黑果枸杞與紅果枸杞氨基酸含量的差異性研究

楊春霞

（寧夏農(nóng)林科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)監(jiān)中心，寧夏銀川750002）

黑果枸杞與紅果枸杞氨基酸含量的差異性研究

楊春霞

（寧夏農(nóng)林科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)監(jiān)中心，寧夏銀川750002）

以紅果枸杞為原料，黑果枸杞為對(duì)照，采用全自動(dòng)氨基酸分析儀對(duì)兩種枸杞中17種蛋白水解氨基酸含量分析測(cè)定，進(jìn)行兩種枸杞中氨基酸含量差異性分析。結(jié)果表明：黑果枸杞和紅果枸杞中氨基酸含量有顯著性差異。黑果枸杞中17種氨基酸總量為11.42%～12.10%，以天冬氨酸、谷氨酸和精氨酸含量最高，其中必需氨基酸占氨基酸總量的29.6%～29.9%，半必需氨基酸占氨基酸總量的3.7%～4.8%。紅果枸杞中氨基酸總量為7.416%～8.744%，以天冬氨酸和谷氨酸含量最高，必需氨基酸占總氨基酸含量的28.3%～28.9%，半必需氨基酸約占總量的2.8%～3.3%。

黑果枸杞；紅果枸杞；氨基酸；含量

寧夏枸杞作為我國(guó)傳統(tǒng)的名貴中藥材之一，不僅具有治病療疾的重要作用，而且還有預(yù)防保健的特殊功效，廣泛用于醫(yī)藥、食療、養(yǎng)生、保健領(lǐng)域，是保健養(yǎng)生和治病療疾的必不可少的大眾常用中藥材品種之一。黑果枸杞為茄科枸杞屬植物，果實(shí)黑色，是近年來(lái)新發(fā)掘的多年生耐鹽、抗旱野生枸杞資源，分布于寧夏、新疆、西藏、青海、內(nèi)蒙、甘肅等地，其味甘、性平，含有蛋白質(zhì)、脂肪、糖類(lèi)、游離氨基酸、有機(jī)酸、礦物質(zhì)、微量元素、生物堿、維生素C、B1、B2等各種營(yíng)養(yǎng)成分，與紅枸杞相比，其維生素、礦物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)成分含量更豐富，尤其含具有清除自由基、抗氧化功能的天然的花色苷素，藥用、保健價(jià)值遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于普通紅枸杞，被譽(yù)為“軟黃金”[1]。氨基酸是枸杞果實(shí)中主要的營(yíng)養(yǎng)及藥用功效成分，其含量是評(píng)價(jià)食品和中藥材品質(zhì)的一項(xiàng)重要指標(biāo)。黑果枸杞中含有多種氨基酸，其中以天門(mén)冬氨基酸、谷氨酸、丙氨酸和脯氨酸的含量較高，而且多數(shù)呈游離狀態(tài)。游離氨基酸約占氨基酸總量的50%[2]。

高向東[3]進(jìn)行了寧杞1號(hào)和大麻葉枸杞鮮果、干果中氨基酸含量的比較分析，干鮮果中氨基酸含量均比較高。文獻(xiàn)[4-5]報(bào)道了不同等級(jí)寧夏枸杞、枸杞、北方枸杞果實(shí)中氨基酸含量，表明了不同樣品均含多種氨基酸，種類(lèi)大體相同，含量有差異，并首次發(fā)現(xiàn)枸杞果實(shí)中含有?；撬峒唉?氨基丁酸。文獻(xiàn)[6-7]報(bào)道了不同地區(qū)枸杞中游離氨基酸的含量，在氨基酸種類(lèi)上，寧夏枸杞明顯優(yōu)于其它產(chǎn)地。游離氨基酸較低。筆者[8]曾采用柱后衍生法測(cè)定了寧夏枸杞及枸杞花粉中17種氨基酸含量，建立了枸杞中氨基酸分析的新方法，為進(jìn)一步了解氨基酸組成與含量，枸杞子入藥及其優(yōu)劣的鑒別提供依據(jù)。近年來(lái)，已有研究者[9-11]對(duì)不同品種枸杞的氨基酸含量做了分析，結(jié)果表明不同品種枸杞中氨基酸含量存在顯著差異性。目前，也有相關(guān)文獻(xiàn)[12]對(duì)黑果枸杞主要營(yíng)養(yǎng)成分進(jìn)行了分析，主要研究了17種氨基酸含量，黑枸杞中以亮氨酸最高，賴氨酸、甘氨酸、半胱氨酸含量較少。

