熱應激誘導的氧化應激對動物腸道組織的損傷

黃 帆 呂秋鳳

(沈陽農(nóng)業(yè)大學畜牧獸醫(yī)學院，沈陽110866)

熱應激誘導的氧化應激對動物腸道組織的損傷

黃 帆 呂秋鳳*

(沈陽農(nóng)業(yè)大學畜牧獸醫(yī)學院，沈陽110866)

熱應激是一種常見的非特異性應激，給畜牧業(yè)帶來較大的損失。腸道組織在熱應激作用下易發(fā)生缺血缺氧，腸道細胞產(chǎn)生氧化應激，造成細胞凋亡，引起腸道組織損傷。而腸道作為動物機體吸收營養(yǎng)、屏障病原體最為重要的器官，當其受到損傷時將直接影響到動物機體的生長發(fā)育及健康狀況。本文從熱應激誘導腸道細胞產(chǎn)生氧化應激，氧化應激對腸道的損傷，以及熱應激誘導細胞凋亡途徑等方面，結(jié)合國內(nèi)外近年來研究進展作一綜述。

腸道；熱應激；氧化應激；細胞凋亡

熱應激是應激反應的一種，當動物處在高溫環(huán)境時，由于體內(nèi)的熱量無法得到有效的散失而出現(xiàn)張口呼吸、精神沉郁、采食量下降、增重減慢，嚴重時可因心力衰竭、腦組織受損而死亡，同時使動物福利受到挑戰(zhàn)[1]。熱應激對動物機體組織的損傷主要通過氧化應激、炎癥反應等途徑造成細胞損傷和細胞凋亡。

腸道擔負著動物機體的營養(yǎng)吸收、屏障病原體等重要功能。流經(jīng)腸道的血液約占全身血液的三分之一，當動物處在高溫環(huán)境中時，由于機體散熱的需要，大量血液流向體表的同時，還要維持心臟、大腦的血液供應，這使得腸道組織易出現(xiàn)缺血及缺氧，造成腸道細胞凋亡，導致腸黏膜受損。這不僅影響了腸道的吸收功能，還因為腸道黏膜的完整性遭到破壞而使致病菌侵入，引起全身感染[2]。最終動物因得不到良好的營養(yǎng)供給而出現(xiàn)生長緩慢，或因致病菌易于通過機體的防御屏障而導致感染而死亡。本論文總結(jié)近年來的研究，重點討論熱應激誘導氧化應激對動物腸道組織的損傷。

1 熱應激誘導動物腸道組織產(chǎn)生氧化應激

動物在新陳代謝過程中會產(chǎn)生許多活性氧(reactive oxygen species,ROS)，而動物機體本身擁有一套可以清除ROS的系統(tǒng)，如超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)等。在正常狀態(tài)下，機體中的促氧化物和抗氧化物處于動態(tài)平衡。當細胞受到外源性的刺激，如熱應激時，機體內(nèi)的抗氧化物含量下降，而促氧化物含量升高，使原來的動態(tài)平衡被打破。此時，我們稱動物組織細胞發(fā)生了氧化應激(oxidative stress)。

熱應激發(fā)生后，動物機體中的某些與氧化應激相關(guān)的生化因子的含量和活性發(fā)生顯著的變化。處于熱應激狀態(tài)下的動物，其血清中的皮質(zhì)酮、丙二醛(malonic dialdehyde，MDA)、ROS的含量上升，而SOD、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性和總抗氧化能力(T-AOC)下降[3-4],這提示我們熱應激與氧化應激存在相關(guān)性。不僅在血清這些成分發(fā)生變化，高溫還可使大鼠小腸上皮細胞內(nèi)的ROS含量顯著升高，使細胞內(nèi)的SOD、GSH-Px活性下降[5]；同時，高溫導致小腸上皮細胞出現(xiàn)嚴重的凋亡、壞死和脫落。Kikusato等[6]證實了熱應激可導致細胞線粒體中過氧化物含量增加，并使細胞內(nèi)ROS含量升高，說明熱應激可直接導致細胞產(chǎn)生氧化應激。

