NBF—926的生物測定及對大白菜根腫病的防效試驗

龍同+曹春霞+張光陽+黃大野+楊妮娜+胡洪濤+楊自文+楊再輝

摘要：十字花科蔬菜根腫病休眠孢子在1×103～1×107個孢子/mL濃度范圍內(nèi)均能侵染大白菜，隨著休眠孢子濃度的不斷增加，各處理大白菜感病率逐漸增高。1×107個孢子/mL濃度處理感病率最高，達100%。采用1×107蕓薹根腫菌休眠孢子感染盆栽大白菜，測定幾種不同藥劑對根腫病的防治效果，結(jié)果表明，生防鏈霉菌NBF-926防治根腫病的盆栽試驗的效果及植株鮮重均最高，顯著高于其他幾種藥劑。

關(guān)鍵詞：蕓薹根腫菌；休眠孢子；鏈霉菌；生物測定；根腫??；生物防治；

中圖分類號：TQ450.2+6；S476 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）23-6134-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.23.031

Abstract：The resting spores of cruciferous vegetables clubroot in the range of 1×107～1×103 can infect cabbage. Along with the increasing concentration of dormant spores， the Chinese cabbage ID（incidence of disease） of each treatment increased gradually. The ID of 1×107 concentration was the highest， up to 100%. Using 1×107 dormant spores of P. Brassicae clubroot to infect potted cabbage， the control efficacy of several different fungicides against clubroot were tested， the results showed that streptomyces NBF-926 had the highest biological control and plant fresh weight， significantly higher than the other agents.

Key words： Plasmodiophora brassicae； dormant spores； Streptomyces； bioassay； clubroot； biological control

十字花科根腫病plasmodiophoa brassicae Woron是一種世界性土傳病害，其致病菌目前尚無法人工培養(yǎng)，分類地位還存在爭議（有學(xué)者將其歸于鞭毛菌，也有學(xué)者將其歸于粘菌），休眠孢子在土壤中可存活10年以上[1-3]。近年，根腫病在湖北、云南、四川、貴州、浙江、福建等地高山十字花科蔬菜種植區(qū)發(fā)生嚴(yán)重，已成為制約中國高山大白菜、甘藍、蘿卜反季節(jié)生產(chǎn)的主要因素之一，其中尤以大白菜受害最重，嚴(yán)重地塊甚至絕收，每公頃損失 45 000元以上[4-7]。

防治根腫病的有效方法主要是撒石灰調(diào)節(jié)土壤pH、輪作、種植抗病品種等，但由于存在土壤板結(jié)、經(jīng)濟效益差、不耐儲運等缺點，上述措施均未大面積推廣。常規(guī)殺菌劑如多菌靈、福美雙、代森錳鋅等防效不明顯，防效最好的是日本石原株式會社50%氟啶胺SC與10%氰霜唑SC組合，防效可達85%左右，但由于其抑制種子萌發(fā)及使用成本高昂（每公頃近6 000元）等原因，也未得到大面積推廣應(yīng)用[8-10]。目前生物防治根腫病已成為研究熱點[9，11-17]。

本研究對生物農(nóng)藥NBF-926懸浮劑進行了生物測定，并對其防治十字花科蔬菜根腫病的效果進行了盆栽試驗，以期明確其初步的防效。

1 材料與方法

1.1 供試大白菜品種

大白菜品種為山地王（中央種苗株式會社）。

1.2 供試藥劑

NBF-926懸浮劑（1億cfu/g鏈霉菌懸浮劑，湖北省生物農(nóng)藥工程中心），是一種鏈霉菌生物制劑，鏈霉菌菌種包括尖孢鏈霉菌（Streptomyces cuspidosporus）WS-29246和/或瘡痂鏈霉菌（Streptomyces scabiei）WS-24926，已申請國家發(fā)明專利；氟啶胺懸浮劑+氰霜唑（日本石原株式會社）；海島素（海南正業(yè)）；腫腐萎（50%多·福可濕性粉劑，山東榮邦化工有限公司）；1 000億cfu/g枯草芽胞桿菌WP（湖北康欣農(nóng)用藥業(yè)有限公司）；解淀粉芽孢桿菌（由武漢生綠科技有限公司提供）。