本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)寧夏種植的黑果枸杞及紅果枸杞中17種蛋白水解氨基酸含量分析測(cè)定，比較兩種枸杞間氨基酸含量的差異性，為黑果枸杞的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和利用提供參考。同時(shí)為黑果枸杞新品種的繁育及營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的評(píng)價(jià)提供切實(shí)的理論依據(jù)。

1 材料

1.1 材料與試劑

黑果枸杞和紅果枸杞樣品：均采摘于寧夏銀川園林場(chǎng)；二水合檸檬酸三鈉、檸檬酸、氫氧化鈉（優(yōu)級(jí)純）、甲醇（色譜純）、37%鹽酸（優(yōu)級(jí)純）、硼酸、苯酚（優(yōu)級(jí)純）、EDTA、溴化氫、過(guò)氧化氫、茚三酮：以上試劑均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)上海試劑公司；1∶1鹽酸溶液；純度為99.99%以上的液氮。

1.2 儀器

S-433D全自動(dòng)氨基酸分析（含S5200全自動(dòng)進(jìn)樣器、S4300反應(yīng)模塊、S2100梯度泵）：德國(guó)Sykam公司；凱氏定氮儀：上海申立玻璃儀器有限公司；恒溫干燥箱：上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；TVE-1000試管濃縮儀：上?？蠌?qiáng)實(shí)業(yè)有限公司；GM 0.33A無(wú)油真空泵：上海楚柏實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司；Mill-Q超純水機(jī)：美國(guó)密理博公司。

2 方法

2.1 溶液的配制

不同pH和離子強(qiáng)度的流動(dòng)相及茚三酮溶液均按儀器說(shuō)明書(shū)配制。樣品稀釋液，pH 2.2，Na+濃度為0.12mol/L：取檸檬三鈉11.8 g、苯酚2.0 g和檸檬酸6.0 g，溶于500mL水中，加入辛酸0.1mL、鹽酸12mL，最后定容至1 000mL。氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液：含天冬氨酸等17種常規(guī)蛋白水解液分析用氨基酸，各組分濃度為2.5μmol/mL或2.0μmol/mL。氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：吸取一定量的氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液置于25mL容量瓶，用樣品稀釋液定容，混勻，各氨基酸組分濃度為100 nmol/L。除特別注明外，其它試劑均為分析純，水為二次去離子水。

2.2 試驗(yàn)方法

2.2.1 樣品制備

取具有代表性枸杞樣品，在60℃烘箱中烘干、粉碎，裝入密閉容器中與干燥器中備用。

2.2.2 樣品粗蛋白含量的測(cè)定

按GB 5009.5-2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定》，采用凱氏定氮法測(cè)定枸杞樣品中粗蛋白含量[10]。

2.2.3 樣品水解

準(zhǔn)確稱取一定量枸杞樣品于20mL冷凍安培管中，加入10mL 6mol/LHCl+0.1%苯酚溶液，置于液氮中冷凍，待液體完全凝固后抽真空至≤7 Pa后封管。將封好口的安培管放入（110±1）℃恒溫干燥箱中，水解22 h～24 h。冷卻，混勻，開(kāi)管，過(guò)濾，取適量濾液于濃縮儀中，在60℃下抽真空，濃縮至干。加入3mL～5mL樣品稀釋液，使樣品完全溶解，用0.45μm濾膜過(guò)濾后，上機(jī)測(cè)定。

