微柱法結(jié)合鹽水試管法檢測(cè)ABO血型弱抗體

焦芳艷，呂岳峰，尹鐵球，楊麗華

(湖南省第二人民醫(yī)院，1、臨床檢驗(yàn)中心；2、檢驗(yàn)科，湖南長(zhǎng)沙410007)

微柱法結(jié)合鹽水試管法檢測(cè)ABO血型弱抗體

焦芳艷1，呂岳峰1，尹鐵球2，楊麗華1

(湖南省第二人民醫(yī)院，1、臨床檢驗(yàn)中心；2、檢驗(yàn)科，湖南長(zhǎng)沙410007)

目的探討微柱法結(jié)合鹽水凝集試管法在鑒定ABO中血型弱抗體的有效性。方法按照《臨床實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)評(píng)要求》（GB/20032301－T－361）統(tǒng)計(jì)全省室間質(zhì)評(píng)201405批號(hào)的結(jié)果；現(xiàn)場(chǎng)采用微柱凝膠免疫卡法、鹽水試管法及鹽水試管4℃冰箱15min的方法檢測(cè)201405批號(hào)的質(zhì)評(píng)標(biāo)本。結(jié)果2014年ABO血型質(zhì)評(píng)標(biāo)本201405號(hào)，全省質(zhì)評(píng)統(tǒng)計(jì)結(jié)果為試管法檢出率41.2%、微柱凝膠法檢出率36.2%；現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)結(jié)果為微柱法檢出率36.8%、鹽水試管法檢出率60%和鹽水試管法4℃15min檢出率95%。結(jié)論檢測(cè)ABO血型弱抗體采用微柱凝膠法結(jié)合鹽水試管法尤其鹽水試管放入4°C冰箱15min的方法是一種簡(jiǎn)單易行的方法。

ABO血型；弱抗體；試管法；微柱凝膠卡法

ABO血型正確鑒定是臨床安全輸血的關(guān)鍵，在臨床及血站鑒定血型過(guò)程中，弱抗原抗體是導(dǎo)致ABO血型鑒定結(jié)果出現(xiàn)正反定型不符或錯(cuò)誤一個(gè)重要原因。據(jù)有關(guān)報(bào)道自身存在抗原抗體減弱情況約占臨床疑難血型35%以上[1]，臨床多資料[2－6]顯示抗體減弱多常見(jiàn)。目前，微柱凝膠免疫卡廣泛應(yīng)用于臨床，而且據(jù)筆者了解到，普遍認(rèn)為這種方法可以代替鹽水法。然而，據(jù)多資料[1，2，7－9]顯示檢測(cè)ABO弱抗原抗體微柱法有一定的局限性，用微柱凝膠法結(jié)合鹽水試管法結(jié)果更準(zhǔn)確。筆者通過(guò)我省質(zhì)評(píng)資料和現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)用這兩種方法對(duì)ABO血型弱抗體進(jìn)行比較分析如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源201405標(biāo)本由北京金豪制藥有限股份公司提供，B型血漿（＞30秒）抗A(2+)，抗B（－）。

1.2 現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試劑微柱凝膠法均為長(zhǎng)春博訊公司，試管法紅細(xì)胞懸液廠家為上海血液生物醫(yī)藥有限公司（除實(shí)驗(yàn)室5外）。

1.3 方法數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)按照《臨床實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)評(píng)要求》（GB/20032301－T－361）標(biāo)準(zhǔn)?，F(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)采用微柱凝膠免疫卡法、鹽水試管法及鹽水試管4℃冰箱15min的方法檢測(cè)201405號(hào)質(zhì)評(píng)標(biāo)本。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 18.0軟件及科臨易檢統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用百分比表示，不同方法間檢出率的比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2014年全省實(shí)驗(yàn)室對(duì)弱抗體標(biāo)本血型鑒定準(zhǔn)確率情況2014年第一次血型質(zhì)評(píng)，其中201405批號(hào)標(biāo)本采用了抗A弱凝集抗體（B型血漿），來(lái)初步了解全省對(duì)弱抗體血型鑒定的情況。通過(guò)統(tǒng)計(jì)，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 全省實(shí)驗(yàn)室對(duì)弱抗體血型鑒定準(zhǔn)確率統(tǒng)計(jì)

從表1看出，此批號(hào)標(biāo)本全省實(shí)驗(yàn)室的符合率36.7%，誤判成AB型占63%。

2.2 血型鑒定方法結(jié)果統(tǒng)計(jì)全省實(shí)驗(yàn)室采用試管法和微柱法兩種方法的檢測(cè)數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。