由此可知，當動物發(fā)生熱應激時，無論是血清中，還是腸道組織中，其抗氧化物含量減少，而促氧化物含量增多，使小腸組織細胞發(fā)生氧化應激，而氧化應激產(chǎn)生的ROS、自由基等物質(zhì)，會對腸道結(jié)構(gòu)和功能造成損傷[7-9]。

2 熱應激誘導的氧化應激對動物腸道的損傷

有學者研究熱應激對動物腸道的影響，通過形態(tài)學觀察發(fā)現(xiàn)熱應激導致小腸絨毛高度下降，寬度增加以及小腸上皮細胞面積減少，腸黏膜厚度、腸壁厚度以及隱窩深度顯著降低，杯狀細胞顯著減少等；同時，蘇木精-伊紅(HE)染色小腸組織可以明顯的觀察到小腸絨毛膜出現(xiàn)嚴重的破損。這種組織形態(tài)學上的變化提示小腸的吸收功能和屏障功能受到嚴重的損害[10-14]。

動物的腸上皮分泌細胞系是由潘氏細胞、杯狀細胞以及腸分泌細胞所組成，這些細胞可以保護腸道免受有害病菌的侵入，同時通過分泌激素調(diào)控腸道的功能。小腸成熟的上皮細胞一般存活4～5 d，隨后脫落到腸管中，由小腸隱窩基部的干細胞分化出新的上皮細胞，并通過遷移到小腸頂端的成熟區(qū)替代脫落的細胞。這些上皮細胞的增殖和死亡處在一個較為嚴格的平衡中，以此維持腸道的屏障和吸收功能[15]?，F(xiàn)已知表皮生長因子是一種促細胞生長因子，在動物的機體中具有廣泛的生物學活性，例如促進腸道組織的發(fā)育及修復受損的腸黏膜組織等重要作用[16]。Liu等[17]發(fā)現(xiàn)熱應激可以下調(diào)豬空腸組織中的上皮生長因子及其受體的表達，減緩了小腸上皮細胞的增殖，使小腸黏膜的完整性受到破壞。

急性熱應激使肉雞血清皮質(zhì)酮含量和死亡率上升，降低飼料的采食量和日增重，以及使飼料轉(zhuǎn)化率降低，而這些不良變化可能與急性熱應激誘發(fā)的多灶性急性腸炎有關(guān)[18]。檢測熱應激狀態(tài)下動物的空腸組織，發(fā)現(xiàn)促炎因子TNF-α、TFN-γ、IL-β三者的mRNA表達量顯著增加[19]，過氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性升高，且血液中的內(nèi)毒素含量增高[20]。由此確定熱應激可以導致小腸組織發(fā)生炎癥反應。

熱應激誘導下產(chǎn)生的ROS、MDA是損傷腸道組織的重要因子。如ROS在細胞中累積可以損傷DNA，從而導致細胞凋亡；而MDA是脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，可以損傷細胞膜，同樣可以導致細胞凋亡[21-22]?？傊瑹釕た梢酝ㄟ^多種途徑，包括誘導氧化應激、炎癥反應等損傷腸道細胞或使其發(fā)生細胞凋亡，從而破壞了腸道黏膜的完整性。這與Cui等[23]通過蛋白質(zhì)組學研究熱應激對豬小腸組織影響結(jié)果相一致。

3 熱應激誘導的細胞凋亡途徑

持續(xù)熱應激可以使腸道組織嚴重損傷，而細胞凋亡是造成損傷的主要方式。熱應激可誘導腸道細胞發(fā)生氧化應激，而氧化應激產(chǎn)生的過多ROS可以導致細胞DNA損傷、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)過氧化，最終導致細胞凋亡[24-25]。近年來的研究表明，熱應激誘導的細胞凋亡途徑十分復雜，包括線粒體凋亡途徑、死亡受體途徑以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激途徑。