1.3 休眠孢子懸浮液制備

休眠孢子懸浮液制備參考黃云[13]的方法。根腫病原為蕓薹根腫菌4號生理小種。稱取30 g大白菜根腫組織洗凈，置于24 ℃條件下腐爛5 d，切碎后加入150 mL無菌水，用組織攪碎機攪成勻漿，400目紗布過濾；濾液移入150 mL離心管中，500 r/min離心5 min；取上清液及上層灰色沉淀，加無菌水懸浮，3 100 r/min離心15 min；沉淀用15 mL 50%蔗糖溶液懸浮，混勻，3 100 r/min離心10 min；上清液用移液槍移入離心管中，加90 mL無菌水，3 100 r/min離心10 min，留沉淀，此步驟重復(fù)2～3次；將沉淀溶于一定量的無菌水中，制成濃度為1×109個孢子/mL的孢子懸浮液，并保存于4℃冰箱備用。

1.4 休眠孢子懸浮液致病力測定

將上述休眠孢子母液分別制備成不同濃度梯度的孢子懸浮液1×103、1×104、1×105、1×106、1×107個孢子/mL。采用花缽（12 cm×8 cm×10 cm）移栽健康大白菜，每缽裝滅菌土1 kg。每缽移栽1株大白菜（2片真葉苗齡），移栽當(dāng)天每株接入不同濃度處理大白菜根腫病休眠孢子2 mL。每處理10缽，重復(fù)3次。設(shè)清水對照。種植50 d后，拔出白菜根洗凈，察看根系的根腫病，計算感病率。

1.5 NBF-926防治大白菜根腫病盆栽試驗

采用同樣大小花缽，每缽裝滅菌土1 kg，移栽1株2葉齡大白菜苗，移栽當(dāng)天每株接入大白菜根腫病休眠孢子2 mL（1×107個孢子/mL）。根據(jù)各供試藥劑推薦用量及預(yù)備試驗結(jié)果，試驗設(shè)A稀釋100倍、C稀釋1 000倍、D稀釋800倍，E、F稀釋100倍試驗處理，B處理中氟啶胺稀釋1 000倍，氰霜唑稀釋2 000倍。移栽后1 d灌根1次，每處理10缽，每缽100 mL，定植10 d后再灌根1次，每缽100 mL；藥劑B第一次采用氟啶胺灌根，第二次采用氰霜唑灌根。各處理共灌根2次，重復(fù)3次。設(shè)清水對照。

1.6 分級標(biāo)準(zhǔn)

0級，無?。?級，根腫只附著在側(cè)根上，數(shù)量占根系全部的1%～25%；2級，主根上有根腫附著，側(cè)根上根腫數(shù)量占根系全部26%～49%；3級，主根上有根腫附著，根腫數(shù)量占根系的50%～75%；4級，主根上有根腫附著，根腫數(shù)量占根系的75%以上。

1.7 數(shù)據(jù)分析

采用Excel 2003和SPSS 11.5軟件。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度休眠孢子懸浮液對根腫病致病力

蕓薹根腫菌4號生理小種致病力最強，本研究采用該生理小種進行試驗。十字花科蔬菜根腫病休眠孢子在土壤中存活時間長，活力強，是十字花科作物初次侵染源。由表1可知，不同濃度的根腫病休眠孢子均能侵染大白菜植株，但不同濃度處理之間差異明顯，隨著休眠孢子濃度的增加，各處理大白菜感病率呈正比例增高。1×107個孢子/mL濃度處理感病率最高，達100%，極顯著高于1×105、1×104、1×103個孢子/mL濃度處理，與1×106個孢子/mL濃度處理差異不顯著。

2.2 不同藥劑防治根腫病的盆栽試驗結(jié)果

生物農(nóng)藥NBF-926是國家生物農(nóng)藥工程技術(shù)研究中心從10萬株放線菌及真菌微生物資源中篩選獲得的一種十字花科根腫病高效制劑，已申請國家知識產(chǎn)權(quán)保護。采用盆栽試驗，以枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、氟啶胺等為對照，測定NBF-926懸浮劑對十字花科根腫病的抑菌活性。

