加強(qiáng)生活飲用水中微生物檢測(cè)質(zhì)量控制的六大要素

摘 要：《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB5749-2006）中規(guī)定生活飲用水中菌落總數(shù)的限值僅為100CFU/mL，而總大腸菌群和耐熱大腸菌群的限值更是局限至不得檢出。[1]故此，為保證檢測(cè)結(jié)果的合理可信，需要對(duì)人、機(jī)、料、法、環(huán)、測(cè)六大要素進(jìn)行質(zhì)量控制?！渡铒嬘盟畼?biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》（GB/T 5750-2006）僅羅列了水中微生物的檢測(cè)原理、檢測(cè)步驟和結(jié)果報(bào)告方式，并未提及具體的質(zhì)控手段，本文作者借助十多年來生活飲用水中微生物的檢測(cè)經(jīng)歷，結(jié)合行業(yè)主管部門的指導(dǎo)意見及同行之間的交流經(jīng)驗(yàn)，總結(jié)出了關(guān)于加強(qiáng)生活飲用水中微生物檢測(cè)質(zhì)量控制的六大要素關(guān)鍵內(nèi)容，為提升生活飲用水中微生物的檢測(cè)水平奠定了理論基礎(chǔ)，可作為生活飲用水中微生物新進(jìn)人員的培訓(xùn)資料或操作規(guī)范。

關(guān)鍵詞：生活飲用水中微生物；六大要素；質(zhì)量控制

引言

《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》（GB/T 5750-2006）涉及生活飲用水中微生物的項(xiàng)目包括菌落總數(shù)、總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希氏菌、隱孢子蟲和賈第鞭毛蟲。[2]其中隱孢子蟲和賈第鞭毛蟲未要求在無菌室內(nèi)操作，且質(zhì)控手段（加標(biāo)回收）相對(duì)單一，故本文著重對(duì)菌落總數(shù)、總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希氏菌檢測(cè)過程中的質(zhì)量控制手段進(jìn)行闡述。

菌落總數(shù)的檢測(cè)方法為平皿計(jì)數(shù)法，方法原理簡單易懂，檢測(cè)步驟快捷方便，但對(duì)檢測(cè)環(huán)境和人員手勢(shì)要求較苛刻；總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希氏菌有多種方法可選，分別為濾膜法和多管發(fā)酵法，其中總大腸菌群還可用酶底物法進(jìn)行檢測(cè)。這三個(gè)項(xiàng)目剛好與菌落總數(shù)相反，它們的方法原理相對(duì)晦澀，且檢測(cè)步驟繁瑣復(fù)雜，不過對(duì)檢測(cè)環(huán)境和人員手勢(shì)的要求反倒沒菌落總數(shù)要求那么苛刻。

為了更直觀的理解方法和更快捷的完成檢測(cè)過程，同時(shí)為了保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，本文將就以下六大要素關(guān)鍵內(nèi)容進(jìn)行逐一分析：

1 確保人員能力符合CMA和CNAS要求

《檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定評(píng)審準(zhǔn)則》（簡稱CMA）中規(guī)定檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)對(duì)所有從事抽樣、檢驗(yàn)檢測(cè)、簽發(fā)檢驗(yàn)檢測(cè)報(bào)告以及操作設(shè)備等工作的人員，應(yīng)具有相應(yīng)的教育、培訓(xùn)、經(jīng)驗(yàn)和/或可證明的技能，并確保以上人員勝任工作且受到監(jiān)督，能夠按照檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)管理體系要求工作，應(yīng)規(guī)定對(duì)檢驗(yàn)檢測(cè)質(zhì)量有影響的所有管理、操作和核查人員的職責(zé)、權(quán)力和相互關(guān)系，必要時(shí)，指定關(guān)鍵管理人員的代理人。[3]

而《檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則》（簡稱CNAS）更是明確規(guī)定了實(shí)驗(yàn)室技術(shù)管理者中應(yīng)至少包括一名在申請(qǐng)認(rèn)可或已獲認(rèn)可的微生物檢測(cè)范圍內(nèi)具有微生物專業(yè)或與微生物密切相關(guān)的本科以上學(xué)歷和三年以上微生物檢測(cè)的工作經(jīng)歷的成員，由他/她負(fù)責(zé)指導(dǎo)或培訓(xùn)檢驗(yàn)人員常規(guī)微生物實(shí)驗(yàn)；實(shí)驗(yàn)室應(yīng)指定生物安全責(zé)任人和生物安全監(jiān)督員，從事微生物檢測(cè)的關(guān)鍵檢測(cè)人員應(yīng)至少具有微生物或相關(guān)專業(yè)?？埔陨系膶W(xué)歷，或者具有10年以上微生物檢測(cè)工作經(jīng)歷，授權(quán)簽字人應(yīng)具有相關(guān)專業(yè)本科以上學(xué)歷，并具有3年以上相關(guān)技術(shù)工作經(jīng)歷，如果不具備上述條件，應(yīng)具有相關(guān)專業(yè)專科以上的學(xué)歷和至少10年的微生物相關(guān)領(lǐng)域檢測(cè)工作經(jīng)歷。[4]