3.1 線粒體凋亡途徑

通過透射電鏡觀察大鼠空腸組織的超微結(jié)構(gòu)時發(fā)現(xiàn)，熱應激使細胞線粒體出現(xiàn)腫脹、空泡化等現(xiàn)象[19]，說明熱應激誘導的細胞凋亡與線粒體有著直接的關(guān)聯(lián)。在線粒體凋亡途徑中，細胞色素C與半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-9以及凋亡蛋白酶激活因子(APAF1)組成凋亡復合體，從而激活凋亡基因Caspase-3誘發(fā)細胞凋亡。Xu等[26]通過過氧化氫誘導體外培養(yǎng)的大鼠小腸上皮細胞(IEC-6)產(chǎn)生氧化應激，并檢測其相關(guān)凋亡基因和線粒體膜電位等指標，發(fā)現(xiàn)與之前學者研究結(jié)果相一致的變化，如ROS含量顯著增加，SOD活性下降及MDA含量增加，胞質(zhì)中的細胞色素C含量升高，線粒體膜電位下降，同時檢測到Caspase-9和Caspase-3含量升高，與線粒體凋亡途徑相關(guān)的基因Bax、Bcl-2表達量以及細胞凋亡率顯著升高，說明氧化應激可以通過線粒體途徑誘導細胞凋亡。然而在細胞凋亡中，Bax是促凋亡基因，Bcl-2是抑制凋亡的基因，Bcl-2基因的過表達可能是由于細胞應對氧化應激時的自我抵抗。但賈丹等[27]的研究結(jié)果表明，熱應激使豬小腸上皮細胞的Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax基因表達上調(diào)，Bcl-2基因表達上調(diào)，說明熱應激通過線粒體途徑誘導細胞凋亡的同時，也可通過死亡受體途徑誘導凋亡。

3.2 死亡受體途徑

細胞凋亡的死亡受體途徑也被稱為外源性凋亡途徑，是由腫瘤壞死因子受體(TNFR)家族成員與其配體相結(jié)合而引起的細胞凋亡，如Fas及其配體(FasL)相結(jié)合，并在Fas偶聯(lián)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白(Fas-associated death domain protein，F(xiàn)ADD)的協(xié)助下，收集并積累Caspase-8的前體，形成死亡誘導信號復合體(death-inducing signaling complex，DISC)，激活Caspase-8，活化的Caspase-8引起Caspase級聯(lián)反應，進一步激活Caspase-3等，最終導致細胞凋亡[24,28-29]。熱應激可導致體外培養(yǎng)的細胞中Fas、FasL、Caspase-8、Caspase-3基因過表達，以及使細胞的凋亡率顯著上升，說明熱應激可以通過死亡受體途徑誘導細胞凋亡[30-31]。

3.3 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激途徑

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是所有真核細胞中具有重要意義的細胞器，具有加工和修飾蛋白質(zhì)的功能。當細胞受到某種因素的刺激時，如缺氧、低血糖、高血糖、酸中毒等，將導致細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的未折疊蛋白和錯誤折疊蛋白積累過量，引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激(endoplasmic reticulum stress，ERS)。細胞通過一種高度保守的脅迫適應性反應成為“未折疊蛋白反應(unfolded protein response，UPR)”保護細胞免受ERS的損傷，但是長期的不良刺激或UPR不足將導致細胞凋亡[32-33]。

在動物細胞中，Caspase-12是ERS誘導細胞凋亡的特有介質(zhì)，在死亡受體和線粒體凋亡途徑中不會被激活[34-35]。Yin等[36]通過模擬運輸過程中引起的熱應激和震動應激研究大鼠的小腸損傷機制，通過透射電子顯微鏡觀察到應激組大鼠空腸上皮細胞中的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)生嚴重的腫脹，提示細胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激；通過對應激組大鼠空腸的KEGG通路分析表明，細胞凋亡與自噬，絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號通路，p53信號通路與哺乳動物雷帕霉素(mTOR)信號通路參與了熱應激與震動應激引起的細胞損傷，蛋白質(zhì)印跡(Western blot)分析指出Caspase-12、Caspase-3等表達量升高，說明ERS誘導了細胞凋亡。

4 提高腸道抗熱應激能力的措施

熱應激是一種非特異性應激，可以從動物整體水平上緩解其帶來的損傷，如加強畜舍的通風散熱。此外，熱應激對腸道組織的損傷主要是由氧化應激引起的，因此保護和改善熱應激給腸道帶來的傷害還應從抗氧化方面入手，并針對腸道在熱應激過程中發(fā)生的炎癥反應及時給予抗炎藥物。