盆栽試驗結(jié)果，NBF-926懸浮劑防效最高，達到95.1%，極顯著高于其他處理；其株重最高，為165.4 g，顯著高于海島素、腫腐姜、枯草芽胞桿菌、解淀粉芽胞桿菌和清水對照處理（表2）。NBF-926處理的大白菜根系完好，極少出現(xiàn)根腫，其他處理均有明顯的根腫形成（圖1）。

3 小結(jié)與討論

根腫病休眠孢子在1×103～1×107個孢子/mL濃度范圍內(nèi)均能侵染大白菜，隨著休眠孢子濃度的增加，各處理的大白菜感病率逐漸增高。1×107個孢子/mL濃度處理感病率最高，達100%?？捎糜谙乱徊讲煌巹┓乐胃[病的盆栽試驗。

生物藥劑NBF-926防治大白菜根腫病的盆栽試驗防效及植株鮮重均最高，其盆栽試驗防效達到95.1%，顯著高于日本化學(xué)農(nóng)藥氟啶胺與氰霜唑組合和其他藥劑，值得進一步研究開發(fā)。

不同藥劑生物測定盆栽試驗中大白菜植株重量過輕，最高株重200 g左右，與田間種植的大白菜植株重量達2～3 kg差異很大，今后宜增加缽體積和營養(yǎng)土質(zhì)量。

參考文獻：

[1] ARIE T，K OBAYASHIY，OKADA G，et al.Control of soilborne clubroot disease of cruciferous plants by epoxydon from Phoma glomerata[J]. Plant Pathology，1998，47：743-748.

[2] NEUHAUSER S，KIRCHMAIR M，GLEASON F H. The ecological potentials of Phytomyxea（plasmodiophorids）in aquatic food webs.Hydrobiologia，2011，659（1）：23-35.

[3] KAGEYAMA K，ASANO T. Life Cycle of Plasmodiophora brassicae[J]. J Plant Growth Regul，2009，28：203-211.

[4] 李寶聚.湖北長陽火燒坪十字花科根腫病——蔬菜“一鄉(xiāng)一品”帶來的問題[J].中國蔬菜，2008（7）：55.

[5] 邱正明，肖長惜.生態(tài)型高山蔬菜可持續(xù)生產(chǎn)技術(shù)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社，2008.

[6] 龍 同，曹春霞，萬中義，等.7種藥劑對大白菜根腫病田間防效的比較[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，49（7）：1616-1618.

[7] 曹春霞，龍 同，劉翠君，等.大白菜根腫病防治藥劑篩選盆栽試驗[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，49（12）：3055-3056.

[8] 趙毓潮，向祖煥，張植敏.氰霜唑與氟啶胺配套防治十字花科根腫病試驗效果[J].湖北植保，2008（4）：51-52.

[9] 楊佩文，尚 慧，董麗英，等.大白菜根腫病發(fā)病因素分析與防治技術(shù)[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報，2009，22（3）：663-666.

[10] 陶偉林，樊國昌，周 娜，等.高山甘藍根腫病田間防效試驗初報[J].南方農(nóng)業(yè)，2011，5（7）：12-14.

[11] FENG J，XIAO Q，HUANG S F，et al. Infection of canola by secondary zoospores of Plasmodiophora brassicae produced on a nonhost[J].Eur J Plant Pathol，2012，132：309-315.

[12] 何月秋，熊國如，范成明.防治十字花科根腫病的生物制劑及其應(yīng)用[P].中國，200810058919.0.2008-9-12.

[13] 黃 云，馬淑青，李曉琴，等.油菜根腫病菌的形態(tài)和休眠孢子生物學(xué)特性[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，40（7）：1388-1394.

[14] 李金萍，柴阿麗，孫日飛，等.十字花科蔬菜根腫病研究新進展[J].中國蔬菜，2012（8）：1-4.

[15] 王 靖.十字花科作物根腫病生防放線菌研究[D].雅安：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2011.

[16] 肖崇剛，郭向華.甘藍根腫病菌的生物學(xué)特性研究[J].菌物系統(tǒng)，2002，21（4）：597-603.

[17] 周 燚，楊廷憲，趙毓潮，等.大白菜根腫病綜合防治新技術(shù)研究[J].中國蔬菜，2012（2）：83-86.