以上兩個(gè)準(zhǔn)則的要求說明生活飲用水中微生物檢測(cè)的質(zhì)量控制首先要從人開始抓起，要確保從事微生物檢測(cè)或數(shù)據(jù)把關(guān)的人滿足相應(yīng)的條件，具備相應(yīng)的資格。有些實(shí)驗(yàn)室重理化輕微生物，經(jīng)常讓一人分飾多角，兼顧理化和微生物項(xiàng)目，實(shí)際上，這樣做違背了相關(guān)準(zhǔn)則的要求，必須專業(yè)對(duì)口或經(jīng)驗(yàn)豐富，并確保不斷通過培訓(xùn)和考核維系相關(guān)的檢測(cè)能力。

2 確保儀器設(shè)備符合準(zhǔn)則和方法要求

CMA中規(guī)定實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備能正確進(jìn)行檢驗(yàn)檢測(cè)（包括抽樣、樣品制備、數(shù)據(jù)處理與分析）所需的并且能夠獨(dú)立調(diào)配使用的固定、臨時(shí)和可移動(dòng)的抽樣、測(cè)量和檢測(cè)設(shè)備（包括軟件），以上設(shè)備需進(jìn)行校準(zhǔn)或檢定，當(dāng)校準(zhǔn)產(chǎn)生了一組修正因子時(shí)，應(yīng)確保其得到正確應(yīng)用。[3]

CNAS中規(guī)定實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備滿足檢測(cè)要求的儀器設(shè)備，如培養(yǎng)箱、水浴鍋、冰箱、均質(zhì)器、顯微鏡等，其中培養(yǎng)箱的配置應(yīng)考慮到用途、控溫范圍、控制精度和數(shù)量的要求。如果溫度直接影響分析結(jié)果或?qū)υO(shè)備的正確性能來說是至關(guān)重要的，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)監(jiān)控這類設(shè)備的運(yùn)行溫度，并保存記錄，保證校準(zhǔn)/檢定設(shè)備的修正因子/誤差得到及時(shí)更新和正確使用。[4]

《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》（GB/T 5750-2006）中微生物檢測(cè)過程中需要使用高壓滅菌器、電熱干燥箱、電熱恒溫培養(yǎng)箱、隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱、顯微鏡、天平、離心機(jī)、冰箱、水浴鍋等儀器設(shè)備，對(duì)溫度、精密度和重現(xiàn)性要求較苛刻，尤其是溫控類的設(shè)備，有些方法要求溫度偏差不能超過±1℃，對(duì)儀器性能的要求較高。

結(jié)合準(zhǔn)則和方法要求，生活飲用水中微生物檢測(cè)的質(zhì)量控制其次要從儀器設(shè)備入手，要確保相關(guān)儀器設(shè)備的性能通過檢定或校準(zhǔn)滿足準(zhǔn)則和方法要求，并確保在使用過程中有進(jìn)行監(jiān)控、記錄并修正。尤其是培養(yǎng)箱和冰箱，溫度要求極高，若恒溫達(dá)不到方法要求，勢(shì)必影響檢測(cè)過程，檢測(cè)結(jié)果也會(huì)因此而變得可疑。

3確保培養(yǎng)基、濾膜等供應(yīng)品符合方法要求

CNAS中規(guī)定實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立和保持有效的適合試驗(yàn)范圍的培養(yǎng)基（試劑）驗(yàn)收程序，對(duì)于關(guān)鍵培養(yǎng)基和試劑，要求進(jìn)行技術(shù)性驗(yàn)收。實(shí)驗(yàn)室采用濾膜法進(jìn)行總大腸菌群、耐熱大腸菌群以及大腸埃希氏菌的檢測(cè)時(shí)，需對(duì)濾膜的濾效進(jìn)行驗(yàn)證。[4]