常見的抗氧化劑包括硒、維生素C以及中藥成分黃芪多糖等。Liu等[37]通過試驗證明硒和維生素C可以緩解熱應激給豬帶來的不良影響，保護腸道屏障的完整性。我國學者研究具有抗氧化作用的中藥復方制劑，如加減白虎湯，可以有效的減輕熱應激對奶牛的損傷，促進牛體散熱[38]。?；撬?taurine)具有抗氧化、抗凋亡等多種生物學功能，可以緩解氧化應激對腸黏膜造成的損傷和抑制腸上皮細胞的凋亡[39]。益生菌對于腸道的健康往往起到很重要的作用，如飼喂益生菌混合物可以有效的緩解熱應激造成的腸道屏障功能損傷[40]；額外補充乳酸菌菌株的混合物可以提高熱應激狀態(tài)下肉雞的生產(chǎn)性能[41]。

5 小 結(jié)

綜合近年來熱應激對動物腸道影響的研究可知，腸道組織易遭受到熱應激的損傷。尤其當動物長時間處于高溫環(huán)境而得不到改善時，動物腸道黏膜的完整性遭到破壞，腸道細胞發(fā)生氧化應激并出現(xiàn)大量凋亡。當前國內(nèi)外研究中多關(guān)注氧化應激對哺乳動物小腸上皮細胞的損傷和凋亡，且研究較多的是死亡受體和線粒體凋亡途徑，而禽類在這方面的研究較少。今后的研究應注重熱應激引起的細胞凋亡途徑之間的關(guān)系，以及如何提高腸道抗熱應激的能力。熱應激導致動物不能正常地吸收營養(yǎng)物質(zhì)，使病原體易侵入機體，最終導致動物生長發(fā)育遲緩，嚴重的則因感染病原體而死亡。這提示我們預防熱應激發(fā)生在動物生產(chǎn)中的重要性。加強炎熱地區(qū)畜舍的通風降溫可以有效的緩解熱應激帶來的損失，積極探討熱應激對腸道組織損傷的機制，尋找改善和提高腸道組織抵抗熱應激能力的方法是解決問題的關(guān)鍵。

[1] CAULFIELD M P,CAMBRIDGE H,FOSTER S F,et al.Heat stress:a major contributor to poor animal welfare associated with long-haul live export voyages[J].Veterinary Journal,2014,199(2):223-228.

[2] 咼于明,劉丹,張炳坤.家禽腸道屏障功能及其營養(yǎng)調(diào)控[J].動物營養(yǎng)學報,2014,26(10):3091-3100.

[3] 王松波,鄧琳,趙婕,等.熱應激對肉雞抗氧化能力及腓腸肌纖維類型的影響[J].華南農(nóng)業(yè)大學學報,2015,36(6):23-28.

[4] 胡煜,蔡明成,王玲,等.熱應激狀態(tài)下牛血清生化指標、miRNA表達變化及其相關(guān)性分析[J].畜牧獸醫(yī)學報,2016,47(9):1840-1847.

[5] 徐霄龍,余進,劉濤,等.高溫誘導氧化應激對大鼠小腸上皮細胞凋亡損傷的機制研究[C]//中國畜牧獸醫(yī)學會中獸醫(yī)學分會2013年學術(shù)年會論文集.哈爾濱:中國畜牧獸醫(yī)學會,2013:361-375.

[6] KIKUSATO M,YOSHIDA H,FURUKAWA K,et al.Effect of heat stress-induced production of mitochondrial reactive oxygen species on NADPH oxidase and heme oxygenase-1 mRNA levels in avian muscle cells[J].Journal of Thermal Biology,2015,52:8-13.

[7] 趙珂立.氧化應激對動物自由基代謝、消化道損傷及抗氧化劑干預作用的研究[D].碩士學位論文.上海:上海交通大學,2011:23-26.

[8] HUANG C,JIAO H,SONG Z,et al.Heat stress impairs mitochondria functions and induces oxidative injury in broiler chickens[J].Journal of Animal Science,2015,93(5):2144-2153.

