與假手術(shù)組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 各組大鼠脛骨TBV%的變化比較

2.2 大補(bǔ)陰丸對去卵巢大鼠脛骨 TRS%和 TFS%的影響

表2顯示，模型組及各給藥組大鼠脛骨TRS%和TFS%較假手術(shù)組顯著升高。與模型組比較，陽性對照組、大補(bǔ)陰丸高、中劑量組TRS%和TFS%顯著降低，與低劑量組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

表2 各組大鼠脛骨TRS%和TFS%的變化比較

2.3 大補(bǔ)陰丸對去卵巢大鼠脛骨OSW、MAR和mAR的影響

表3顯示，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠脛骨OSW明顯增高(P＜0.05)，與其他組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。與模型組比較，陽性對照組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。與假手術(shù)組比較，模型組MAR和mAR均顯著升高(P＜0.01)，與模型組比較，陽性對照組、大補(bǔ)陰丸高、中劑量組MAR和mAR均顯著降低(P＜0.05)。

表3 各組大鼠脛骨OSW、MAR和mAR變化比較

3 討論

實驗結(jié)果表明，大鼠灌服大補(bǔ)陰丸水煎液3個月后與模型組比較，大補(bǔ)陰丸組大鼠脛骨TBV%顯著增加，而 TRS%、TFS%、MAR、mAR明顯降低，OSW比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。提示大補(bǔ)陰丸對于卵巢切除造成的骨吸收大于骨形成的高轉(zhuǎn)換型大鼠骨質(zhì)疏松癥模型具有一定的治療作用，為拓展其臨床應(yīng)用提供了參考。

［1］鞠大宏，張春英，王安民，等，溫補(bǔ)腎陽方對去卵巢所致骨質(zhì)疏松癥大鼠IL-1和IL-6活性的影響［J］．中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2000，6(4):29-32．

［2］章明放，張乃鑫，譚郁彬．運(yùn)動對雌性大鼠去勢后骨質(zhì)疏松癥的作用［J］．中華骨科雜志，1994，14(6):365-369．

The Effect of DaBuYinWan on the Bone Histomorphology of Ovariectomized Rats Pilon

WANG Wen-lia，YU Zheng，LI Yan，WANG Shao-jun，LIN Hong，Pan Jin-hua，WANG Zhen，ZHAO Hong-xia△
(Basic Theory Institute of TCM，CACMS，Beijing 100700，China)

Objective:Observe the influence of DaBuYinWan on the bone histomorphology of ovariectomized rats pilon，in order to investigate the effect of DaBuYinWan on Osteoporosis．Methods:The 88 female rats were randomly divided into 7 groups，concluding normal group，sham operation group，model group，positive group and Dabuyinwan(high，middle，low-dose)group．Establish a rat osteoporosis model with removing the ovaries．After three months administration，measure the undecalcified sections in bone by bone histomorphometry．Results:Compared with the model group，TBV%in positive group and Dabuyinwan(high，middle-dose)group increased obviously，TRS%，TFS%，MAR and mAR decreased obviously．

Dabuyinwan;Osteoporosis;Bone histomorphometry

R285．5

B

1006-3250(2017)01-0078-02

2016-06-22

△

趙紅霞(1970-)，女，北京人，副研究員，醫(yī)學(xué)碩士，從事中醫(yī)婦科、內(nèi)科等臨床與理論研究，Tel: 136936788283，E-mail:zhaohongxia7000@163．com。