針對(duì)以上規(guī)定，生活飲用水中微生物檢測(cè)的質(zhì)量控制還要考慮供應(yīng)品的有效性，要確保關(guān)鍵培養(yǎng)基或試劑符合使用要求，可用標(biāo)準(zhǔn)菌株對(duì)每批培養(yǎng)基進(jìn)行測(cè)試驗(yàn)收，也可用人工污染水樣進(jìn)行檢測(cè)，更好的驗(yàn)證培養(yǎng)基的適用性。最好做一下全過程無菌測(cè)試和有菌培養(yǎng)，這樣能確保培養(yǎng)效果。濾膜的驗(yàn)收可通過無菌和有菌切換模式及平行檢測(cè)進(jìn)行，確保過濾效果符合方法要求。

4確保檢測(cè)方法行之有效符合客戶要求

CMA中規(guī)定實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按照相關(guān)技術(shù)規(guī)范或者標(biāo)準(zhǔn)，使用適合的方法和程序?qū)嵤z驗(yàn)檢測(cè)活動(dòng)。應(yīng)按國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、地方標(biāo)準(zhǔn)、國際標(biāo)準(zhǔn)、國外先進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)的次序進(jìn)行方法選擇，并定期確認(rèn)能否正確使用所選用的新方法，如果方法發(fā)生了變化，要重新進(jìn)行確認(rèn)，檢測(cè)方法的偏離須經(jīng)確認(rèn)，并將該方法偏離進(jìn)行文件規(guī)定，同時(shí)需經(jīng)客戶書面同意。[3]

CNAS中規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)方法在引入檢測(cè)之前，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)證實(shí)能夠正確地運(yùn)用這些方法。當(dāng)有幾種方法可供選擇，或標(biāo)準(zhǔn)化方法提供多種可選程序時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有相應(yīng)的選擇規(guī)定。[4]

以上規(guī)定表明，檢測(cè)方法要定期進(jìn)行查新，如發(fā)現(xiàn)方法變化，要進(jìn)行方法變更或方法偏離驗(yàn)證，總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希氏菌均有多種方法可供選擇，建議在選擇時(shí)充分考慮檢測(cè)時(shí)間和樣品類型的局限性。若水質(zhì)比較好，檢測(cè)時(shí)間緊迫，可采用簡單直接的濾膜法；或水質(zhì)較差，檢測(cè)時(shí)間充分，最好采用準(zhǔn)確度較高更合理可信的多管發(fā)酵法。

5確保檢測(cè)設(shè)施和環(huán)境符合準(zhǔn)則和方法要求

CMA中規(guī)定檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)的檢驗(yàn)檢測(cè)設(shè)施以及環(huán)境條件應(yīng)滿足相關(guān)技術(shù)規(guī)范或標(biāo)準(zhǔn)的要求，當(dāng)設(shè)施和環(huán)境條件對(duì)結(jié)果的質(zhì)量有影響時(shí)，機(jī)構(gòu)需監(jiān)測(cè)、控制和記錄環(huán)境條件，區(qū)域間的工作相互之間有不利影響時(shí)，應(yīng)采取有效的隔離措施，對(duì)影響工作質(zhì)量和涉及安全的區(qū)域和設(shè)施應(yīng)有效控制并正確標(biāo)識(shí)。[3]

CNAS中規(guī)定實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)、總體布局和設(shè)施應(yīng)能滿足從事檢驗(yàn)工作的需要，并以能獲得可靠的檢測(cè)結(jié)果為重要依據(jù)，且符合所開展微生物檢測(cè)活動(dòng)生物安全等級(jí)的要求。實(shí)驗(yàn)室總體布局應(yīng)減少和避免潛在的污染和生物危害，與辦公室或其它生產(chǎn)區(qū)要有效隔離，應(yīng)配備滿足要求的生物安全柜，適用時(shí)，應(yīng)限定在某個(gè)工作區(qū)域?qū)ｉT使用的物品如防護(hù)服、移液器、離心管等，應(yīng)識(shí)別出可能存在的危險(xiǎn)因子并有妥善處理廢棄樣品和廢棄物的設(shè)施和制度。[4]