[9] FRIJHOFF J,WINYARD P G,ZARKOVIC N,et al.Clinical relevance of biomarkers of oxidative stress[J].Antioxidants & Redox Signaling,2015,23(14):1144-1170.

[10] CHEN Z,XIE J,HU M Y,et al.Protective effects of γ-aminobutyric acid (GABA) on the small intestinal mucosa in heat-stressed Wenchang chicken[J].The Journal of Animal & Plant Sciences,2015,25(1):78-87.

[11] SANTOS R R,AWATI A,ROUBOS-VAN DEN HIL P J,et al.Quantitative histo-morphometric analysis of heat-stress-related damage in the small intestines of broiler chickens[J].Avian Pathology,2015,44(1):19-22.

[12] 卜星晨,鄒曉庭,田勇.熱應激對動物小腸黏膜影響的研究進展[J].中國畜牧雜志,2016,52(5):88-91.

[13] 馮躍進.熱應激對豬和大鼠腸道結(jié)構(gòu)和功能的影響及其修復機制[D].碩士學位論文.北京:中國農(nóng)業(yè)科學院,2014:35-42.

[14] PEARCE S C,SANZ-FERNANDEZ M V,HOLLIS J H,et al.Short-term exposure to heat stress attenuates appetite and intestinal integrity in growing pigs[J].Journal of Animal Science,2014,92(12):5444-5454.

[15] NUNES T,BERNARDAZZI C,DE SOUZA H S.Cell death and inflammatory bowel diseases:apoptosis,necrosis,and autophagy in the intestinal epithelium[J].Biomed Research International,2014,2014:218493.

[16] 劉淑杰,徐子偉,齊珂珂,等.表皮生長因子對腸道功能調(diào)控的研究[J].動物營養(yǎng)學報,2014,26(3):565-570.

[17] LIU F,YIN J,DU M,et al.Heat-stress-induced damage to porcine small intestinal epithelium associated with downregulation of epithelial growth factor signaling[J].Journal of Animal Science,2009,87(6):1941-1949.

[18] QUINTEIRO-FILHO W M,RODRIGUES M V,RIBEIRO A,et al.Acute heat stress impairs performance parameters and induces mild intestinal enteritis in broiler chickens:role of acute hypothalamic-pituitary-adrenal axis activation[J].Journal of Animal Science,2012,90(6):1986-1994.

[19] 何莎莎.阿魏酸對熱應激大鼠小腸黏膜屏障損傷的保護作用及機制[D].博士學位論文.北京:中國農(nóng)業(yè)大學,2016:38-41.

[20] PEARCE S C,MANI V,BODDICKER R L,et al.Heat stress reduces barrier function and alters intestinal metabolism in growing pigs[J].Journal of Animal Science,2012,90(Suppl.4):257-259.

[21] 冉茂良,高環(huán),尹杰,等.氧化應激與DNA損傷[J].動物營養(yǎng)學報,2013,25(10):2238-2245.

[22] 唐麗.熱應激對肉種母雞繁殖性能、相關(guān)生理生化和分子指標的影響[D].碩士學位論文.北京:中國農(nóng)業(yè)科學院,2013:16-19.

[23] CUI Y J,GU X H.Proteomic changes of the porcine small intestine in response to chronic heat stress[J].Journal of Molecular Endocrinology,2015,55(3):277-293.

[24] 王佳煜.n-3脂肪酸對氧化應激誘導的細胞凋亡的作用及其分子機制[D].碩士學位論文.哈爾濱:哈爾濱工業(yè)大學,2015:8-12.

[25] BONOMINI F,RODELLA L F,REZZANI R.Metabolic syndrome,aging and involvement of oxidative stress[J].Aging and Disease,2015,6(2):109-120.

[26] XU L,HE S S,LI D Y,et al.Hydrogen peroxide induces oxidative stress and the mitochondrial pathway of apoptosis in RAT intestinal epithelial cells (IEC-6)[J].Molecular Biology,2016,50(2):270-277.

[27] 賈丹,昝君蘭,趙宏,等.熱應激對豬小腸組織形態(tài)和細胞凋亡的影響[J].北京農(nóng)學院學報,2012,27(1):36-38.