氧化酸水解：準(zhǔn)確稱取一定量樣品于濃縮管中，加入2mL預(yù)冷的過(guò)甲酸溶液，在55℃水浴中反應(yīng)15min，然后取出放入冰水中，再加入0.3mL氫溴酸終止劑。將裝有樣品的濃縮試管置于濃縮儀中，在60℃下抽真空濃縮至干，用15mL 6mol/L酸溶液將殘?jiān)D(zhuǎn)移至厭氧管中，在110℃下水解22 h～24 h。水解后用水將反應(yīng)物定量轉(zhuǎn)移至25mL試管中，定容，搖勻，過(guò)濾備用。

2.2.4 儀器色譜條件

流動(dòng)相：pH 3.45，pH 10.85的緩沖液；色譜柱：LCA K06Na4.6mm×150mm；檢測(cè)器：集成雙波長(zhǎng)光度計(jì)（570、440 nm）；茚三酮試劑流速：0.25mL/min，流動(dòng)相流速：0.45mL/min；柱溫58℃/74℃；分析周期56min。

3 結(jié)果與分析

3.1 樣品中蛋白質(zhì)含量測(cè)定

黑果枸杞中蛋白含量分別為16.8%、17.1%、17.5%，紅果枸杞中蛋白含量為12.4%、13.8%、11.8%。

3.2 蛋白水解液中17種氨基酸的分離測(cè)定

按照氨基酸全自動(dòng)分析儀操作規(guī)程，以氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)工作液為對(duì)照，對(duì)枸杞樣品水解液中17種氨基酸（天冬氨酸Asp、蘇氨酸Thr、絲氨酸Ser、谷氨酸Glu、脯氨酸Pro、甘氨酸Gly、丙氨酸Ala、胱氨酸Cys、纈氨酸Val、蛋氨酸Met、異亮氨酸Ile、亮氨酸Leu、酪氨酸Tyr、苯丙氨酸Phe、組氨酸His、賴氨酸Lys、精氨酸Arg）分析測(cè)定，其中胱氨酸、蛋氨酸采用氧化酸水解測(cè)定。由圖1、圖2可知17種氨基酸在45min內(nèi)依次被洗脫。采用單點(diǎn)校準(zhǔn)，計(jì)算其峰面積和濃度，結(jié)果見(jiàn)表1。

圖1 17種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品色譜分離圖Fig.1 Chromatographic for separation of 17 amino acid standards

圖2 黑果枸杞（a）和紅果枸杞（b）中17種氨基酸色譜分離圖Fig.2 Chromatograms for separation of 17 kinds amino acids in Lycium ruthenicum Murr.（a）and red wolfberry（b）

3.3 黑果和紅果枸杞中氨基酸含量分析

分析測(cè)定了黑果和紅果枸杞中17種氨基酸含量。黑、紅果枸杞中氨基酸含量見(jiàn)表1。

表1 黑、紅果枸杞中氨基酸含量Table1 The contents of amino acids in Lycium ruthenicum Murr. and red wolfberry

由表1可知，黑果枸杞中17種氨基酸總量分別為11.42%、11.81%和12.10%，其中谷氨酸、天冬氨酸和精氨酸的含量較高，分別占氨基酸總量的18.1%～18.5%、14.9%～15.2%、11.6%～11.8%；其它14種氨基酸含量無(wú)顯著性差異，含量在0.063%～0.793%之間。紅果枸杞中總氨基酸含量達(dá)到7.416%～8.744%，天冬氨酸和谷氨酸的含量最高，精氨酸的含量少于黑果枸杞0.5倍之多；其它各氨基酸含量依次為：精氨酸＞丙氨酸＞亮氨酸、脯氨酸＞絲氨酸＞甘氨酸、組氨酸＞蘇氨酸＞纈氨酸＞苯丙氨酸＞異亮氨酸＞賴氨酸＞酪氨酸＞胱氨酸＞蛋氨酸。由分析結(jié)果可知：黑果枸杞氨基酸含量均比紅果枸杞高，兩種枸杞中各氨基酸含量存在顯著差異，主要表現(xiàn)在精氨酸含量上，可能與采摘時(shí)間、氣候條件和果實(shí)成熟度等因素有關(guān)。