表2 全省實(shí)驗(yàn)室血型鑒定不同的方法結(jié)果統(tǒng)計(jì)

結(jié)果顯示，微柱凝膠卡結(jié)果符合率36.2%、鹽水試管法結(jié)果符合率41.2%，后者稍高于前者。

2.3 20家醫(yī)院對(duì)同一標(biāo)本現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)鑒于以上情況，本室采用質(zhì)評(píng)標(biāo)本201405號(hào)在20家醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行了現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)按全國(guó)操作規(guī)程[10]和產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)要求操作，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 同一批次標(biāo)本20家醫(yī)院現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)結(jié)果數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

結(jié)果顯示，微柱法結(jié)果檢出率：36.8%，鹽水試管法檢出率60%，鹽水試管法放入4°C冰箱檢出率95%.采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果表明鹽水試管法（反定型）4°C冰箱15min測(cè)定準(zhǔn)確率顯著高于其它兩種方法(χ2=14.632，P=0.001)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討論

從表2顯示微柱凝膠卡法（36.2%）稍低于鹽水試管法（41.2%）。從表3現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)結(jié)果來(lái)看：鹽水試管法放入4°C冰箱符合率高達(dá)95%，而且凝集明顯強(qiáng)于微柱凝膠卡法和鹽水試管法（常規(guī)實(shí)驗(yàn)室溫度），證實(shí)用鹽水試管法尤其鹽水試管法放入4°C冰箱的方法比微柱卡法檢測(cè)弱抗體更有效。其與多個(gè)文獻(xiàn)資料[2，7－9]相一致。

本統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明，微柱凝膠技術(shù)對(duì)弱ABO抗體反應(yīng)凝集減弱或檢測(cè)不出來(lái)，而用鹽水法及鹽水法放入4°C 15min后結(jié)果檢出率高，其原因可能為，首先是全省各實(shí)驗(yàn)室、儀器、試劑、操作人員及態(tài)度等差別，其次可能因?yàn)榧t細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體反應(yīng)是一種可逆的過(guò)程，這種反應(yīng)取決于抗原抗體的結(jié)合強(qiáng)度，當(dāng)紅細(xì)胞抗原抗體結(jié)合強(qiáng)度弱，在微柱凝膠卡技術(shù)試驗(yàn)過(guò)程中，離心產(chǎn)生的切應(yīng)力超過(guò)親合力，抗體依賴的紅細(xì)胞凝集就被分開(kāi)，從而出現(xiàn)假陰性結(jié)果[11，12]。然而鹽水試管法，紅細(xì)胞抗原抗體發(fā)生反應(yīng)后，由于沒(méi)有受到微柱凝膠卡技術(shù)中切應(yīng)力和紅細(xì)胞非正常負(fù)電荷間的排斥力的影響，紅細(xì)胞抗原抗體結(jié)合后，相對(duì)比較穩(wěn)定[8]。而且微柱凝膠血型卡，由于微柱凝膠孔體積小，加樣量小，反應(yīng)時(shí)間短(立即離心)，當(dāng)血型抗原或抗體水平減低時(shí)，也會(huì)造成不凝集的假陰性結(jié)果[5]。試管法可以在不同溫度放置在不同時(shí)間，反復(fù)離心，這樣能避免凝膠血型卡離心后無(wú)法再用的缺點(diǎn)[5]。

鹽水試管法放入4℃冰箱15min后凝聚會(huì)加強(qiáng)，其原因?yàn)锳BO血型抗體為IgM類抗體，在4℃時(shí)反應(yīng)較強(qiáng)[13]，正反定型試驗(yàn)時(shí)，可以通過(guò)增加反應(yīng)時(shí)間或在4℃下放置5～10min后再離心觀察結(jié)果[14]，可得到更為準(zhǔn)確的血型結(jié)果。

在現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)鹽水試管法4℃冰箱15min中有一家實(shí)驗(yàn)室得出AB型的錯(cuò)誤結(jié)果，因?qū)嶒?yàn)室自配試劑所取紅細(xì)胞懸液只隨機(jī)采取兩人健康成人血液，且配置時(shí)間已過(guò)七天，說(shuō)明血型鑒定試劑的質(zhì)量也是確保實(shí)驗(yàn)正確的重要因素。

正確的ABO血型鑒定是臨床輸血安全的重要保障，在我們平常鑒定血型的工作中應(yīng)該端正態(tài)度，養(yǎng)成認(rèn)真仔細(xì)的工作習(xí)慣，碰到ABO疑難血型最好多種方法驗(yàn)證。

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A

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2016－08－11；

2016－11－25)