[28] 曾琳琳.死亡受體6誘導細胞凋亡的分子機制[D].博士學位論文.長春:吉林大學,2012:18-26.

[29] THORBURN A.Death receptor-induced cell killing[J].Cellular Signalling,2004,16(2):139-144.

[30] GUO X T,CHI S K,CONG X,et al.Baicalin protects sertoli cells from heat stress-induced apoptosis via activation of the Fas/FasL pathway and Hsp72 expression[J].Reproductive Toxicology,2015,57:196-203.

[31] YANG J,ZONG X,WU G,et al.Taurine increases testicular function in aged rats by inhibiting oxidative stress and apoptosis[J].Amino Acids,2015,47(8):1549-1558.

[32] SOVOLYOVA N,HEALY S,SAMALI A,et al.Stressed to death-mechanisms of ER stress-induced cell death[J].Biological Chemistry,2014,395(1):1-13.

[33] SANO R,REED J C.ER stress-induced cell death mechanisms[J].Biochimica et Biophysica Acta：Molecular Cell Research,2013,1833(12):3460-3470.

[34] MOORWOOD C,BARTON E R.Caspase-12 ablation preserves muscle function in the mdx mouse[J].Human Molecular Genetics,2014,23(20):5325-5341.

[35] SZEGEZDI E,FITZGERALD U,SAMALI A.Caspase-12 and ER-stress-mediated apoptosis:the story so far[J].Annals of the New York Academy of Sciences,2003,1010:186-194.

[36] YIN P,XU J Q,HE S S,et al.Endoplasmic reticulum stress in heat-and shake-induced injury in the rat small intestine[J].PLoS One,2015,10(12):e0143922.

[37] LIU F,COTTRELL J J,FURNESS J B,et al.Selenium and vitamin E together improve intestinal epithelial barrier function and alleviate oxidative stress in heat-stressed pigs[J].Experimental Physiology,2016,101(7):801-810.

[38] 鄭會超.加減白虎湯散劑緩解奶牛熱應激的效果及其機理研究[D].博士學位論文.杭州:浙江大學,2013:53-56.

[39] SUKHOTNIK I,ARANOVICH I,SHAHAR Y B,et al.Effect of taurine on intestinal recovery following intestinal ischemia-reperfusion injury in a rat[J].Pediatric Surgery International,2016,32(2):161-168.

[40] SONG J,XIAO K,KE Y L,et al.Effect of a probiotic mixture on intestinal microflora,morphology,and barrier integrity of broilers subjected to heat stress[J].Poultry Science,2014,93(3):581-588.

[41] JAHROMI M F,ALTAHER Y W,SHOKRYAZDAN P,et al.Dietary supplementation of a mixture ofLactobacillusstrains enhances performance of broiler chickens raised under heat stress conditions[J].International Journal of Biometeorology,2016,60(7):1099-1110.

*Corresponding author, associate professor, E-mail: lqf200866@126.com

(責任編輯 王智航)

Oxidative Stress Induced by Heat Stress: Injury on Intestinal Tissue of Animals

HUANG Fan LYU Qiufeng*

(CollegeofVeterinaryandAnimalScience,ShenyangAgriculturalUniversity,Shenyang110866,China)

Heat stress is a kind of common nonspecific stress, which brings great loss to animal husbandry. Intestinal tissue under heat stress is prone to ischemia and hypoxia, which induces oxidative stress in intestinal cells, causing cell apoptosis and intestinal tissue damage. While the intestine is the most important organ to absorb nutrients and defense pathogens in animal body, which can directly affect animal growth and health when injured. Combining with the domestic and international researches in recent years, this article reviewed the oxidative stress induced by intestinal heat stress, the damages of oxidative stress to the intestine tissue, and apoptosis pathway induced by heat stress.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2017, 29(6)：1856-1860]

intestine; heat stress; oxidative stress; apoptosis

10.3969/j.issn.1006-267x.2017.06.005

2016-12-05

黃 帆(1990—)，男，河北定州人，碩士研究生，從事動物生理研究。E-mail： 503871885@qq.com

*通信作者：呂秋鳳，副教授，碩士生導師，E-mail： lqf200866@126.com

S852.2

A

1006-267X(2017)06-1856-05