3.4 枸杞樣品中氨基酸組成分析

氨基酸分為必需氨基酸、半必需氨基酸和非必需氨基酸。枸杞中含有8種必需氨基酸（Thr、Val、Met、Ile、Leu、Phe、His、Lys）和2種半必需氨基酸（Cys和Tyr）。枸杞樣品中必須氨基酸占總氨基酸的比例見(jiàn)表2。供試樣品中半必須氨基酸占總氨基酸的比例見(jiàn)表3。

表2 枸杞樣品中必須氨基酸占總氨基酸的比例Table2 The proportion of essential amion acids in total amino acid in Lyciumsample %

表3 供試樣品中半必須氨基酸占總氨基酸的比例Table3 The proportion of semi-essential amino acids in total am ion acids in sample %

從表2和表3可知，黑果枸杞中必需氨基酸含量為3.420%～3.585%，以亮氨酸含量最高，約占必須氨基酸的19.2%，占氨基酸總量的5.7%。除蛋氨酸在必需氨基酸中含量最低外，其它6種必需氨基酸含量無(wú)明顯差異。半必需氨基酸中以酪氨酸含量最高，占總氨基酸含量的2.8%；紅果枸杞中必需氨基酸含量為2.140%～2.474%，約占氨基酸總量的28.7%，其中以亮氨酸含量最高賴氨酸含量最低。半必需氨基酸約占總量的3.0%，酪氨酸的含量高于胱氨酸。比較發(fā)現(xiàn)：黑果枸杞和紅果枸杞中必需氨基酸均以亮氨酸含量最高，半必需氨基酸以酪氨酸含量最高。兩種枸杞中必需氨基酸和半必需氨基酸的含量有一定差異性，但氨基酸種類(lèi)齊全，配比合理。

4 結(jié)論

本文對(duì)寧夏產(chǎn)黑果枸杞和紅果枸杞中17種氨基酸含量進(jìn)行分析。黑果枸杞中氨基酸含量豐富，17種氨基酸總量分別為11.42%、11.89%和12.10%，含量明顯高于紅枸杞。各氨基酸含量與紅果枸杞有明顯的差異，其中人體必需氨基酸占氨基酸總量的29.8%。兩類(lèi)枸杞中氨基酸種類(lèi)齊全，配比合理，具有較高的藥用價(jià)值和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。

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Comparative Analysis of Amino Acid Contents in Lycium ruthenicum Murr.and Red Wolfberry

YANG Chun-xia
（Agricultural Product Quality Supervision and Inspection Test Center，Ningxia Academy of Agriculture and Forestry Sciences，Yinchuan 750002，Ningxia，China）

17 amino acid in Lycium ruthenicum Murr. and red wolfberry fruit were analyzed by automatic amino acid analyzer.The results showed that the total amino acids and essential amino and nonessential amino acids from two kinds fruit had obvious differences.Compared with red wolfberryth，the total content of 17 kinds in Lycium ruthenicum Murr. was higher which between 11.42 % and 12.10 %.The essential amino acids accounted for 29.6 %-29.9 % of total amino acids and nonessential amino acids accounted for 3.7 %-4.8 % The highest content of amino acids in the Lycium ruthenicum Murr. were Aspartic acid,Glutamic acid and Arginine.The red wolfberry contained more Aspartic acid and Glutamic acid，which were lower than in the Lycium ruthenicum Murr. The total content was 7.416 %-8.744 % of the red wolfberry. The proportion of essential amino acids in total amino acids was 28.3 %-28.9 %，the semi-essential amino acids accounted for about 2.8 %-3.3 % of total.

Lycium ruthenicum Murr.；red wolfberry；amino acids；content

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.04.008

2016-06-03

楊春霞（1983—），女（漢），助理研究員，碩士，研究方向：農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究。