從以上規(guī)定可以看出，檢測(cè)設(shè)施和環(huán)境與生活飲用水中微生物檢測(cè)的質(zhì)量控制息息相關(guān)，有些實(shí)驗(yàn)室場地有限，無菌室操作間未嚴(yán)格按照“單方向工作流程”原則進(jìn)行建設(shè)，存在潛在的交叉污染，甚至有些還將一些雜物堆放在無菌室內(nèi)，傳遞箱也長期敞開，通風(fēng)系統(tǒng)長期不進(jìn)行維護(hù)清理，一次性手套、鞋套和帽子重復(fù)使用，防護(hù)服未按限制區(qū)域進(jìn)行使用，準(zhǔn)備室未合理布局，滅菌器、培養(yǎng)箱、生物安全柜、冰箱等無菌要求高的設(shè)備與帶菌設(shè)備未分開放置，已滅菌待用的培養(yǎng)基、瓶皿與未滅菌已用的物品未分開存放。這些隨意的行為帶來了極大的染菌機(jī)率，要想保證檢測(cè)結(jié)果的合理準(zhǔn)確，必須注重每一個(gè)步驟的無菌處理或操作。可通過沉降菌試驗(yàn)和全過程無菌試驗(yàn)來驗(yàn)證檢測(cè)環(huán)境和設(shè)施是否符合要求，如果設(shè)施和環(huán)境不滿足準(zhǔn)則或方法要求，必須重建或者改善。如果人員無菌操作意識(shí)不夠，必須重新培訓(xùn)并加強(qiáng)監(jiān)督，直到檢測(cè)設(shè)施和環(huán)境確保滿足準(zhǔn)則和方法要求為止。

6確保檢測(cè)過程符合質(zhì)控計(jì)劃和質(zhì)量監(jiān)督要求

CMA中規(guī)定實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有質(zhì)量控制程序和質(zhì)量控制計(jì)劃，以監(jiān)控檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，內(nèi)部質(zhì)量監(jiān)控可采用人員比對(duì)、方法比對(duì)、儀器比對(duì)、空白試驗(yàn)、平行樣試驗(yàn)、加標(biāo)回收試驗(yàn)、留樣再測(cè)等方式去驗(yàn)證檢測(cè)過程，還可參加實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)或?qū)嶒?yàn)室間平行試驗(yàn)或權(quán)威實(shí)驗(yàn)室的確證試驗(yàn)以及權(quán)威機(jī)構(gòu)開展的實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證。[3]

CNAS中規(guī)定針對(duì)微生物定量檢測(cè)項(xiàng)目，應(yīng)定期使用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品（如菌落總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、大腸菌群標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)等）進(jìn)行監(jiān)控，或使用質(zhì)控樣品開展內(nèi)部質(zhì)量控制活動(dòng)。針對(duì)微生物定性檢測(cè)項(xiàng)目，需定期使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品、質(zhì)控樣品或標(biāo)準(zhǔn)菌種人工污染的樣品開展內(nèi)部質(zhì)量控制。[4]

為確保檢測(cè)能夠順利完成，必須加入多種質(zhì)控手段以保證檢測(cè)結(jié)果的合理可信，做菌落總數(shù)檢測(cè)時(shí)必須帶入空白試驗(yàn)以及平行樣試驗(yàn)，可安排不同的檢測(cè)人員對(duì)同一樣品進(jìn)行人員比對(duì)檢測(cè)，也可同一檢測(cè)人員使用不同方法對(duì)同一樣品進(jìn)行方法比對(duì)，或檢測(cè)完后一式兩份放入不同培養(yǎng)箱培養(yǎng)進(jìn)行儀器比對(duì)。對(duì)定性類的項(xiàng)目，每次檢測(cè)都接種標(biāo)準(zhǔn)菌種進(jìn)行同步分析，對(duì)定量類的項(xiàng)目，可通過檢測(cè)愛德士或環(huán)凱的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)提升自身的技術(shù)水平，還可通過參加實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)或能力驗(yàn)證活動(dòng)來驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室微生物的檢測(cè)能力。

總結(jié)

總之，在生活飲用水微生物檢測(cè)過程中，需對(duì)人、機(jī)、料、法、環(huán)、測(cè)六大要素進(jìn)行質(zhì)量控制，只要這六大要素在檢測(cè)過程中得到了極大重視和有力控制，檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性就得到了有力保障，檢測(cè)結(jié)果的出具才會(huì)合理可信。

參考文獻(xiàn)

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB5749-2006生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2007.

[2] 中華人民共和國衛(wèi)生部，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB/T5750-2006生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2007.

[3] 中國認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)督管理委員會(huì).檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定評(píng)審準(zhǔn)則[S].

[4] 中國合格評(píng)定國家認(rèn)可委員會(huì).CNAS-CL09檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物檢測(cè)領(lǐng)域的應(yīng)用說明[S].

作者簡介：楊育兵，男，籍貫梅州，從事微生物檢測(cè)已有十多年，已取得水處理與水分析工程師和化學(xué)檢驗(yàn)高級(jí)技師證書。